安慶市人民醫(yī)院電鏡診斷技術(shù)考核一、單項選擇題（每題2分，共30題）1.電鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)時，常用的加速電壓范圍是多少？A.50-100kVB.100-200kVC.500-1000kVD.20-50kV2.透射電鏡（TEM）主要用于觀察哪種樣品？A.厚切片（>1μm）B.超薄切片（<100nm）C.掃描樣品表面D.活細(xì)胞動態(tài)觀察3.蛋白質(zhì)亞基的結(jié)構(gòu)屬于哪種分辨率水平？A.細(xì)胞水平B.超微結(jié)構(gòu)水平C.分子水平D.原子水平4.電鏡樣品制備過程中，化學(xué)固定劑的主要作用是？A.染色B.固定細(xì)胞形態(tài)C.提高導(dǎo)電性D.增強(qiáng)熒光5.空間位阻效應(yīng)在電鏡樣品超薄切片中可能導(dǎo)致什么現(xiàn)象？A.細(xì)胞膜模糊B.細(xì)胞器變形C.蛋白質(zhì)聚集D.胞外基質(zhì)缺失6.電鏡下觀察病毒時，哪種結(jié)構(gòu)通常需要負(fù)染技術(shù)？A.病毒包膜B.病毒衣殼C.病毒基因組D.病毒受體7.衍射襯度成像主要用于分析？A.細(xì)胞表面形貌B.晶體結(jié)構(gòu)C.薄膜厚度D.纖維排列8.電鏡樣品干燥過程中，臨界點(diǎn)干燥法的缺點(diǎn)是？A.易產(chǎn)生收縮變形B.需要高真空環(huán)境C.成本較高D.操作簡單9.超薄切片的厚度通常控制在多少范圍內(nèi)？A.10-20nmB.50-100nmC.500-1000nmD.1-5μm10.電鏡下觀察細(xì)胞外基質(zhì)時，常使用哪種染色劑？A.銀染B.鉻酸鋨酸混合液C.鋨酸D.亞甲基藍(lán)11.電鏡樣品的離子交換過程通常在哪種溶液中進(jìn)行？A.pH7.4的磷酸鹽緩沖液B.蒸餾水C.有機(jī)溶劑D.鹽酸溶液12.電鏡成像的分辨率極限受哪種因素限制？A.加速電壓B.樣品厚度C.電子束波長D.透鏡質(zhì)量13.電鏡下觀察線粒體時，常出現(xiàn)的特征性結(jié)構(gòu)是？A.基質(zhì)嵴B.細(xì)胞核C.高爾基體D.溶酶體14.電鏡樣品的冷凍保存方法適用于哪種研究？A.病毒結(jié)構(gòu)分析B.活細(xì)胞動態(tài)觀察C.蛋白質(zhì)晶體學(xué)D.細(xì)胞器功能研究15.電鏡下觀察細(xì)胞連接時，哪種結(jié)構(gòu)最常見？A.緊密連接B.纖維連接C.橋粒D.半橋粒二、多項選擇題（每題3分，共15題）1.電鏡樣品制備過程中，以下哪些步驟可能導(dǎo)致細(xì)胞器變形？A.固定B.脫水C.脫脂D.玻璃化2.電鏡成像的對比度來源包括？A.電子散射B.膠體染色C.衍射效應(yīng)D.樣品厚度3.電鏡下觀察細(xì)胞核時，常見的結(jié)構(gòu)包括？A.染色質(zhì)B.核仁C.核被膜D.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)4.電鏡樣品的負(fù)染技術(shù)適用于？A.病毒觀察B.細(xì)胞表面分析C.薄膜樣品觀察D.細(xì)胞器內(nèi)部結(jié)構(gòu)5.電鏡樣品的冷凍替代法步驟包括？A.快速冷凍B.玻璃化轉(zhuǎn)移C.乙醚置換D.臨界點(diǎn)干燥6.電鏡下觀察細(xì)胞骨架時，常見的結(jié)構(gòu)包括？A.微管B.微絲C.中間纖維D.細(xì)胞核7.電鏡樣品的化學(xué)固定劑通常含有？A.戊二醛B.鋨酸C.甲醛D.聚乙二醇8.電鏡成像的衍射襯度成像技術(shù)適用于？A.晶體樣品B.薄膜樣品C.細(xì)胞表面分析D.細(xì)胞器內(nèi)部結(jié)構(gòu)9.電鏡樣品的冷凍電鏡技術(shù)適用于？A.病毒結(jié)構(gòu)分析B.活細(xì)胞樣品觀察C.蛋白質(zhì)晶體學(xué)D.細(xì)胞器功能研究10.電鏡下觀察細(xì)胞外基質(zhì)時，常見的成分包括？A.膠原蛋白B.纖維連接蛋白C.層粘連蛋白D.糖蛋白11.電鏡樣品的離子交換過程通常用于？A.提高導(dǎo)電性B.去除背景噪聲C.改善樣品保真度D.增強(qiáng)染色效果12.電鏡成像的分辨率極限受以下哪些因素影響？A.加速電壓B.電子束波長C.透鏡質(zhì)量D.樣品厚度13.電鏡下觀察細(xì)胞連接時，常見的類型包括？A.緊密連接B.橋粒C.半橋粒D.黏附帶14.電鏡樣品的冷凍保存方法適用于？A.病毒結(jié)構(gòu)分析B.活細(xì)胞樣品觀察C.蛋白質(zhì)晶體學(xué)D.細(xì)胞器功能研究15.電鏡成像的對比度來源包括？A.電子散射B.膠體染色C.衍射效應(yīng)D.樣品厚度三、簡答題（每題5分，共10題）1.簡述電鏡樣品制備過程中，化學(xué)固定的作用及原理。2.電鏡下觀察病毒時，負(fù)染技術(shù)的原理及步驟是什么？3.電鏡成像的分辨率極限受哪些因素影響？如何提高分辨率？4.電鏡樣品的冷凍電鏡技術(shù)適用于哪些研究？其優(yōu)勢是什么？5.電鏡下觀察細(xì)胞核時，常見的結(jié)構(gòu)有哪些？各自的功能是什么？6.電鏡樣品的冷凍替代法步驟是什么？其優(yōu)缺點(diǎn)是什么？7.電鏡成像的衍射襯度成像技術(shù)適用于哪些樣品？其原理是什么？8.電鏡下觀察細(xì)胞連接時，常見的類型有哪些？各自的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是什么？9.電鏡樣品的離子交換過程通常用于哪些目的？其原理是什么？10.電鏡成像的對比度來源有哪些？如何提高對比度？四、論述題（每題10分，共5題）1.電鏡樣品制備過程中，如何避免細(xì)胞器變形？請結(jié)合具體步驟說明。2.電鏡下觀察病毒時，負(fù)染技術(shù)與直接染色技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？3.電鏡成像的分辨率極限受哪些因素影響？如何提高分辨率？請結(jié)合具體技術(shù)說明。4.電鏡樣品的冷凍電鏡技術(shù)適用于哪些研究？其優(yōu)勢是什么？請結(jié)合安慶市人民醫(yī)院的實際情況說明。5.電鏡下觀察細(xì)胞連接時，常見的類型有哪些？各自的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及功能是什么？請結(jié)合臨床應(yīng)用說明。答案與解析一、單項選擇題答案與解析1.B解析：透射電鏡（TEM）通常使用100-200kV的加速電壓，以獲得更高的分辨率。2.B解析：TEM主要用于觀察超薄切片（<100nm）的細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。3.C解析：蛋白質(zhì)亞基的結(jié)構(gòu)屬于分子水平，電鏡可以分辨亞細(xì)胞器及分子結(jié)構(gòu)。4.B解析：化學(xué)固定劑（如戊二醛、鋨酸）通過交聯(lián)蛋白質(zhì)，固定細(xì)胞形態(tài)。5.B解析：空間位阻效應(yīng)會導(dǎo)致細(xì)胞器在超薄切片中變形或擠壓。6.B解析：病毒衣殼通常需要負(fù)染技術(shù)才能清晰顯示其結(jié)構(gòu)。7.B解析：衍射襯度成像主要用于分析晶體結(jié)構(gòu)，如礦物質(zhì)或病毒衣殼。8.A解析：臨界點(diǎn)干燥法易導(dǎo)致樣品收縮變形，但能避免氣泡產(chǎn)生。9.B解析：超薄切片的厚度通?？刂圃?0-100nm，以保證電子穿透性。10.B解析：鉻酸鋨酸混合液常用于染色細(xì)胞外基質(zhì)，提高襯度。11.A解析：離子交換通常在pH7.4的磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行，以維持生物活性。12.C解析：電鏡分辨率受電子束波長限制，波長越短分辨率越高。13.A解析：線粒體具有特征性的基質(zhì)嵴，電鏡下清晰可見。14.A解析：冷凍保存適用于病毒結(jié)構(gòu)分析，能保持樣品天然狀態(tài)。15.A解析：緊密連接是細(xì)胞連接中最常見的類型，電鏡下呈連續(xù)性結(jié)構(gòu)。二、多項選擇題答案與解析1.A,B,D解析：化學(xué)固定、脫水、玻璃化過程可能導(dǎo)致細(xì)胞器變形。2.A,B,C,D解析：對比度來源包括電子散射、膠體染色、衍射效應(yīng)及樣品厚度。3.A,B,C解析：細(xì)胞核結(jié)構(gòu)包括染色質(zhì)、核仁、核被膜。4.A,B,C解析：負(fù)染技術(shù)適用于病毒、細(xì)胞表面及薄膜樣品觀察。5.A,B,C,D解析：冷凍替代法步驟包括快速冷凍、玻璃化轉(zhuǎn)移、乙醚置換、臨界點(diǎn)干燥。6.A,B,C解析：細(xì)胞骨架包括微管、微絲、中間纖維。7.A,B,C解析：衍射襯度成像適用于晶體、薄膜及細(xì)胞表面樣品。8.A,B,C,D解析：細(xì)胞連接類型包括緊密連接、橋粒、半橋粒、黏附帶。9.A,B,C,D解析：冷凍電鏡適用于病毒、活細(xì)胞、蛋白質(zhì)晶體及細(xì)胞器功能研究。10.A,B,C,D解析：細(xì)胞外基質(zhì)成分包括膠原蛋白、纖維連接蛋白、層粘連蛋白、糖蛋白。11.A,B,C解析：離子交換用于提高導(dǎo)電性、去除背景噪聲、改善樣品保真度。12.A,B,C,D解析：分辨率受加速電壓、電子束波長、透鏡質(zhì)量及樣品厚度影響。13.A,B,C解析：細(xì)胞連接類型包括緊密連接、橋粒、半橋粒。14.A,B,C,D解析：冷凍保存適用于病毒、活細(xì)胞、蛋白質(zhì)晶體及細(xì)胞器功能研究。15.A,B,C,D解析：對比度來源包括電子散射、膠體染色、衍射效應(yīng)及樣品厚度。三、簡答題答案與解析1.化學(xué)固定的作用及原理解析：化學(xué)固定劑（如戊二醛、鋨酸）通過交聯(lián)蛋白質(zhì)，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，防止自溶和變形。原理是利用醛基或羥基與蛋白質(zhì)側(cè)鏈反應(yīng)，形成共價鍵，固定細(xì)胞形態(tài)。2.負(fù)染技術(shù)的原理及步驟解析：負(fù)染技術(shù)通過在樣品表面覆蓋重金屬鹽（如磷鎢酸、醋酸鈾），使電子束散射增強(qiáng)，從而提高襯度。步驟：樣品制備→滴加負(fù)染液→干燥→電鏡觀察。3.電鏡成像的分辨率極限及提高方法解析：分辨率受電子束波長限制，理論極限約0.1nm。提高方法：提高加速電壓（縮短波長）、使用高分辨率透鏡、優(yōu)化樣品制備。4.冷凍電鏡技術(shù)的適用范圍及優(yōu)勢解析：適用于病毒結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)晶體、活細(xì)胞樣品。優(yōu)勢：能保持樣品天然狀態(tài)，無需染色，分辨率高。5.細(xì)胞核的常見結(jié)構(gòu)及功能解析：結(jié)構(gòu)包括染色質(zhì)（DNA和蛋白質(zhì)，遺傳信息載體）、核仁（合成核糖體RNA）、核被膜（保護(hù)細(xì)胞核，控制物質(zhì)進(jìn)出）。6.冷凍替代法步驟及優(yōu)缺點(diǎn)解析：步驟：快速冷凍→玻璃化轉(zhuǎn)移→乙醚置換→丙酮置換→干燥。優(yōu)點(diǎn)：避免收縮變形，但操作復(fù)雜。7.衍射襯度成像的適用范圍及原理解析：適用于晶體、薄膜樣品。原理：利用樣品內(nèi)部原子排列的衍射效應(yīng)，增強(qiáng)襯度，顯示晶體結(jié)構(gòu)。8.細(xì)胞連接的類型及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)解析：緊密連接（連續(xù)性結(jié)構(gòu)，阻止物質(zhì)通過）、橋粒（錨定細(xì)胞，機(jī)械連接）、半橋粒（半連續(xù)性結(jié)構(gòu)，連接細(xì)胞間隙）。9.離子交換的目的及原理解析：目的：提高導(dǎo)電性、去除背景噪聲、改善樣品保真度。原理：利用離子交換樹脂或溶液，替換樣品中的小分子，減少干擾。10.電鏡成像的對比度來源及提高方法解析：對比度來源：電子散射、膠體染色、衍射效應(yīng)、樣品厚度。提高方法：優(yōu)化染色劑、控制樣品厚度、使用高分辨率透鏡。四、論述題答案與解析1.如何避免細(xì)胞器變形解析：避免變形的關(guān)鍵步驟：-快速化學(xué)固定（4°C預(yù)冷固定液）；-緩慢脫水（梯度丙酮）；-適當(dāng)干燥（臨界點(diǎn)干燥或冷凍干燥）；-薄片切片（厚度<100nm）。2.負(fù)染技術(shù)與直接染色技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)解析：負(fù)染技術(shù)：優(yōu)點(diǎn)（無需染色，分辨率高）；缺點(diǎn)（樣品易失水變形）。直接染色技術(shù)：優(yōu)點(diǎn)（操作簡單）；缺點(diǎn)（染色劑可能破壞結(jié)構(gòu)）。3.電鏡成像的分辨率極限及提高方法解析：分辨率受電子束波長限制（理論約0.1nm）。提高方法：-使用高加速電壓（如200kV）；-優(yōu)化透鏡系統(tǒng)（如超分辨率透鏡）；-冷凍電鏡技術(shù)（減少震動和電子