淮安市中醫(yī)院蛋白提取技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取實(shí)驗(yàn)時(shí)，最適合用于分離純化目的的層析技術(shù)是？A.凝膠過(guò)濾層析B.離子交換層析C.親和層析D.凝膠電泳2.提取淮安地區(qū)特色植物（如射干）蛋白時(shí)，若需去除多糖干擾，常用的預(yù)處理的最佳方法是？A.高溫煮沸B.酶解（如纖維素酶）C.乙醇沉淀D.pH調(diào)節(jié)至強(qiáng)酸3.在淮安市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中，若需快速檢測(cè)蛋白濃度，首選的試劑是？A.Lowry試劑B.BCA試劑C.Bradford試劑D.SDS法4.提取淮安地區(qū)水產(chǎn)品（如淮河鯉魚）肌肉蛋白時(shí)，最佳pH環(huán)境通常是？A.pH2.0-3.0B.pH5.0-6.0C.pH7.0-8.0D.pH9.0-10.05.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，若樣品含高鹽濃度，需先進(jìn)行？A.超聲波處理B.離子交換柱預(yù)處理C.鹽析D.超濾脫鹽6.提取淮安地區(qū)中草藥（如薄荷）蛋白時(shí)，為避免酶降解，需加入哪種蛋白酶抑制劑？A.PMSFB.EDTAC.NaN3D.Avitail7.在淮安市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中，用于蛋白復(fù)性時(shí)，常用的緩沖液成分是？A.甘氨酸B.尿素C.Tris-HClD.DTT8.提取淮安地區(qū)昆蟲（如家蠶）絲蛋白時(shí)，最佳裂解條件通常是？A.高溫高壓B.低溫研磨C.酶解（如蛋白酶K）D.強(qiáng)酸溶解9.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，若需避免脂質(zhì)干擾，需加入？A.CholateB.SDSC.TritonX-100D.NP-4010.提取淮安地區(qū)食用菌（如香菇）蛋白時(shí)，為提高提取率，最佳方法是？A.乙醇沉淀B.超聲波裂解C.高鹽提取D.離心沉淀二、多選題（每題3分，共10題）1.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，以下哪些方法可用于蛋白純化？A.凝膠過(guò)濾層析B.親和層析C.離子交換層析D.SDS電泳2.提取淮安地區(qū)植物（如淮安菱角）蛋白時(shí)，以下哪些預(yù)處理方法可有效去除雜質(zhì)？A.磷酸緩沖液洗滌B.酶解（如蛋白酶K）C.乙醇沉淀D.高溫煮沸3.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，以下哪些試劑可用于蛋白定量？A.Lowry試劑B.BCA試劑C.Bradford試劑D.尿素溶液4.提取淮安地區(qū)動(dòng)物（如淮豬）血漿蛋白時(shí)，以下哪些步驟需注意？A.抗凝處理B.高速離心C.酶解處理D.超濾脫鹽5.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，以下哪些蛋白酶抑制劑可有效避免蛋白降解？A.PMSFB.EDTAC.NaN3D.Avitail6.提取淮安地區(qū)中草藥（如白菊花）蛋白時(shí)，以下哪些方法可提高提取率？A.低溫研磨B.酶解（如纖維素酶）C.高鹽提取D.超聲波裂解7.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，以下哪些緩沖液成分可用于蛋白復(fù)性？A.Tris-HClB.DTTC.尿素D.甘氨酸8.提取淮安地區(qū)昆蟲（如蝗蟲）蛋白時(shí)，以下哪些裂解方法可有效提高提取率？A.高溫高壓B.低溫研磨C.酶解（如蛋白酶K）D.強(qiáng)酸溶解9.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，以下哪些試劑可用于去除脂質(zhì)干擾？A.CholateB.SDSC.TritonX-100D.NP-4010.提取淮安地區(qū)食用菌（如金針菇）蛋白時(shí)，以下哪些方法可有效去除多糖干擾？A.磷酸緩沖液洗滌B.酶解（如纖維素酶）C.乙醇沉淀D.高溫煮沸三、判斷題（每題2分，共10題）1.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，pH值越高，越有利于蛋白溶解。（×）2.提取淮安地區(qū)植物（如枸杞）蛋白時(shí)，需避免高溫處理，以防蛋白變性。（√）3.在淮安市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中，BCA試劑適用于檢測(cè)堿性蛋白。（×）4.提取淮安地區(qū)動(dòng)物（如淮安鵝）血漿蛋白時(shí)，需先進(jìn)行抗凝處理。（√）5.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，DTT可有效避免蛋白氧化。（√）6.提取淮安地區(qū)中草藥（如丹參）蛋白時(shí)，酶解處理可提高提取率。（√）7.在淮安市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中，SDS可用于蛋白純化。（×）8.提取淮安地區(qū)昆蟲（如家蠶）絲蛋白時(shí)，強(qiáng)酸溶解是最佳方法。（×）9.在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，高鹽環(huán)境可有效沉淀蛋白。（√）10.提取淮安地區(qū)食用菌（如香菇）蛋白時(shí)，需避免脂質(zhì)干擾。（√）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共5題）1.簡(jiǎn)述在淮安市中醫(yī)院提取淮安地區(qū)特色植物（如射干）蛋白時(shí)，如何去除多糖干擾？2.描述在淮安市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中，如何檢測(cè)蛋白提取液的純度？3.解釋在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，為何需加入蛋白酶抑制劑？4.說(shuō)明在淮安市中醫(yī)院提取淮安地區(qū)動(dòng)物（如淮豬）血漿蛋白時(shí)，如何避免脂質(zhì)干擾？5.闡述在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白復(fù)性時(shí)，為何需使用特定的緩沖液成分？五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合淮安市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室條件，論述提取淮安地區(qū)食用菌（如金針菇）蛋白的最佳工藝流程。2.分析在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，如何優(yōu)化提取條件以提高蛋白回收率和純度。答案與解析一、單選題答案1.C2.B3.B4.B5.D6.A7.D8.B9.A10.B二、多選題答案1.A,B,C2.A,B,C3.A,B,C4.A,B,D5.A,D6.A,B,D7.A,B,D8.B,C9.A,C,D10.B,C三、判斷題答案1.×2.√3.×4.√5.√6.√7.×8.×9.√10.√四、簡(jiǎn)答題解析1.去除多糖干擾：在淮安市中醫(yī)院提取射干蛋白時(shí)，可通過(guò)酶解（如纖維素酶）或添加多聚糖酶（如木瓜蛋白酶）降解多糖；或使用凝膠過(guò)濾層析（GelFiltrationChromatography）分離蛋白與多糖；此外，預(yù)處理的磷酸緩沖液洗滌也可有效去除部分多糖。2.檢測(cè)蛋白純度：在淮安市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中，可通過(guò)SDS電泳檢測(cè)蛋白純度，觀察主帶是否單一、無(wú)雜帶；或使用WesternBlot結(jié)合特異性抗體檢測(cè)目標(biāo)蛋白；此外，Bradford法檢測(cè)蛋白濃度可輔助判斷純度。3.加入蛋白酶抑制劑：在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白提取時(shí)，為避免蛋白被自身或環(huán)境中的蛋白酶降解，需加入蛋白酶抑制劑（如PMSF、EDTA或NaN3）；特別是提取植物或動(dòng)物蛋白時(shí)，蛋白酶活性較高，必須添加抑制劑。4.避免脂質(zhì)干擾：在淮安市中醫(yī)院提取淮豬血漿蛋白時(shí)，可通過(guò)添加去脂試劑（如Cholate或TritonX-100）溶解脂質(zhì)；或通過(guò)高速離心（10,000rpm，4℃）去除脂質(zhì)沉淀；此外，超濾脫鹽也可輔助去除脂質(zhì)。5.蛋白復(fù)性緩沖液：在淮安市中醫(yī)院進(jìn)行蛋白復(fù)性時(shí)，需使用還原性緩沖液（如含DTT或β-巰基乙醇）破壞二硫鍵，并加入非還原性緩沖液（如Tris-HCl）穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)；同時(shí)，甘氨酸等成分可輔助提高復(fù)性效率。五、論述題解析1.金針菇蛋白提取工藝流程：-預(yù)處理：清洗金針菇，去除雜質(zhì)；低溫研磨（液氮輔助），加入緩沖液（pH7.4，含DTT和PMSF）；-裂解：超聲波裂解（40kHz，4℃）；-離心：高速離心（12,000rpm，4℃），取上清；-純化：采用親和層析（如Ni-NTA柱）或凝膠過(guò)濾層析（GelFiltration）；-復(fù)性：使用含DTT的復(fù)性緩沖液，逐步去除尿素；-檢測(cè)：SDS和WesternBlot驗(yàn)證純度。2.優(yōu)化蛋白提取條件：-pH值：根據(jù)目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)調(diào)整緩沖液pH（如淮安地區(qū)植物