DB61/T1472.3—2021

目??次

前言.....................................................................................................................................................................II

1范圍.................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義.....................................................................................................................................................1

4生產(chǎn)條件.........................................................................................................................................................2

5生產(chǎn)工藝.........................................................................................................................................................3

6合格指標(biāo).........................................................................................................................................................4

7檢驗(yàn).................................................................................................................................................................5

8標(biāo)識(shí)、貯存.....................................................................................................................................................5

附錄A（規(guī)范性）常用搖瓶種培養(yǎng)基配方...................................................................................................6

附錄B（規(guī)范性）常用發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方...................................................................................................7

附錄C（規(guī)范性）檢驗(yàn)項(xiàng)目............................................................................................................................8

附錄D（規(guī)范性）檢驗(yàn)培養(yǎng)基........................................................................................................................9

I

DB61/T1472.3—2021

前??言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》給出的規(guī)

則起草。

本文件《靈芝生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》分為五個(gè)部分：

——第1部分：產(chǎn)地環(huán)境

——第2部分：菌種

——第3部分：液體菌種生產(chǎn)技術(shù)

——第4部分：袋料栽培技術(shù)

——第5部分：段木栽培技術(shù)

本文件為DB61/T1472.3—2021的第3部分。

本文件由陜西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：陜西省微生物研究所、楊凌康宇生物科技有限公司、陜西國(guó)人菌業(yè)科技產(chǎn)業(yè)園有

限公司、陜西省園藝技術(shù)工作站、西安市質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)化研究院、陜西崇德生物技術(shù)發(fā)展有限公司。

本文件主要起草人：雷萍、吳亞召、張文雋、馬婧嘉、王周平、渠敬峰、陳磊、霍國(guó)琴、王磊、王

遷、陳惠、馬瑩、錢磊。

本文件由陜西省微生物研究所負(fù)責(zé)解釋。

本文件首次發(fā)布。

聯(lián)系信息如下：

單位：陜西省微生物研究所

地址：西安市雁塔區(qū)西影路76號(hào)

郵編：710043

電話/p>

II

DB61/T1472.3—2021

靈芝生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范第3部分：液體菌種生產(chǎn)技術(shù)

1范圍

本文件規(guī)定了食用靈芝液體菌種的術(shù)語(yǔ)與定義、生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝、合格指標(biāo)、檢驗(yàn)及標(biāo)識(shí)貯存。

本文件適用于食用靈芝液體菌種的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB150.2壓力容器第2部分：材料

GB5749生活引用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)

GB/T14295空氣過(guò)濾器

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1284食用菌菌種中雜菌及害蟲的檢驗(yàn)

NY5099無(wú)公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

液體菌種liquidspawn

培養(yǎng)基為液體狀態(tài)的菌種。

[來(lái)源：GB/T12728-2006,2.5.30]

3.2

食用菌液體菌種培養(yǎng)器cultivationapparatusforediblefungusliquidspawn

也稱液體菌種培養(yǎng)罐，是指進(jìn)行食用菌液體菌種培養(yǎng)的專用設(shè)備，包括固定式和可移動(dòng)式兩種類型。

要求不銹鋼材質(zhì)，符合GB150.2鋼制壓力容器標(biāo)準(zhǔn)。

3.3

食用菌液體菌種接種器ediblefungus-liquidinterfacetrapinoculators

將液體菌種從培養(yǎng)器中按無(wú)菌操作要求轉(zhuǎn)接到食用菌固體培養(yǎng)基物料上的設(shè)備。

3.4

1

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空氣壓縮機(jī)aircompressor

能為培養(yǎng)器提供壓縮空氣的設(shè)備。

3.5

空氣過(guò)濾器airfilter

采用過(guò)濾、黏附或荷電捕集等方法去除空氣中顆粒物的設(shè)備。

[來(lái)源：GB/T14295-2019,3.1]

3.6

接種量inoculationamount

接入培養(yǎng)器中的菌種的數(shù)量，以菌種體積與培養(yǎng)基體積的百分比表示。

4生產(chǎn)條件

4.1技術(shù)人員

應(yīng)具有與所生產(chǎn)的菌種級(jí)別相適應(yīng)的《食用菌菌種生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)許可證》、《食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)人員

證》和《食用菌菌種檢驗(yàn)員證》的人員。

4.2生產(chǎn)場(chǎng)地

應(yīng)符合《靈芝生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范第1部分：產(chǎn)地環(huán)境》4栽培環(huán)境的要求。

4.3生產(chǎn)廠房

4.3.1生產(chǎn)車間

電力充足，水源方便，通風(fēng)良好。地面、墻壁和天花板應(yīng)能防水、防腐蝕、防滲漏、防滑，易清洗，

地面應(yīng)有1.0％～1.5％的排水坡度和良好的排水系統(tǒng)。

4.3.2接種間

應(yīng)設(shè)置緩沖間及與職工人數(shù)相適應(yīng)的更衣室。緩沖間內(nèi)放置封閉式廢物桶，安裝排風(fēng)設(shè)備，門窗應(yīng)

設(shè)置防蚊蠅紗網(wǎng)。入口處設(shè)置非手動(dòng)洗手裝置、消毒和干手設(shè)施。

4.3.3發(fā)酵培養(yǎng)室

內(nèi)壁和房頂光滑易清洗和消毒。

4.4設(shè)施設(shè)備

4.4.1應(yīng)配置液體菌種培養(yǎng)器、液體菌種接種器、空氣壓縮機(jī)、空氣過(guò)濾器、高壓蒸汽滅菌鍋、超凈

工作臺(tái)、恒溫回旋式振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、顯微鏡、磁力攪拌機(jī)、磅秤、天平、酸度計(jì)及其它相

關(guān)器具。

4.4.2冷卻室、接種室、培養(yǎng)室和貯存室均應(yīng)具備調(diào)溫設(shè)施。

4.5培養(yǎng)基質(zhì)

應(yīng)符合NY5099的規(guī)定。

2

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4.6菌種選擇

4.6.1選用高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強(qiáng)、商品性能良好的靈芝品種。

4.6.2菌種生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)符合NY/T528的要求。

5生產(chǎn)工藝

5.1工藝流程

母種→搖瓶種→液體菌種培養(yǎng)器檢查、清洗與空滅→投料與定容→滅菌→冷卻→接種→液體菌種發(fā)

酵→菌種檢測(cè)

5.2母種制備

母種制備應(yīng)符合NY/T528的要求。

5.3搖瓶種制備

5.3.1培養(yǎng)基

按照附錄A規(guī)定配制培養(yǎng)基。

5.3.2裝液量

采用500mL～1000mL的三角瓶，每瓶裝液量為三角瓶體積的1/4，八層紗布和牛皮紙封口。

5.3.3滅菌

壓力達(dá)到0.105MPa～0.15MPa，溫度121℃～126℃，保持30min。

5.3.4接種

將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至30℃以下，無(wú)菌條件下每瓶接入0.5cm2左右大小的母種3塊～6塊。

5.3.5培養(yǎng)

培養(yǎng)溫度26℃±2℃，搖床振蕩頻率100r/min～150r/min，培養(yǎng)4d～5d。

5.3.6移種標(biāo)準(zhǔn)

5.3.6.1菌體形態(tài)：菌絲長(zhǎng)分支、菌絲壁上易見“芽頭與鎖狀聯(lián)合”，發(fā)酵液清香，菌絲球多、小顆粒

狀，大小均勻，菌液稍有黏稠。

5.3.6.2菌絲量：10％～15％（濕重）。

5.3.6.3酸堿度：發(fā)酵液pH2.5～3.0。

5.3.6.4鏡檢：平皿檢驗(yàn)無(wú)雜菌。

5.4發(fā)酵

5.4.1投料前準(zhǔn)備

5.4.1.1檢查液體菌種培養(yǎng)器上全部閥門、壓力表，要求完好，工作正常。

5.4.1.2對(duì)液體菌種培養(yǎng)器罐體內(nèi)、外和全部閥門用流水進(jìn)行沖洗，達(dá)到無(wú)死角、內(nèi)壁無(wú)任何培養(yǎng)料

殘余物的潔凈程度。

3

DB61/T1472.3—2021

5.4.1.3在液體菌種培養(yǎng)器罐體夾層加水，方法是用硅膠軟管連接水管和罐體下部的加水口，同時(shí)打

開夾層放水閥進(jìn)行加水，水量加至放水閥開始出水即可。水質(zhì)應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。

5.4.2培養(yǎng)基

按照附錄B規(guī)定配制。

5.4.3裝液量

裝液量為罐體容積的60％。

5.4.4滅菌

液體菌種培養(yǎng)器內(nèi)蒸汽壓力達(dá)到0.105Mpa～0.15Mpa，溫度達(dá)到121℃～126℃，保持40min～60

min。

5.4.5接種

在無(wú)菌條件下，接種量為投料量的10％。

5.4.6培養(yǎng)

培養(yǎng)要求具體要求如下：

a)罐壓：0.03Mpa～0.05Mpa；

b)罐溫：26℃±2℃；

c)通氣量：1︰1[V/(V﹒min)]；

d)攪拌轉(zhuǎn)速：150r/min～180r/min；

e)培養(yǎng)時(shí)間：96h～120h。

5.5檢測(cè)

接種后第4d進(jìn)行檢測(cè)，按照無(wú)菌操作取樣，將樣液接于PDA培養(yǎng)基的斜面或培養(yǎng)皿上，于28℃恒

溫培養(yǎng)2d～5d，采用顯微鏡和感官觀察菌絲生長(zhǎng)狀況和有無(wú)雜菌污染。若無(wú)細(xì)菌、霉菌等雜菌菌落生

長(zhǎng)，則表明該樣品無(wú)雜菌污染。

6合格指標(biāo)

6.1感官要求

6.1.1色澤：球狀帶“毛刺”菌絲體呈白色，菌液呈淡黃色。

6.1.2菌液形態(tài)：菌液稍粘稠，有大量球狀帶“毛刺”菌絲體懸浮、分布均勻、不上浮、不下沉、不

迅速分層，菌球間液體不渾濁。

6.1.3菌液氣味：有靈芝菌液體培養(yǎng)時(shí)特有的氣味，無(wú)異味。

6.2理化指標(biāo)

6.2.1酸堿度：pH5.5～6.0。

6.2.2菌絲量：菌絲濕重（%）≥8。

6.2.3顯微鏡下菌絲形態(tài)：球狀和絲狀菌絲體大量分布，菌絲粗壯，菌絲內(nèi)原生質(zhì)分布均勻，染色劑

著色深。有明顯鎖狀聯(lián)合。

4

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6.2.4雜菌及害蟲：無(wú)雜菌、無(wú)害蟲。

7檢驗(yàn)

7.1留樣

母種應(yīng)以每個(gè)批號(hào)3支～5支，于4℃～6℃條件下貯存至栽培袋正常發(fā)菌；搖瓶種使用時(shí)取樣30

mL～40mL，用無(wú)菌三角瓶留存；發(fā)酵罐實(shí)消后的空白培養(yǎng)基取樣30mL～40mL，用無(wú)菌三角瓶留存；

放罐前48h從發(fā)酵罐中取樣30mL～40mL，用無(wú)菌三角瓶留存；發(fā)酵終止后取樣2份，每份80mL～100

mL，1份用于出廠檢驗(yàn)，1份用無(wú)菌三角瓶留存，

7.2檢驗(yàn)

檢驗(yàn)項(xiàng)目、指標(biāo)、方法見附錄C。

8標(biāo)識(shí)、貯存

8.1標(biāo)識(shí)

生產(chǎn)的菌種必須貼有菌種質(zhì)量合格標(biāo)識(shí)，注明菌種種類、品種、生產(chǎn)單位、接種日期。

8.2貯存

8.2.1搖瓶種保存

2℃～4℃、暗光條件下可保存5d～7d。

8.2.2液體菌種保存

在培養(yǎng)器內(nèi)通入無(wú)菌空氣，保持罐壓0.02Mpa～0.04Mpa，液溫6℃～10℃可保存3d，11℃～15℃

可保存2d。

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AA

附錄A

（規(guī)范性）

常用搖瓶種培養(yǎng)基配方

A.1玉米粉（或玉米淀粉）1％，蔗糖2％，蛋白胨0.2％，酵母粉0.3％～0.5％，磷酸二氫鉀

0.1％，硫酸鎂0.06％。

A.2淀粉2％，葡萄糖2％，黃豆粉2％，蛋白胨0.2％，硫酸銨0.2％，氯化鈉0.25％，磷酸

二氫鉀0.05％，碳酸鈣5％。

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BB

附錄B

（規(guī)范性）

常用發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方

B.1黃豆粉3％，葡萄糖4％，蛋白胨0.2％，硫酸銨0.2％，氯化鈉0.25％，磷酸二氫鉀0.1%。

B.2玉米粉1％，蔗糖2％，酵母粉0.2％，磷酸二氫鉀0.01％，硫酸銨0.2％。

B.3豆餅粉1％，蔗糖2％，磷酸二氫鉀0.075％，硫酸鎂0.03％。

B.4玉米粉2％～3％，蔗糖2％，硫酸銨0.25％，磷酸二氫鉀0.15％，硫酸鎂0.07％，碳酸

鈣0.2％。

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CC

附錄C

（規(guī)范性）

檢驗(yàn)項(xiàng)目

C.1檢驗(yàn)項(xiàng)目見表C.1。

表C.1檢驗(yàn)項(xiàng)目

項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法

球狀帶“毛刺”菌絲體呈白色，濾液呈淡黃色，

菌液顏色和透明度肉眼觀察

清澈透明

菌液稍粘稠，靜置基本不分層；菌絲體稠密，

菌液形態(tài)菌球懸浮力好、在菌液中分布均勻，菌球大肉眼觀察

小均勻，菌球間液體不渾濁

無(wú)異味，如酸、臭味、發(fā)酵酒精味等。發(fā)酵

菌液氣味罐排氣口氣味正常，有靈芝菌液體培養(yǎng)時(shí)特鼻嗅

有的氣味

酸堿度pH5.5～6.0pH計(jì)

取一定重量發(fā)酵菌液，經(jīng)轉(zhuǎn)速3500r/min離心15

菌絲量≥8％min，稱量離心沉淀的菌絲體重量，計(jì)算菌絲體

重量與菌液重量比值

可見靈芝菌種液體培養(yǎng)中特有的菌絲形態(tài)，

菌絲顯微鏡形態(tài)和雜大量菌絲分支，菌絲粗壯，有明顯的鎖狀聯(lián)