九江市人民醫(yī)院分子診斷技師資格認(rèn)證一、單選題（共10題，每題2分，計20分）1.在九江市人民醫(yī)院進(jìn)行PCR檢測時，樣本RNA的提取首選哪種方法？A.苯酚-氯仿法B.離子交換柱法C.試劑盒法（如QIAGENRNeasyMiniKit）D.氯化銫密度梯度離心法2.九江市人民醫(yī)院某科室進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物檢測，下列哪種分子技術(shù)最適用于檢測KRAS基因的G12D突變？A.Sanger測序B.數(shù)字PCR（dPCR）C.限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）D.基因芯片技術(shù)3.九江市人民醫(yī)院檢驗科在處理COVID-19陽性樣本時，必須優(yōu)先考慮哪種生物安全等級操作？A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-44.在九江市人民醫(yī)院進(jìn)行熒光定量PCR時，若出現(xiàn)Ct值過高，可能的原因是？A.引物二聚體形成過多B.樣本RNA降解嚴(yán)重C.檢測區(qū)域存在引物脫靶D.PCR反應(yīng)體系pH值過高5.九江市人民醫(yī)院某項目需檢測血液樣本中的微小RNA（miRNA），以下哪種試劑或方法最常用？A.蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot）B.RT-qPCRC.原位雜交（ISH）D.流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry）6.九江市人民醫(yī)院病理科進(jìn)行FISH檢測時，以下哪種熒光標(biāo)記探針最適用于檢測染色體數(shù)目異常？A.雙色探針（雙色探針）B.多色探針（多色探針）C.完整染色體涂片探針D.原位雜交信號放大探針7.在九江市人民醫(yī)院進(jìn)行基因分型時，Sanger測序與NGS技術(shù)的核心區(qū)別在于？A.測序平臺不同B.數(shù)據(jù)分析復(fù)雜度不同C.精度不同D.適用樣本類型不同8.九江市人民醫(yī)院檢驗科進(jìn)行基因突變檢測時，以下哪種方法可同時檢測多種基因的多種突變？A.ARMS-PCRB.數(shù)字PCR（dPCR）C.下一代測序（NGS）D.基因芯片技術(shù)9.九江市人民醫(yī)院某科室需檢測腫瘤患者的循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA），以下哪種方法靈敏度最高？A.Sanger測序B.數(shù)字PCR（dPCR）C.限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）D.基因芯片技術(shù)10.九江市人民醫(yī)院進(jìn)行RNA干擾實驗時，最常用的siRNA長度是多少？A.18-25ntB.20-25ntC.22-25ntD.25-30nt二、多選題（共5題，每題3分，計15分）1.九江市人民醫(yī)院進(jìn)行基因表達(dá)譜檢測時，以下哪些屬于高通量測序技術(shù)（HTS）的優(yōu)勢？A.通量高B.成本低C.精度高D.可檢測未知序列2.九江市人民醫(yī)院檢驗科在處理臨床樣本前，需進(jìn)行哪些樣本前處理步驟？A.樣本采集B.樣本保存C.樣本核酸提取D.樣本滅活3.九江市人民醫(yī)院某科室進(jìn)行液體活檢時，以下哪些指標(biāo)可能被檢測？A.細(xì)胞-freeDNA（cfDNA）B.腫瘤細(xì)胞DNA（tcDNA）C.微小體（Exosomes）D.空心細(xì)胞（Halocells）4.九江市人民醫(yī)院進(jìn)行熒光定量PCR時，以下哪些因素會影響擴增效率？A.引物設(shè)計質(zhì)量B.dNTP濃度C.DNA聚合酶活性D.退火溫度5.九江市人民醫(yī)院病理科進(jìn)行FISH檢測時，以下哪些屬于FISH技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域？A.染色體異常檢測B.基因定位C.融合基因檢測D.mRNA表達(dá)檢測三、判斷題（共10題，每題1分，計10分）1.九江市人民醫(yī)院進(jìn)行基因檢測時，所有樣本均需進(jìn)行內(nèi)對照（如ACTB）的驗證。（√/×）2.數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)通過分區(qū)反應(yīng)，可直接定量目標(biāo)核酸分子。（√/×）3.RNA提取過程中，使用苯酚-氯仿法提取RNA時，需避免苯酚殘留。（√/×）4.九江市人民醫(yī)院進(jìn)行基因分型時，Sanger測序適用于檢測小片段基因突變。（√/×）5.熒光定量PCR的Ct值越高，表示樣本中目標(biāo)核酸分子濃度越高。（√/×）6.FISH技術(shù)可用于檢測組織切片中的基因擴增或缺失。（√/×）7.高通量測序（NGS）技術(shù)可同時檢測數(shù)千個基因的突變。（√/×）8.循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）檢測可用于腫瘤的動態(tài)監(jiān)測。（√/×）9.RNA干擾（RNAi）技術(shù)通過降解mRNA抑制基因表達(dá)。（√/×）10.九江市人民醫(yī)院進(jìn)行基因檢測時，所有樣本均需進(jìn)行重復(fù)實驗以驗證結(jié)果。（√/×）四、簡答題（共5題，每題5分，計25分）1.簡述九江市人民醫(yī)院進(jìn)行RNA提取時應(yīng)注意的關(guān)鍵步驟及質(zhì)量控制方法。2.簡述數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)在臨床檢測中的優(yōu)勢及其原理。3.簡述九江市人民醫(yī)院檢驗科進(jìn)行基因分型時，如何避免假陽性或假陰性結(jié)果？4.簡述FISH技術(shù)在九江市人民醫(yī)院病理科的應(yīng)用場景及注意事項。5.簡述循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）檢測在腫瘤精準(zhǔn)治療中的意義。五、論述題（共2題，每題10分，計20分）1.結(jié)合九江市人民醫(yī)院的實際需求，論述高通量測序（NGS）技術(shù)在腫瘤精準(zhǔn)診斷中的應(yīng)用價值及挑戰(zhàn)。2.結(jié)合臨床案例，論述九江市人民醫(yī)院如何優(yōu)化分子診斷技術(shù)以提高檢測準(zhǔn)確性和效率。答案及解析一、單選題答案及解析1.C解析：九江市人民醫(yī)院進(jìn)行PCR檢測時，樣本RNA的提取首選試劑盒法（如QIAGENRNeasyMiniKit），因其操作簡便、高效且適用于多種樣本類型。苯酚-氯仿法較繁瑣且易降解RNA；離子交換柱法主要用于DNA提??；氯化銫密度梯度離心法適用于分離復(fù)雜RNA混合物，但操作復(fù)雜。2.B解析：數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)具有極高的靈敏度和特異性，適用于檢測低頻突變（如KRASG12D），且可精確定量。Sanger測序適用于小片段測序但靈敏度有限；RFLP依賴酶切位點，不適用于所有基因檢測；基因芯片技術(shù)適用于多基因檢測但無法精確定量。3.B解析：九江市人民醫(yī)院處理COVID-19陽性樣本時，必須優(yōu)先考慮BSL-2生物安全等級操作，因該病毒屬于β冠狀病毒，致病性較強，但未達(dá)到烈性傳染病級別。BSL-1適用于低風(fēng)險病原體，BSL-3適用于高致病性病原體，BSL-4適用于烈性傳染病。4.B解析：Ct值過高通常表示樣本中目標(biāo)核酸分子濃度低，可能原因是RNA降解嚴(yán)重，導(dǎo)致模板量不足。引物二聚體形成過多會干擾擴增但通常導(dǎo)致Ct值降低；引物脫靶會干擾特異性擴增；pH值過高會影響酶活性，但通常導(dǎo)致Ct值升高。5.B解析：九江市人民醫(yī)院檢測血液樣本中的miRNA時，RT-qPCR是最常用的方法，因其靈敏度高、特異性強且可定量。蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot）檢測蛋白質(zhì)；原位雜交（ISH）主要用于組織切片；流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry）適用于細(xì)胞表面標(biāo)記檢測。6.A解析：雙色探針最適用于檢測染色體數(shù)目異常，如三體綜合征或單體綜合征，可通過探針信號位置判斷異常。多色探針用于復(fù)雜核型分析；完整染色體涂片探針用于全基因組FISH；原位雜交信號放大探針提高信號強度。7.A解析：Sanger測序與NGS技術(shù)的核心區(qū)別在于測序平臺，Sanger測序為第一代測序技術(shù)，單通道測序；NGS為第二代測序技術(shù)，高通量并行測序。二者數(shù)據(jù)復(fù)雜度、精度、樣本類型均有差異，但核心區(qū)別是平臺。8.C解析：下一代測序（NGS）技術(shù)可同時檢測多種基因的多種突變，通量極高。ARMS-PCR、數(shù)字PCR、基因芯片技術(shù)均存在檢測靶點數(shù)量限制。9.B解析：數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)通過分區(qū)反應(yīng)，可將樣本稀釋至單分子水平，靈敏度高，適用于ctDNA檢測。Sanger測序、RFLP、基因芯片技術(shù)靈敏度較低。10.C解析：siRNA長度通常為22-25nt，過長或過短均會影響干擾效率。18-25nt、20-25nt、25-30nt均不符合標(biāo)準(zhǔn)長度。二、多選題答案及解析1.A、C、D解析：高通量測序（HTS）的優(yōu)勢在于通量高、精度高、可檢測未知序列。但成本相對較高，不屬于優(yōu)勢。2.A、B、C、D解析：樣本前處理包括采集、保存、核酸提取、滅活等步驟，均為必要流程。3.A、B、C解析：液體活檢主要檢測cfDNA、tcDNA、微小體等，空心細(xì)胞（Halocells）不屬于液體活檢常規(guī)指標(biāo)。4.A、B、C、D解析：引物設(shè)計、dNTP濃度、DNA聚合酶活性、退火溫度均影響PCR擴增效率。5.A、B、C解析：FISH技術(shù)可用于染色體異常檢測、基因定位、融合基因檢測，但mRNA表達(dá)檢測通常用RT-qPCR或ISH。三、判斷題答案及解析1.√解析：所有基因檢測樣本均需進(jìn)行內(nèi)對照驗證，排除假陰性。2.√解析：數(shù)字PCR通過分區(qū)反應(yīng)，可直接定量目標(biāo)核酸分子。3.√解析：苯酚-氯仿法提取RNA時，需避免苯酚殘留，以免降解RNA。4.√解析：Sanger測序適用于小片段基因突變檢測。5.×解析：Ct值越高，表示樣本中目標(biāo)核酸分子濃度越低。6.√解析：FISH技術(shù)可用于檢測組織切片中的基因擴增或缺失。7.√解析：NGS技術(shù)可同時檢測數(shù)千個基因的突變。8.√解析：ctDNA檢測可用于腫瘤的動態(tài)監(jiān)測。9.√解析：RNA干擾（RNAi）技術(shù)通過降解mRNA抑制基因表達(dá)。10.×解析：并非所有樣本均需重復(fù)實驗，需根據(jù)實驗設(shè)計和結(jié)果判斷。四、簡答題答案及解析1.RNA提取關(guān)鍵步驟及質(zhì)量控制方法-關(guān)鍵步驟：①樣本裂解（如使用TRIzol或試劑盒）；②去除蛋白質(zhì)（如苯酚-氯仿抽提或試劑盒純化）；③去除多糖/酚類雜質(zhì)（如氯仿洗滌）；④RNA沉淀（如異丙醇沉淀）；⑤溶解RNA（如使用無RNase水）。-質(zhì)量控制：①OD260/280比值（1.8-2.0）；②瓊脂糖凝膠電泳觀察28S/18SrRNA條帶；③AgilentBioanalyzer檢測RNA完整性（RIN值≥7）；④無RNase污染（使用DEPC水處理所有試劑）。2.數(shù)字PCR（dPCR）優(yōu)勢及原理-優(yōu)勢：①超靈敏，可檢測單分子水平目標(biāo)核酸；②高精度，可精確定量；③適用范圍廣，可檢測拷貝數(shù)變異（CNV）、突變等。-原理：將樣本核酸隨機分配到多個微反應(yīng)單元中，部分單元含目標(biāo)核酸，通過PCR擴增后熒光檢測，通過泊松統(tǒng)計計算原始濃度。3.避免假陽性/假陰性結(jié)果的方法-避免假陽性：①優(yōu)化引物設(shè)計，避免非特異性結(jié)合；②嚴(yán)格質(zhì)控試劑和設(shè)備；③設(shè)置陰性對照（無模板對照）。-避免假陰性：①確保樣本質(zhì)量，避免降解；②優(yōu)化PCR條件（退火溫度、鎂離子濃度）；③設(shè)置陽性對照（已知陽性樣本）。4.FISH技術(shù)應(yīng)用場景及注意事項-應(yīng)用場景：①染色體異常檢測（如Down綜合征）；②基因定位；③融合基因檢測（如MLH1/MSH2在結(jié)直腸癌中）；④指導(dǎo)靶向治療（如EGFR擴增）。-注意事項：①探針選擇需針對目標(biāo)區(qū)域；②避免雜交信號重疊；③嚴(yán)格洗滌條件，減少非特異性結(jié)合；④顯微鏡操作需規(guī)范。5.ctDNA檢測在腫瘤精準(zhǔn)治療中的意義-意義：①實時監(jiān)測腫瘤負(fù)荷和藥物療效；②指導(dǎo)治療方案調(diào)整；③早期復(fù)發(fā)預(yù)警；④遺傳性腫瘤篩查。-優(yōu)勢：無創(chuàng)或微創(chuàng)，可多次檢測，反映腫瘤動態(tài)變化。五、論述題答案及解析1.NGS技術(shù)在腫瘤精準(zhǔn)診斷中的應(yīng)用價值及挑戰(zhàn)-應(yīng)用價值：①全基因組/外顯子組測序可發(fā)現(xiàn)驅(qū)動基因突變（如EGFR、KRAS）；②多癌種聯(lián)合檢測提高陽性率；③液體活檢（ctDNA）實現(xiàn)無創(chuàng)診斷；④指導(dǎo)靶向和免疫治療。-挑戰(zhàn)：①成本高，數(shù)據(jù)量龐大；②需要專業(yè)生物信息學(xué)