醫(yī)院檢驗(yàn)科操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)一、引言醫(yī)院檢驗(yàn)科作為臨床診療的“偵察兵”，其檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性直接影響疾病診斷與治療決策。為規(guī)范檢驗(yàn)操作流程、保障檢驗(yàn)質(zhì)量、降低醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（如ISO____、CLSI指南）及臨床實(shí)踐需求，制定本操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)，適用于各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)科日常工作。二、標(biāo)本采集與處理規(guī)范檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性始于標(biāo)本質(zhì)量，需嚴(yán)格把控采集、運(yùn)輸、預(yù)處理全流程。（一）血液標(biāo)本采集1.患者準(zhǔn)備：根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目要求指導(dǎo)患者準(zhǔn)備（如生化/血脂檢測(cè)需空腹8-12小時(shí)，凝血功能檢測(cè)需停藥72小時(shí)以上等）；避免劇烈運(yùn)動(dòng)、情緒激動(dòng)，采集前靜息15分鐘。2.采集操作：選擇合適采血部位（成人通常為肘前靜脈），止血帶使用不超過(guò)1分鐘，避免反復(fù)穿刺導(dǎo)致溶血?？鼓苓x擇：血常規(guī)用EDTA-K?抗凝管，凝血功能用枸櫞酸鈉（9:1比例），生化/免疫用血清分離管（促凝/分離膠）。采集量：嚴(yán)格按試管刻度或檢驗(yàn)項(xiàng)目要求（如血培養(yǎng)需雙側(cè)雙瓶，每瓶8-10ml），避免標(biāo)本量不足或過(guò)量。3.標(biāo)本處理：血清管：采血后立即顛倒混勻5次（促凝管），靜置30分鐘后離心（3000rpm，10分鐘）分離血清；分離膠管可直接離心?？鼓埽翰裳罅⒓搭嵉够靹?-10次，避免凝血；血常規(guī)標(biāo)本需2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，若延遲需4℃冷藏。避免溶血：若標(biāo)本溶血（血清/血漿呈紅色），需重新采集（溶血可干擾鉀、LDH等項(xiàng)目結(jié)果）。（二）尿液標(biāo)本采集1.常規(guī)尿標(biāo)本：留取清潔中段尿（女性需清潔外陰，男性需清潔尿道口），尿量不少于10ml，2小時(shí)內(nèi)送檢；若無(wú)法及時(shí)檢測(cè)，4℃冷藏不超過(guò)6小時(shí)。2.特殊尿標(biāo)本：24小時(shí)尿：患者晨7點(diǎn)排空膀胱后開始留取，至次日晨7點(diǎn)全部尿液，記錄總尿量后取10ml送檢，需加防腐劑（如甲苯、硼酸，依項(xiàng)目而定）。尿培養(yǎng)：使用無(wú)菌容器，清潔后留取中段尿，立即送檢（室溫不超過(guò)2小時(shí)，4℃不超過(guò)8小時(shí)），避免污染。（三）體液與分泌物標(biāo)本1.腦脊液、胸腹水：無(wú)菌操作采集，立即送檢（室溫1小時(shí)內(nèi)，4℃不超過(guò)2小時(shí)），避免凝固（需加抗凝劑時(shí)提前溝通臨床）。2.痰液標(biāo)本：指導(dǎo)患者深咳留取晨痰（禁食水后），使用無(wú)菌容器，若為培養(yǎng)標(biāo)本需先漱口清潔口腔，避免唾液污染。（四）標(biāo)本運(yùn)輸與接收1.運(yùn)輸條件：普通標(biāo)本室溫（25℃以下）運(yùn)輸；特殊標(biāo)本（如血?dú)狻懺x）需37℃保溫，或低溫（-20℃/-80℃）運(yùn)輸（如基因檢測(cè)標(biāo)本）。2.接收核查：檢驗(yàn)科接收時(shí)核查標(biāo)本標(biāo)簽（患者信息、采集時(shí)間、類型）、外觀（有無(wú)溶血、污染、量不足），不符合要求的標(biāo)本需立即聯(lián)系臨床重新采集，并記錄拒收原因。三、檢驗(yàn)項(xiàng)目操作規(guī)范根據(jù)檢驗(yàn)亞專業(yè)（生化、免疫、微生物、分子生物等）制定差異化操作流程，確保檢測(cè)精準(zhǔn)。（一）生化檢驗(yàn)（以全自動(dòng)生化分析儀為例）1.試劑與校準(zhǔn)：試劑：檢查有效期、批號(hào)，復(fù)溶試劑需注明復(fù)溶時(shí)間，2-8℃保存不超過(guò)說(shuō)明書要求。校準(zhǔn)：新試劑/儀器維護(hù)后需校準(zhǔn)，使用配套校準(zhǔn)品，記錄校準(zhǔn)曲線參數(shù)（如斜率、截距）。2.檢測(cè)流程：標(biāo)本上機(jī)前離心（血清/血漿），避免脂血、溶血標(biāo)本直接檢測(cè)。加樣：確認(rèn)標(biāo)本與試劑體積比例（如1:10），避免氣泡；急診標(biāo)本優(yōu)先檢測(cè)，標(biāo)記“急診”并單獨(dú)處理。孵育與讀數(shù)：嚴(yán)格按儀器程序設(shè)置溫度（37℃±0.1℃）、時(shí)間（如10分鐘），讀數(shù)前確認(rèn)反應(yīng)完全。3.結(jié)果審核：對(duì)比歷史結(jié)果（如糖尿病患者血糖波動(dòng)），異常結(jié)果（如ALT>1000U/L）需復(fù)查標(biāo)本（重新離心、稀釋），結(jié)合臨床信息（如患者是否用藥、有無(wú)肝病史）判斷合理性。（二）免疫檢驗(yàn)（以化學(xué)發(fā)光法為例）1.試劑管理：發(fā)光試劑需2-8℃避光保存，避免反復(fù)凍融；磁珠試劑使用前需混勻。2.檢測(cè)操作：標(biāo)本稀釋：高濃度標(biāo)本（如AFP>1000ng/ml）需按1:10或1:100稀釋，記錄稀釋倍數(shù)。孵育時(shí)間：嚴(yán)格遵循說(shuō)明書（如抗原-抗體反應(yīng)需15分鐘），避免時(shí)間不足導(dǎo)致假陰性。洗板/磁分離：確保洗滌液足量，洗板次數(shù)不少于3次，避免殘留試劑干擾結(jié)果。3.質(zhì)控與校準(zhǔn)：每次檢測(cè)帶高低值質(zhì)控品，質(zhì)控值在控后方可發(fā)報(bào)告；新批號(hào)試劑需重新校準(zhǔn)。（三）微生物檢驗(yàn)1.標(biāo)本接種：血培養(yǎng)：使用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀，按“雙側(cè)雙瓶”原則接種，需氧瓶/厭氧瓶分別標(biāo)注，35℃±1℃培養(yǎng)5天，每日觀察陽(yáng)性報(bào)警。痰培養(yǎng)：接種血平板、巧克力平板、麥康凱平板，35℃±1℃、5%CO?培養(yǎng)18-24小時(shí)，觀察菌落形態(tài)。2.鑒定與藥敏：鑒定：采用生化反應(yīng)（如API試紙條）、質(zhì)譜（MALDI-TOF）或分子生物學(xué)（16SrRNA測(cè)序）方法，確保菌種鑒定準(zhǔn)確率。藥敏：按CLSI標(biāo)準(zhǔn)選擇培養(yǎng)基（如MH瓊脂）、藥敏紙片，35℃±1℃培養(yǎng)16-18小時(shí)，測(cè)量抑菌圈直徑，結(jié)合CLSI折點(diǎn)判斷敏感/耐藥。3.報(bào)告規(guī)范：明確報(bào)告“檢出菌”（如“大腸埃希菌”）、藥敏結(jié)果（如“對(duì)頭孢哌酮敏感”），并備注“標(biāo)本污染可能”（如痰培養(yǎng)檢出表皮葡萄球菌）。（四）分子生物學(xué)檢驗(yàn)（以PCR為例）1.核酸提?。悍謪^(qū)操作：試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)嚴(yán)格分離，避免氣溶膠污染。提取試劑：使用商品化提取試劑盒，按說(shuō)明書操作，記錄加樣時(shí)間、離心參數(shù)。2.擴(kuò)增與檢測(cè)：體系配制：在試劑準(zhǔn)備區(qū)配制反應(yīng)體系，加樣后密封PCR管，避免開蓋污染。擴(kuò)增程序：按試劑盒要求設(shè)置溫度（如逆轉(zhuǎn)錄42℃、變性95℃、退火55℃）、循環(huán)數(shù)，擴(kuò)增后立即檢測(cè)，避免產(chǎn)物暴露。3.結(jié)果判讀：陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)參（如β-actin）均需有效，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。定量PCR需記錄Ct值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算拷貝數(shù)，結(jié)果需注明“定量值僅供參考，需結(jié)合臨床”。四、質(zhì)量控制管理檢驗(yàn)質(zhì)量是科室核心，需通過(guò)室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)、流程優(yōu)化實(shí)現(xiàn)全程把控。（一）室內(nèi)質(zhì)控1.質(zhì)控品選擇：覆蓋檢測(cè)項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平（如血糖5.6mmol/L、11.1mmol/L），至少包含高低兩個(gè)濃度水平。2.操作流程：頻率：每批次檢測(cè)帶質(zhì)控品（如生化儀每日開機(jī)后先做質(zhì)控），急診標(biāo)本單獨(dú)檢測(cè)時(shí)需補(bǔ)做質(zhì)控。質(zhì)控圖：采用Levey-Jennings圖，標(biāo)記均值（μ）、標(biāo)準(zhǔn)差（σ），質(zhì)控值超出±3σ或違反Westgard多規(guī)則（如1??、2??）時(shí)判定失控。3.失控處理：立即停止發(fā)報(bào)告，查找原因（如試劑失效、儀器故障、加樣錯(cuò)誤）。處理措施：重新校準(zhǔn)儀器、更換試劑、維護(hù)設(shè)備，重新檢測(cè)質(zhì)控品，直至在控后重新檢測(cè)患者標(biāo)本。（二）室間質(zhì)評(píng)1.參與要求：每年參加國(guó)家級(jí)/省級(jí)室間質(zhì)評(píng)（如衛(wèi)健委臨檢中心EQA），覆蓋所有開展項(xiàng)目。2.標(biāo)本處理：按質(zhì)評(píng)要求處理標(biāo)本（如避免凍融、及時(shí)檢測(cè)），上報(bào)結(jié)果前審核（如與同組實(shí)驗(yàn)室結(jié)果對(duì)比）。3.結(jié)果分析：對(duì)質(zhì)評(píng)不合格項(xiàng)目，分析原因（如方法學(xué)差異、試劑批號(hào)更換），制定改進(jìn)措施（如優(yōu)化操作流程、加強(qiáng)人員培訓(xùn)）。（三）流程優(yōu)化與持續(xù)改進(jìn)1.差錯(cuò)分析：每月召開質(zhì)控會(huì)議，分析檢驗(yàn)差錯(cuò)（如標(biāo)本錯(cuò)誤、結(jié)果報(bào)告延遲），制定PDCA循環(huán)改進(jìn)方案。2.人員培訓(xùn)：新員工需通過(guò)操作考核（如盲樣檢測(cè)、質(zhì)控處理），每年參加繼續(xù)教育（如行業(yè)新指南、儀器操作培訓(xùn)）。五、設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)檢驗(yàn)儀器是結(jié)果準(zhǔn)確性的硬件保障，需建立“日常維護(hù)-定期校準(zhǔn)-故障搶修”體系。（一）日常維護(hù)1.每日維護(hù)：開機(jī)前：檢查試劑余量、廢液桶容量，清潔儀器表面（如生化儀加樣針外壁），確認(rèn)電源/氣路正常。關(guān)機(jī)后：執(zhí)行儀器自帶維護(hù)程序（如沖洗管路、清潔反應(yīng)杯），記錄維護(hù)時(shí)間。2.每周維護(hù)：清潔加樣針內(nèi)壁（使用專用清洗液），檢查管路有無(wú)漏液，校準(zhǔn)加樣針位置（如生化儀加樣針與反應(yīng)杯對(duì)齊）。（二）定期校準(zhǔn)與檢定1.校準(zhǔn)：每月：使用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器（如生化儀校準(zhǔn)光密度、加樣體積），記錄校準(zhǔn)數(shù)據(jù)（如斜率、截距）。每半年：校準(zhǔn)低溫冰箱（-20℃/-80℃）、孵箱（37℃）溫度，使用校準(zhǔn)過(guò)的溫度計(jì)驗(yàn)證。2.計(jì)量檢定：每年聯(lián)系計(jì)量部門（如當(dāng)?shù)刭|(zhì)監(jiān)局）對(duì)關(guān)鍵設(shè)備（如天平、離心機(jī)）進(jìn)行檢定，獲取檢定證書。（三）故障處理與耗材管理1.故障處理：儀器故障時(shí)（如生化儀報(bào)警“光路異?！保?，立即聯(lián)系工程師，同時(shí)啟用備用設(shè)備（如手工法或備用儀器），記錄故障時(shí)間、處理措施。2.耗材管理：試劑：建立“先進(jìn)先出”臺(tái)賬，記錄批號(hào)、有效期，冷鏈運(yùn)輸（2-8℃），過(guò)期試劑及時(shí)報(bào)廢。耗材：如吸頭、反應(yīng)杯，使用前檢查無(wú)破損，一次性耗材禁止重復(fù)使用。六、安全與感染防控檢驗(yàn)科涉及生物樣本、化學(xué)試劑，需嚴(yán)格執(zhí)行安全操作，預(yù)防職業(yè)暴露與環(huán)境污染。（一）個(gè)人防護(hù)1.常規(guī)防護(hù)：操作時(shí)戴手套（接觸標(biāo)本后及時(shí)更換）、口罩（N95處理高風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)本）、護(hù)目鏡（防止噴濺），穿防滲實(shí)驗(yàn)服。2.特殊防護(hù)：處理高傳染性標(biāo)本（如HIV、結(jié)核）時(shí)，需在生物安全柜內(nèi)操作，穿防護(hù)服、戴面屏。（二）標(biāo)本與廢物處理1.標(biāo)本處理：所有標(biāo)本視為“感染性物質(zhì)”，離心時(shí)使用密封蓋，避免氣溶膠；廢棄標(biāo)本需高壓滅菌（121℃，30分鐘）后處理。2.醫(yī)療廢物：分類：銳器（針頭、玻片）放入利器盒，感染性廢物（標(biāo)本、試劑）放入黃色垃圾袋，化學(xué)廢物（如二甲苯）放入專用容器。處置：每日由專人收集，交由有資質(zhì)的醫(yī)療廢物公司處理，記錄轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間、重量。（三）職業(yè)暴露處理1.銳器傷：立即擠出傷口血液，流動(dòng)水沖洗5分鐘，碘伏消毒，上報(bào)院感科，根據(jù)暴露源（如HBV陽(yáng)性標(biāo)本）評(píng)估是否需接種疫苗或使用阻斷藥物。2.化學(xué)灼傷：皮膚接觸強(qiáng)酸/堿時(shí)，立即用大量清水沖洗（至少15分鐘），眼部灼傷需用洗眼器沖洗，及時(shí)就醫(yī)。七、文檔與報(bào)告管理檢驗(yàn)記錄與報(bào)告是醫(yī)療糾紛的重要證據(jù)，需確保完整、可追溯。（一）檢驗(yàn)記錄1.紙質(zhì)記錄：患者信息（姓名、ID、床號(hào)）、標(biāo)本信息（采集時(shí)間、類型、外觀）、操作記錄（試劑批號(hào)、儀器參數(shù)、質(zhì)控結(jié)果）、結(jié)果審核（審核人、時(shí)間）需逐項(xiàng)填寫，禁止涂改（如需修改，劃雙線并簽名）。2.電子記錄：LIS系統(tǒng)需自動(dòng)記錄操作時(shí)間、人員，定期備份數(shù)據(jù)（每周至少一次），確保數(shù)據(jù)安全（如設(shè)置權(quán)限，僅授權(quán)人員可修改）。（二）報(bào)告審核與發(fā)放1.審核要求：常規(guī)報(bào)告：雙人審核（操作者與審核者），確認(rèn)結(jié)果與臨床符合（如腫瘤標(biāo)志物升高需結(jié)合影像）。危急值報(bào)告：立即電話通知臨床（記錄通知時(shí)間、接收人），并在LIS系統(tǒng)標(biāo)記“已通知”，30分鐘內(nèi)追蹤臨床反饋。2.報(bào)告發(fā)放：紙質(zhì)報(bào)告需蓋章，電子報(bào)告需設(shè)置查詢權(quán)