淄博市人民醫(yī)院免疫組化技術(shù)考核一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20題）1.免疫組化技術(shù)中，用于封閉內(nèi)源性過氧化物酶的試劑是？A.肝素B.高碘酸希夫（HIS）試劑C.甲醇D.牛血清白蛋白（BSA）2.下列哪種抗體在免疫組化中常用于檢測(cè)細(xì)胞骨架蛋白？A.CD3B.Ki-67C.VimentinD.CD203.免疫組化染色中，若背景過染，可能的原因是？A.抗體濃度過高B.溫育時(shí)間過長(zhǎng)C.孵育溫度過低D.抗原修復(fù)不充分4.以下哪種方法不屬于免疫組化技術(shù)的抗原修復(fù)方式？A.蒸餾水熱修復(fù)B.pH6.0緩沖液修復(fù)C.蛋白酶K消化D.乙醇固定5.免疫組化評(píng)分中，“強(qiáng)陽性”通常指？A.細(xì)胞漿呈淡黃色B.細(xì)胞核呈深棕色C.背景呈淡黃色D.細(xì)胞膜無染色6.用于免疫組化孵育的濕盒應(yīng)具備什么功能？A.防止抗體蒸發(fā)B.增加抗體活性C.降低孵育溫度D.促進(jìn)抗體降解7.以下哪種熒光標(biāo)記的二抗適用于熒光免疫組化？A.堿性磷酸酶標(biāo)記B.熒光素標(biāo)記（如AlexaFluor）C.辣根過氧化物酶標(biāo)記D.免疫磁珠標(biāo)記8.免疫組化中，“假陽性”結(jié)果可能由哪種因素導(dǎo)致？A.抗體交叉反應(yīng)B.陽性對(duì)照缺失C.背景染色過強(qiáng)D.標(biāo)本固定不當(dāng)9.以下哪種組織固定劑最適合免疫組化？A.甲醛B.乙醇C.丙酮D.甲醇10.免疫組化中，用于阻斷非特異性結(jié)合的試劑是？A.封閉液（如BSA）B.高溫修復(fù)液C.蛋白酶KD.抗原抗體混合液二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共10題）1.免疫組化技術(shù)中，影響染色結(jié)果的因素包括？A.抗體濃度B.孵育溫度C.抗原修復(fù)方法D.背景封閉程度E.標(biāo)本保存時(shí)間2.以下哪些抗體可用于腫瘤免疫組化檢測(cè)？A.CD34B.ER/PRC.HER2D.Ki-67E.CK193.免疫組化評(píng)分中，半定量分析通常依據(jù)？A.染色強(qiáng)度B.染色范圍C.陽性細(xì)胞比例D.背景染色程度E.抗體特異性4.免疫組化中，熒光信號(hào)的增強(qiáng)方法包括？A.使用二抗放大信號(hào)B.增加抗體濃度C.采用直接法標(biāo)記抗體D.提高孵育溫度E.使用DAPI復(fù)染核5.以下哪些方法可減少免疫組化背景染色？A.優(yōu)化抗體稀釋度B.使用封閉劑（如BSA）C.增加孵育時(shí)間D.降低修復(fù)強(qiáng)度E.使用封閉抗體（如正常血清）6.免疫組化中，陽性對(duì)照的作用是？A.驗(yàn)證抗體活性B.排除假陰性C.檢測(cè)非特異性結(jié)合D.評(píng)估背景染色E.預(yù)防技術(shù)誤差7.以下哪些組織類型適合進(jìn)行免疫組化檢測(cè)？A.石蠟包埋組織B.冰凍切片C.石蠟再切片D.細(xì)胞涂片E.石蠟脫蠟再修復(fù)8.免疫組化中，抗體交叉反應(yīng)的原因包括？A.抗體特異性不純B.組織抗原相似性高C.孵育溫度過高D.抗體稀釋度不當(dāng)E.標(biāo)本固定過度9.免疫組化中，熒光顯微鏡的設(shè)置需注意？A.熒光濾光片選擇B.光源強(qiáng)度調(diào)節(jié)C.背景光補(bǔ)償D.曝光時(shí)間控制E.數(shù)碼相機(jī)分辨率10.免疫組化技術(shù)中，以下哪些屬于質(zhì)量控制措施？A.陽性對(duì)照和陰性對(duì)照設(shè)置B.抗體效價(jià)檢測(cè)C.重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證D.優(yōu)化染色條件E.背景染色評(píng)估三、填空題（每空1分，共10空）1.免疫組化技術(shù)中，用于阻斷非特異性結(jié)合的試劑是__________。2.免疫組化評(píng)分中，“弱陽性”通常指細(xì)胞染色呈__________。3.用于免疫組化孵育的濕盒應(yīng)保持__________濕度。4.熒光免疫組化中，常用的熒光標(biāo)記包括__________和__________。5.免疫組化中，抗原修復(fù)不充分會(huì)導(dǎo)致__________染色。6.免疫組化技術(shù)中，常用的二抗標(biāo)記酶是__________或__________。7.免疫組化評(píng)分中，陽性細(xì)胞比例≤5%記為__________。8.免疫組化中，背景過染可通過__________或__________改善。9.免疫組化技術(shù)中，pH6.0緩沖液適用于__________修復(fù)。10.免疫組化中，熒光信號(hào)的淬滅可通過__________實(shí)現(xiàn)。四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共6題）1.簡(jiǎn)述免疫組化技術(shù)的基本原理。2.列舉三種常用的免疫組化抗原修復(fù)方法。3.解釋免疫組化中“假陽性”和“假陰性”的可能原因。4.簡(jiǎn)述熒光免疫組化與酶標(biāo)免疫組化的區(qū)別。5.說明免疫組化染色中背景過染的常見原因及解決方法。6.為什么石蠟包埋組織需要經(jīng)過脫蠟再進(jìn)行免疫組化染色？五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合淄博市人民醫(yī)院病理科的實(shí)際工作，論述免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷中的應(yīng)用價(jià)值。2.分析免疫組化技術(shù)中可能影響染色結(jié)果的關(guān)鍵因素，并提出優(yōu)化策略。答案與解析一、單項(xiàng)選擇題答案1.B2.C3.A4.D5.B6.A7.B8.A9.A10.A解析：1.高碘酸希夫（HIS）試劑用于封閉內(nèi)源性過氧化物酶，防止非特異性染色。2.Vimentin是細(xì)胞骨架蛋白，常用于間質(zhì)腫瘤的免疫組化檢測(cè)。3.抗體濃度過高會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合，使背景過染。4.蛋白酶K消化屬于蛋白質(zhì)酶解技術(shù)，不屬于抗原修復(fù)。5.強(qiáng)陽性指細(xì)胞核呈深棕色染色。6.濕盒防止抗體蒸發(fā)，維持孵育環(huán)境濕度。7.熒光素標(biāo)記（如AlexaFluor）適用于熒光免疫組化。8.抗體交叉反應(yīng)可能導(dǎo)致假陽性。9.甲醛是最常用的免疫組化固定劑。10.封閉液（如BSA）阻斷非特異性結(jié)合。二、多項(xiàng)選擇題答案1.ABCDE2.ABCDE3.ABC4.ABCE5.ABDE6.AB7.ABCDE8.ABD9.ABCDE10.ABCDE解析：1.抗體濃度、孵育溫度、抗原修復(fù)、封閉程度、標(biāo)本保存均影響染色結(jié)果。2.CD34（間質(zhì)）、ER/PR（激素受體）、HER2（擴(kuò)增）、Ki-67（增殖）、CK19（上皮）均用于腫瘤檢測(cè)。3.半定量分析依據(jù)染色強(qiáng)度、范圍、陽性細(xì)胞比例。4.二抗放大信號(hào)、抗體濃度、直接法標(biāo)記、DAPI復(fù)染核可增強(qiáng)熒光信號(hào)。5.優(yōu)化抗體稀釋、封閉劑、降低修復(fù)強(qiáng)度、封閉抗體可減少背景染色。6.陽性對(duì)照驗(yàn)證抗體活性并排除假陰性。7.石蠟包埋、冰凍切片、再切片、涂片及脫蠟再修復(fù)均適用。8.抗體特異性不純、組織抗原相似性高、稀釋度不當(dāng)易導(dǎo)致交叉反應(yīng)。9.熒光濾光片、光源強(qiáng)度、背景補(bǔ)償、曝光時(shí)間、分辨率均需優(yōu)化。10.陽性對(duì)照、抗體效價(jià)、重復(fù)實(shí)驗(yàn)、優(yōu)化條件、背景評(píng)估是質(zhì)量控制措施。三、填空題答案1.封閉液（如BSA）2.淺黃色3.高4.熒光素，AlexaFluor5.弱6.辣根過氧化物酶，堿性磷酸酶7.陰性8.降低抗體濃度，增加封閉時(shí)間9.pH6.0緩沖液10.中性粒細(xì)胞酯酶解析：1.封閉液阻斷非特異性結(jié)合。2.弱陽性染色淺淡。3.濕盒需高濕度防止抗體干燥。4.熒光素和AlexaFluor是常用熒光標(biāo)記。5.修復(fù)不充分導(dǎo)致染色弱。6.酶標(biāo)二抗常用HRP或AP。7.陽性細(xì)胞<5%記為陰性。8.背景過染可通過降低抗體濃度或延長(zhǎng)封閉時(shí)間改善。9.pH6.0緩沖液適用于酸性抗原修復(fù)。10.中性粒細(xì)胞酯酶可淬滅熒光信號(hào)。四、簡(jiǎn)答題答案1.免疫組化原理：利用抗體與組織細(xì)胞內(nèi)特異性抗原的特異性結(jié)合，通過酶標(biāo)或熒光標(biāo)記顯色，在顯微鏡下觀察抗原表達(dá)。2.抗原修復(fù)方法：蒸餾水熱修復(fù)、pH6.0緩沖液修復(fù)、EDTA修復(fù)。3.假陽性/假陰性原因：假陽性由抗體交叉反應(yīng)或修復(fù)過度導(dǎo)致；假陰性由抗原修復(fù)不足或抗體失效引起。4.熒光與酶標(biāo)區(qū)別：熒光法信號(hào)更強(qiáng)，背景干擾少；酶標(biāo)法操作簡(jiǎn)便，但需避光。5.背景過染原因及解決：抗體濃度過高、封閉不充分→降低抗體濃度、增加封閉時(shí)間、使用封閉劑。6.石蠟脫蠟再染色原因：石蠟封存抗原需脫蠟暴露，否則抗體無法結(jié)合。五、論述題答案1.免疫組化在腫瘤診斷中的應(yīng)用：-淄博市人民醫(yī)院病理科通過免疫組化檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物（如HER2、Ki-67）判斷惡性程度；