南京市人民醫(yī)院病理室間質(zhì)評(píng)考核一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20題）1.下列哪種方法是目前臨床病理檢驗(yàn)中最常用的DNA測(cè)序技術(shù)？A.Sanger測(cè)序法B.熒光原位雜交（FISH）C.數(shù)字PCRD.基因芯片技術(shù)2.在處理石蠟包埋的組織樣本時(shí)，以下哪項(xiàng)操作可能影響免疫組化（IHC）結(jié)果的準(zhǔn)確性？A.適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間B.使用高質(zhì)量的抗原修復(fù)液C.樣本在4℃冰箱中保存超過1周D.嚴(yán)格控制孵育溫度3.以下哪種染色方法主要用于觀察細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)？A.HE染色B.Masson三色染色C.免疫熒光染色（抗F-actin抗體）D.periodicacid-Schiff（PAS）染色4.在進(jìn)行熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，以下哪項(xiàng)指標(biāo)最能反映雜交效率？A.熒光信號(hào)強(qiáng)度B.滴定倍數(shù)（dilutionfactor）C.樣本固定時(shí)間D.封閉劑種類5.以下哪種方法常用于評(píng)估腫瘤組織的微血管密度（MVD）？A.TUNEL染色B.免疫組化（抗CD31抗體）C.特殊染色（如油紅O）D.電子顯微鏡觀察6.石蠟切片在存放過程中，以下哪種條件最容易導(dǎo)致抗原失活？A.2℃-8℃冷藏B.避光保存C.甲醛溶液浸泡D.高濕度環(huán)境7.在分子病理檢測(cè)中，以下哪種技術(shù)常用于檢測(cè)基因擴(kuò)增？A.Sanger測(cè)序B.FISHC.數(shù)字PCRD.熒光定量PCR8.以下哪種染色方法主要用于觀察細(xì)胞外基質(zhì)成分？A.HE染色B.Masson三色染色C.免疫組化（抗Vimentin抗體）D.periodicacid-Schiff（PAS）染色9.在進(jìn)行分子病理檢測(cè)時(shí)，以下哪項(xiàng)操作最能減少假陰性結(jié)果？A.優(yōu)化PCR退火溫度B.使用過量的引物C.延長(zhǎng)擴(kuò)增時(shí)間D.選擇高純度的DNA提取試劑盒10.以下哪種方法常用于檢測(cè)腫瘤組織的Ki-67表達(dá)？A.TUNEL染色B.免疫組化（抗Ki-67抗體）C.FISHD.數(shù)字PCR二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共10題）1.以下哪些因素會(huì)影響免疫組化（IHC）結(jié)果的準(zhǔn)確性？A.抗體滴度B.孵育溫度C.樣本固定時(shí)間D.封閉劑種類E.切片厚度2.在進(jìn)行熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，以下哪些操作能提高檢測(cè)靈敏度？A.優(yōu)化探針濃度B.延長(zhǎng)雜交時(shí)間C.使用高分辨率的熒光顯微鏡D.選擇合適的封閉劑E.避光保存樣本3.以下哪些染色方法常用于觀察腫瘤組織的微血管密度（MVD）？A.免疫組化（抗CD31抗體）B.特殊染色（如油紅O）C.TUNEL染色D.電子顯微鏡觀察E.免疫熒光（抗CD34抗體）4.在處理石蠟包埋的組織樣本時(shí)，以下哪些操作能減少抗原失活？A.快速冷凍樣本B.適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間C.使用高質(zhì)量的抗原修復(fù)液D.避光保存樣本E.嚴(yán)格控制孵育溫度5.以下哪些技術(shù)常用于檢測(cè)腫瘤組織的基因擴(kuò)增？A.Sanger測(cè)序B.FISHC.數(shù)字PCRD.熒光定量PCRE.基因芯片技術(shù)6.在進(jìn)行分子病理檢測(cè)時(shí)，以下哪些操作能減少假陽(yáng)性結(jié)果？A.優(yōu)化PCR退火溫度B.使用過量的引物C.選擇高純度的DNA提取試劑盒D.適當(dāng)降低PCR循環(huán)數(shù)E.使用內(nèi)對(duì)照基因7.以下哪些染色方法常用于觀察細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)？A.HE染色B.Masson三色染色C.免疫熒光（抗F-actin抗體）D.periodicacid-Schiff（PAS）染色E.免疫組化（抗Vimentin抗體）8.在進(jìn)行熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，以下哪些因素會(huì)影響雜交效率？A.探針濃度B.雜交溫度C.樣本固定時(shí)間D.封閉劑種類E.顯微鏡質(zhì)量9.以下哪些方法常用于檢測(cè)腫瘤組織的Ki-67表達(dá)？A.TUNEL染色B.免疫組化（抗Ki-67抗體）C.FISHD.數(shù)字PCRE.熒光定量PCR10.在處理石蠟包埋的組織樣本時(shí)，以下哪些操作能提高染色效果？A.適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間B.使用高質(zhì)量的抗原修復(fù)液C.避光保存樣本D.嚴(yán)格控制孵育溫度E.快速冷凍樣本三、判斷題（每題2分，共20題）1.免疫組化（IHC）檢測(cè)時(shí)，抗體滴度過高會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。（×）2.熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，探針濃度越高，雜交效率越好。（×）3.石蠟切片在存放過程中，高濕度環(huán)境有助于保持抗原活性。（×）4.數(shù)字PCR技術(shù)常用于檢測(cè)基因擴(kuò)增，其靈敏度和特異性均優(yōu)于熒光定量PCR。（√）5.TUNEL染色主要用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡，其原理是基于DNA鏈斷裂。（√）6.免疫組化（IHC）檢測(cè)時(shí)，封閉劑種類對(duì)結(jié)果影響較小。（×）7.熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，避光保存樣本有助于提高熒光信號(hào)強(qiáng)度。（√）8.石蠟切片在存放過程中，適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間有助于提高染色效果。（×）9.免疫熒光染色常用于觀察細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，其原理與免疫組化類似。（√）10.分子病理檢測(cè)時(shí)，內(nèi)對(duì)照基因的使用能有效減少假陰性結(jié)果。（√）11.熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，探針濃度過高會(huì)導(dǎo)致背景熒光增強(qiáng)。（√）12.石蠟切片在存放過程中，2℃-8℃冷藏有助于保持抗原活性。（×）13.免疫組化（IHC）檢測(cè)時(shí)，抗體滴度過低會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。（√）14.數(shù)字PCR技術(shù)常用于檢測(cè)基因表達(dá)，其原理是基于熒光信號(hào)的累積。（√）15.TUNEL染色主要用于檢測(cè)細(xì)胞增殖，其原理是基于DNA合成。（×）16.熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，雜交溫度過高會(huì)導(dǎo)致探針與靶序列結(jié)合率降低。（√）17.石蠟切片在存放過程中，避光保存有助于減少抗原失活。（√）18.免疫熒光染色常用于觀察細(xì)胞外基質(zhì)成分，其原理與免疫組化類似。（×）19.分子病理檢測(cè)時(shí)，PCR循環(huán)數(shù)過多會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。（√）20.熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)時(shí)，顯微鏡質(zhì)量對(duì)結(jié)果影響較小。（×）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述免疫組化（IHC）檢測(cè)的基本步驟及其原理。2.簡(jiǎn)述熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)的基本步驟及其原理。3.簡(jiǎn)述石蠟切片在存放過程中，如何減少抗原失活？4.簡(jiǎn)述分子病理檢測(cè)中，如何減少假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果的產(chǎn)生？五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合南京市人民醫(yī)院病理室的實(shí)際情況，論述如何優(yōu)化石蠟切片的制備流程以提高染色效果。2.結(jié)合臨床應(yīng)用，論述分子病理檢測(cè)在腫瘤診斷中的重要性及其面臨的挑戰(zhàn)。答案與解析一、單項(xiàng)選擇題1.A（Sanger測(cè)序法是目前臨床病理檢驗(yàn)中最常用的DNA測(cè)序技術(shù)。）2.C（樣本在4℃冰箱中保存超過1周會(huì)導(dǎo)致抗原失活。）3.C（免疫熒光染色（抗F-actin抗體）主要用于觀察細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。）4.A（熒光信號(hào)強(qiáng)度最能反映雜交效率。）5.B（免疫組化（抗CD31抗體）常用于評(píng)估腫瘤組織的微血管密度。）6.D（高濕度環(huán)境容易導(dǎo)致抗原失活。）7.C（數(shù)字PCR常用于檢測(cè)基因擴(kuò)增。）8.B（Masson三色染色主要用于觀察細(xì)胞外基質(zhì)成分。）9.A（優(yōu)化PCR退火溫度能減少假陰性結(jié)果。）10.B（免疫組化（抗Ki-67抗體）常用于檢測(cè)腫瘤組織的Ki-67表達(dá)。）二、多項(xiàng)選擇題1.A,B,C,D,E（抗體滴度、孵育溫度、樣本固定時(shí)間、封閉劑種類、切片厚度均會(huì)影響免疫組化結(jié)果。）2.A,B,C,D,E（優(yōu)化探針濃度、延長(zhǎng)雜交時(shí)間、高分辨率熒光顯微鏡、合適的封閉劑、避光保存樣本能提高檢測(cè)靈敏度。）3.A,E（免疫組化（抗CD31抗體）和免疫熒光（抗CD34抗體）常用于觀察腫瘤組織的微血管密度。）4.A,C,E（快速冷凍樣本、使用高質(zhì)量的抗原修復(fù)液、嚴(yán)格控制孵育溫度能減少抗原失活。）5.B,C,D,E（FISH、數(shù)字PCR、熒光定量PCR、基因芯片技術(shù)常用于檢測(cè)腫瘤組織的基因擴(kuò)增。）6.A,C,D,E（優(yōu)化PCR退火溫度、高純度的DNA提取試劑盒、適當(dāng)降低PCR循環(huán)數(shù)、使用內(nèi)對(duì)照基因能減少假陽(yáng)性結(jié)果。）7.C,E（免疫熒光（抗F-actin抗體）和免疫組化（抗Vimentin抗體）常用于觀察細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。）8.A,B,C,D,E（探針濃度、雜交溫度、樣本固定時(shí)間、封閉劑種類、顯微鏡質(zhì)量均會(huì)影響雜交效率。）9.B,C,D,E（免疫組化（抗Ki-67抗體）、FISH、數(shù)字PCR、熒光定量PCR常用于檢測(cè)腫瘤組織的Ki-67表達(dá)。）10.B,D,E（使用高質(zhì)量的抗原修復(fù)液、嚴(yán)格控制孵育溫度、快速冷凍樣本能提高染色效果。）三、判斷題1.×（抗體滴度過高會(huì)導(dǎo)致背景熒光增強(qiáng)，反而影響結(jié)果。）2.×（探針濃度過高會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合，降低檢測(cè)特異性。）3.×（高濕度環(huán)境會(huì)導(dǎo)致抗原失活。）4.√5.√6.×（封閉劑種類對(duì)結(jié)果影響較大。）7.√8.×（延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間會(huì)導(dǎo)致抗原失活。）9.√10.√11.√12.×（冷藏會(huì)導(dǎo)致抗原失活。）13.√14.√15.×（TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡，原理是基于DNA鏈斷裂。）16.√17.√18.×（免疫熒光主要用于觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)，原理與免疫組化不同。）19.√20.×（顯微鏡質(zhì)量對(duì)結(jié)果影響較大。）四、簡(jiǎn)答題1.免疫組化（IHC）檢測(cè)的基本步驟及其原理-步驟：固定→脫水→包埋→切片→脫蠟→抗原修復(fù)→封閉→孵育一抗→孵育二抗→顯色→復(fù)染→封片。-原理：通過抗體與目標(biāo)抗原結(jié)合，再通過酶或熒光標(biāo)記顯色，從而在組織切片上顯示抗原分布。2.熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)的基本步驟及其原理-步驟：固定→雜交→洗滌→封片→熒光顯微鏡觀察。-原理：利用熒光標(biāo)記的探針與目標(biāo)DNA序列結(jié)合，通過熒光顯微鏡觀察熒光信號(hào)，從而檢測(cè)基因擴(kuò)增或缺失。3.石蠟切片在存放過程中，如何減少抗原失活-使用高質(zhì)量的固定液（如4%多聚甲醛）→快速冷凍→適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間→使用高效的抗原修復(fù)液→避光保存→嚴(yán)格控制溫度和濕度。4.分子病理檢測(cè)中，如何減少假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果的產(chǎn)生-優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件（如PCR退火溫度、探針濃度）→使用高純度的試劑和試劑盒→設(shè)置內(nèi)對(duì)照基因→嚴(yán)格質(zhì)控樣本質(zhì)量→避免交叉污染。五、論述題1.結(jié)合南京市人民醫(yī)院病理室的實(shí)際情況，論述如何優(yōu)化石蠟切片的制備流程以提高染色效果-優(yōu)化方案：-改進(jìn)固定方法：采用4%多聚甲醛固定，確?？乖暾?。-優(yōu)化脫水脫蠟：使用自動(dòng)脫水機(jī)，控制時(shí)間和溫度，減少抗原失活。-改進(jìn)抗原修復(fù)：采用熱修復(fù)或酶修復(fù)，提高抗原活性。-優(yōu)化染色條件：根據(jù)抗體說明書調(diào)整孵育時(shí)間、溫度和