圖可知，在測定濃度范圍內(nèi)，沒食子酸濃度與吸光值呈線性相關(guān)關(guān)系，其R2值為0.9984。由REF_Ref3565508\h圖2樣品的總酚含量注：柱形圖上不同字母表示差異顯著，P<0.05，下同。Fig.2ThetotalphenolicscontentofsampleNotice:Differentlettersonthecolumnshowsignificantdifferences,P<0.05,thesamebelow.上述結(jié)果說明，模擬胃液消化會顯著降低樣品中總酚，模擬消化結(jié)束時的總酚含量是未作處理的46.8%。此外，減少的酚類物質(zhì)可能是被胃蛋白酶在模擬胃液消化的第1h內(nèi)分解，而胰蛋白酶對其不起作用。4.2模擬胃腸道消化對紫蘇葉提取物中總黃酮含量影響圖3總黃酮含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3圖3總黃酮含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3Thestandardcarveoftotalflavonoidscontent圖4樣品的總黃酮含量Fig.4Thetotalflavonoidscontentofsample由圖3可知，在測定濃度范圍內(nèi)，蘆丁濃度與吸光值呈線性相關(guān)關(guān)系，其R2值為0.9976。由圖4可知，紫蘇各處理組的總黃酮含量差異較大，總黃酮含量的大小分別為空白組（652.641±30.691mgGAE/gDW）、胃液消化1h（161.042±24.064mgGAE/gDW）、胃液消化2h（305.61±20.652mgGAE/gDW）、胃腸液消化1h（286.046±37.844mgGAE/gDW）、胃腸液消化2h（280.893±11.757mgGAE/gDW）。紫蘇提取物經(jīng)過模擬胃液消化和腸液消化處理后，其第1h與第2h的總酚含量未發(fā)生顯著變化（P>0.05），但前者顯著低于后者（P<0.05），且均顯著低于未做胃腸液處理的空白組（P<0.05）。上述結(jié)果說明，模擬胃液消化會使紫蘇葉提取物中黃酮類物質(zhì)含量降低。而且是在模擬胃液消化的第1h內(nèi)快速下降。在模擬腸道消化處理的第1h內(nèi)，黃酮類物質(zhì)出現(xiàn)少量增加，相比模擬胃液消化2h處理后的總黃酮含量升高了87.2%，這說明胰蛋白酶可促進黃酮的釋放，與從彥麗等ADDINNE.Ref.{52994842-1E9F-4B1A-B385-8354FD286215}[36]實驗結(jié)果相一致。此外，總黃酮含量的測定結(jié)果與總酚含量的測定結(jié)果為極顯著相關(guān)（P<0.01），相關(guān)系數(shù)為0.962。4.3抗氧化活性本次研究選取DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和FRAP三種反應(yīng)體系，評估紫蘇在模擬胃腸道消化過程中抗氧化能力ADDINNE.Ref.{4FD7CE47-8333-4671-8FDB-047CBC311956}[37,38]。4.3.1DPPH自由基清除能力DPPH自由基是一種以氮為中心的穩(wěn)定自由基，常用于反映樣品抗氧化能力強弱ADDINNE.Ref.{6794462B-0C32-4378-866D-CDA554E6A7F2}[37]。紫蘇各不同處理組的DPPH自由基清除能力見圖5和表1。圖5紫蘇樣品的DPPH自由基清除能力Fig.5圖5紫蘇樣品的DPPH自由基清除能力Fig.5TheDPPHradicalscavengingabilityofPerillasampleTable1TheIC50ofDPPHradicalofPerillasampleIC50（mg/mL）空白組0.520±0.146a胃液消化1h1.222±0.151c胃液消化2h0.801±0.183ab胃腸液消化1h0.949±0.166bc胃腸液消化2h0.766±0.036abVc0.090±0.008Trolox0.155±0.045注：Vc和Trolox作為陽性對照，下同。紫蘇各處理組及粗提取物的DPPH自由基清除能力由半抑制濃度（Halfmaximalinhibitoryconcentration，IC50）表示，IC50越低，表示其清除能力越強。由圖5可知，紫蘇粗提取物經(jīng)胃液消化后，其DPPH自由基清除能力顯著下降，經(jīng)腸液消化后無明顯變化（P<0.05）。IC50的大小分別為空白組（0.52±0.146mg/mL）、胃液消化1h（1.222±0.151mg/mL）、胃液消化2h（0.801±0.183mg/mL）、胃腸液消化1h（0.949±0.166mg/mL）、胃腸液消化2h（0.766±0.036mg/mL）。由表1可知，各組樣品均與陽性對照Vc（0.090±0.008mg/mL）和陽性對照Trolox（0.155±0.045mg/mL）有顯著性差異（P<0.05）。上述結(jié)果表明，體外模擬消化過程會顯著降低紫蘇提取物的DPPH自由基清除能力，模擬消化結(jié)束后的IC50值升高到0.766±0.036mg/mL，相比空白組的IC50升高了47.3%。DPPH自由基清除能力是抗氧化活性的重要指標(biāo)之一，化合物對其清除能力主要與化合物的羥基數(shù)量多少和結(jié)構(gòu)有關(guān)，故推測DPPH自由基清除能力降低可能與酚類、黃酮類物質(zhì)的降解有關(guān)。4.3.2ABTS自由基清除能力圖6紫蘇樣品的ABTS自由基清除能力Fig圖6紫蘇樣品的ABTS自由基清除能力Fig.6TheABTSradicalscavengingabilityofPerillasample表2紫蘇樣品對ABTS自由基的IC50Table2TheIC50ofABTSradicalofPerillasampleIC50（mg/mL）空白組1.364±0.042a胃液消化1h2.91±0.279c胃液消化2h2.335±0.195bc胃腸液消化1h2.719±0.448bc胃腸液消化2h2.132±0.277bVc0.016±0.001Trolox0.032±0.002紫蘇各處理組的ABTS自由基清除能力與DPPH自由基清除能力的變化趨勢一致。經(jīng)胃液消化后，其ABTS自由基清除能力顯著下降，經(jīng)腸液消化后無明顯變化（P<0.05）。由圖6可知，IC50的大小分別為空白組（1.364±0.042mg/mL）、胃液消化1h（2.91±0.279mg/mL）、胃液消化2h（2.335±0.195mg/mL）、胃腸液消化1h（2.719±0.448mg/mL）、胃腸液消化2h（2.132±0.277mg/mL）。由表2可知，各處理組樣品均與陽性對照Vc（0.016±0.001mg/mL）和陽性對照Trolox（0.032±0.002mg/mL）有顯著性差異（P<0.05）。上述結(jié)果表明，體外模擬消化過程會顯著降低紫蘇提取物的ABTS自由基清除能力，模擬消化結(jié)束后的IC50值升高到2.132±0.277mg/mL，相比空白組的IC50升高了56.3%。各處理組抗氧化能力大小的變化趨勢與DPPH基本相同，DPPH法和ABTS法的相關(guān)系數(shù)為0.947（P<0.05），具有顯著相關(guān)性。4.3.3鐵還原能力（FRAP）FRAP與DPPH法和ABTS法不同，不是針對一種自由基的清除活性，測定的是抗氧化物質(zhì)氧化還原的潛力ADDINNE.Ref.{8382AB1E-C836-4A02-9BA5-811F5FAFA4CB}[39]。原理為樣品中的還原性物質(zhì)在酸性環(huán)境下，將TPTZ與Fe3+復(fù)合物（Fe3+—TPTZ）還原為Fe2+而呈明顯的藍色，在593nm處有最大吸收，測定反應(yīng)體系在593nm處的吸光度值記為FRAP值，且以FeSO4為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，F(xiàn)RAP值越大，則樣品的FRAP越強ADDINNE.Ref.{6FFC0DBE-D860-43E5-B94B-CC83CE71DA95}[34]。FRAP標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖7。紫蘇各不同處理組的FRAP見圖8。圖8樣品與對照物的FRAPFig.8TheFRAPofsampleorcontrol圖7FRAP標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.7ThestandardcarveofFRAP在測定濃度范圍內(nèi)，F(xiàn)eSO4濃度與吸光值呈線性相關(guān)關(guān)系，其R2值為0.9984。由圖8可知，紫蘇各處理組的FRAP經(jīng)胃液消化后，其FRAP顯著下降，經(jīng)腸液消化后無明顯變化（P>0.05）。各組FRAP大小分別為空白組（247.899±9.596mgFeSO4/gDW）、胃液消化1h（102.936±2.168mgFeSO4/gDW）、胃液消化2h（119.502±12.672mgFeSO4/gDW）、胃腸液消化1h（107.568±6.68mgFeSO4/gDW）、胃腸液消化2h（113.159±5.002mgFeSO4/gDW）。陽性對照的FRAP大小分別為Vc（2076.666±28.151mgFeSO4/gDW）、槲皮素（1243.333±33.664圖8樣品與對照物的FRAPFig.8TheFRAPofsampleorcontrol圖7FRAP標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.7ThestandardcarveofFRAP上述結(jié)果表明，體外模擬消化過程會顯著降低紫蘇提取物的鐵還原能力，模擬消化結(jié)束后的FRAP值降至113.159±5.002mgFeSO4/gDW，相比空白組下降了54.4%。此外，測定樣品時FRAP法與DPPH法和ABTS法測得的自由基清除能力的相關(guān)系數(shù)為0.775和0.898，均具有較好的相關(guān)關(guān)系。4.4α-葡萄糖苷酶抑制能力糖尿病是一種常伴有并發(fā)癥的慢性代謝紊亂性疾病，目前已成為危害人類健康的全球第三大疾病。糖尿病有4大類型，其中Ⅱ型糖尿病占90%以上。α-葡萄糖苷酶抑制劑是對Ⅱ型糖尿病有確切療效的口服降糖藥，通過競爭性抑制小腸上α-葡萄糖苷酶的活性，從而阻礙多糖的分解和延緩葡萄糖的吸收，使餐后血糖水平降低ADDINNE.Ref.{47F5DC7B-838F-4A75-9EA8-2B92DEFD434E}[40]。因此，我們通過測定樣品抑制α-葡萄糖苷酶活性的能力來評價紫蘇的降血糖和抗糖尿病的潛力，結(jié)果如圖9和表3。圖9紫蘇樣品的α-葡萄糖苷酶抑制能力Fig.9圖9紫蘇樣品的α-葡萄糖苷酶抑制能力Fig.9Theα-glucosidaserestrainingabilityofPerillasampleTable3TheIC50ofα-glucosidaseofPerillasampleIC50（mg/mL）空白組0.113±0.005a胃液消化1h0.296±0.012b胃液消化2h0.344±0.011b胃腸液消化1h0.466±0.079c胃腸液消化2h0.525±0.067c阿卡波糖1.926±0.086注：阿卡波糖作為陽性對照。本論文選擇以4-甲基傘形酮-α-D-吡喃葡萄糖苷（4-MUG）代替常用的p-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（pNPG）作為底物，4-MUG法較pNPG法除底物穩(wěn)定時間延長2~3倍外，還可測定溶解性弱、易渾濁的樣品，結(jié)果靈敏、重現(xiàn)性好。由圖9可知，紫蘇經(jīng)模擬胃腸道消化處理后，其α-葡萄糖苷酶抑制能力顯著下降，各處理組與未進行胃腸液處理的空白組均存在顯著性差異（P<0.05）。其中其胃液消化1h和2h之間、胃腸液消化1h和2h之間差異均不顯著（P>0.05），說明其抑制能力下降均發(fā)生在各階段消化前期。由表3可知，樣品的IC50均顯著低于陽性對照阿卡波糖（1.926±0.086mg/mL）。上述結(jié)果表明，紫蘇的α-葡萄糖苷酶活性抑制能力在模擬胃腸道消化過程中不斷減弱，消化結(jié)束時，其IC50值從0.113±0.005mg/mL顯著上升至0.525±0.067mg/mL。原因可能是紫蘇葉提取物在胃腸道消化時，其總酚、總黃酮等活性物質(zhì)不斷減少，導(dǎo)致α-葡萄糖苷酶活性抑制能力隨之變?nèi)酢?.5相關(guān)性分析表4樣品的抗氧化試驗結(jié)果與總酚含量、總黃酮含量、α-葡萄糖苷酶抑制能力的IC50值的相關(guān)性分析Table4ThecorrelationalanalysesofantioxidationexperimentandtotalphenolicscontentandtotalflavonoidscontentandtheIC50valuesofα-glucosidaseinhibitionPerillatotalphenolicstotalflavonoidsDPPHABTSFRAPα-glucosidasetotalphenolics10.962**0.7750.894*0.998**0.779totalflavonoids10.7650.8610.942*0.613DPPH10.947*0.7750.331ABTS10.898*0.536FRAP10.806α-glucosidase1注：**為極顯著（P<0.01），*為顯著（P<0.05）利用SPSS22.0軟件對抗氧化試驗結(jié)果和總酚含量、總黃酮含量、α-葡萄糖苷酶活性抑制能力的IC50值進行相關(guān)性分析，結(jié)果見表4。由表4可知：總酚與總黃酮含量的相關(guān)系數(shù)為0.962，表示兩者高度相關(guān)。DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、FRAP三種抗氧化試驗結(jié)果間的相關(guān)系數(shù)范圍為0.775-0.947，且顯著性均小于0.05，表明三種抗氧化試驗結(jié)果間具有良好的相關(guān)關(guān)系，可共同作為評價樣品抗氧化能力的有效指標(biāo)。三種抗氧化試驗結(jié)果與α-葡萄糖苷酶活性抑制能力的IC50值間呈正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)范圍為0.331-0.806，且顯著性均小于0.05?？偡优c總黃酮含量與三種抗氧化試驗結(jié)果及α-葡萄糖苷酶活性抑制能力呈正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)范圍為0.613-0.998，且顯著性均小于0.05，說明紫蘇葉提取物中的酚類與黃酮類物質(zhì)可能是其產(chǎn)生抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性的主要物質(zhì)。5結(jié)論本論文首次測定了紫蘇葉提取物在體外模擬胃腸道消化過程中的總酚、總黃酮含量，并首次分析了其在該過程中的抗氧化能力以及對α-葡萄糖苷酶活性的抑制能力?？偡?、總黃酮含量測定結(jié)果表明：紫蘇葉提取物經(jīng)體外模擬胃腸道消化后，總酚和總黃酮含量都出現(xiàn)顯著下降的現(xiàn)象，且減少的含量都集中出現(xiàn)在模擬胃液消化的第1h內(nèi)，可能與胃蛋白酶的降解作用，以及體系酸堿度、無機鹽等其他因素的影響，其作用機理有待進一步探究。體外抗氧化試驗結(jié)果表明：紫蘇葉提取物經(jīng)體外模擬胃腸道消化后，其抗氧化活性均出現(xiàn)顯著減弱，模擬消化結(jié)束后，DPPH自由基清除能力的IC50值升高到0.766±0.036mg/mL，ABTS自由基清除能力的IC50值升高到2.132±0.277mg/mL，相比空白組的IC50分別升高了47.3%、56.3%，F(xiàn)RAP值降至113.159±5.002mgFeSO4/gDW，相比空白組的IC50下降了54.4%。三種抗氧化試驗結(jié)果間的相關(guān)系數(shù)范圍為0.775-0.947（P<0.05），即三個反應(yīng)體系具有良好的相關(guān)關(guān)系，可共同評價樣品抗氧化能力的有效指標(biāo)。采用改良的熒光光譜法（4-MUG法）測定紫蘇模擬胃腸道消化過程中的α-葡萄糖苷酶抑制能力，結(jié)果顯示其α-葡萄糖苷酶抑制能力不斷減弱，其IC50值升高到0.525±0.067mg/mL。說明紫蘇葉活性物質(zhì)在胃腸道消化時發(fā)生降解，影響了其α-葡萄糖苷酶活性抑制能力。相關(guān)性分析表明，紫蘇葉提取物在體外模擬胃腸道消化過程中的抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶活性抑制能力呈一定相關(guān)性，說明紫蘇葉提取物中的酚類與黃酮類物質(zhì)可能是其產(chǎn)生抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性的主要物質(zhì)。參考文獻ADDINNE.Bib[1]朱雙全.紫蘇化學(xué)成分及藥理學(xué)研究進展概要[J].生物化工,2018,4(02):148-149.[2] 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