高效液相色譜儀（HPLC）操作規(guī)程詳細(xì)說(shuō)明書一、儀器概述高效液相色譜儀（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）基于混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異實(shí)現(xiàn)分離，廣泛應(yīng)用于藥物檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品分析等領(lǐng)域。儀器主要由輸液泵（提供穩(wěn)定流速）、進(jìn)樣器（精準(zhǔn)引入樣品）、色譜柱（分離核心）、檢測(cè)器（如紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器）及色譜工作站（數(shù)據(jù)采集處理）組成，可完成復(fù)雜樣品的定性、定量分析。二、適用范圍本儀器適用于有機(jī)化合物（如藥物成分、食品添加劑、環(huán)境污染物）、生物大分子（如多肽、蛋白質(zhì)）等樣品的分離與分析，支持含量測(cè)定、純度檢查、雜質(zhì)分析等檢測(cè)項(xiàng)目。樣品需為液態(tài)或可溶解為液態(tài)（如經(jīng)超聲、萃取預(yù)處理），且無(wú)強(qiáng)腐蝕性、無(wú)過(guò)多不溶性顆粒（避免堵塞色譜柱）。三、操作前準(zhǔn)備（一）儀器檢查1.外觀與連接：檢查各模塊（泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器）連接是否牢固，管路無(wú)彎折、漏液；電源、信號(hào)線連接正常，接地可靠。2.流動(dòng)相準(zhǔn)備：按方法要求配制流動(dòng)相（如甲醇-水混合液），經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾（有機(jī)相用有機(jī)系濾膜，水相用水系濾膜），超聲脫氣10~15分鐘（或用在線脫氣機(jī)），去除氣泡。3.色譜柱檢查：確認(rèn)色譜柱型號(hào)與方法匹配，柱溫箱內(nèi)連接緊密；新柱用低流速（0.2~0.5mL/min）甲醇或乙腈沖洗30分鐘活化。（二）樣品與試劑要求1.樣品預(yù)處理：固體樣品溶解（溶劑與流動(dòng)相兼容），液體樣品經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾（或高速離心）；樣品濃度適配檢測(cè)器線性范圍（如紫外檢測(cè)時(shí)0.1~1mg/mL）。2.試劑純度：流動(dòng)相溶劑為色譜純，緩沖鹽為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水（電阻率≥18MΩ·cm）。（三）環(huán)境要求儀器放置于恒溫（20~25℃）、恒濕（相對(duì)濕度≤80%）、通風(fēng)良好的實(shí)驗(yàn)室，遠(yuǎn)離強(qiáng)磁場(chǎng)、熱源，避免陽(yáng)光直射。四、操作步驟（一）開(kāi)機(jī)啟動(dòng)1.依次打開(kāi)穩(wěn)壓電源（若有）、色譜工作站、泵電源、檢測(cè)器電源，等待自檢（約3~5分鐘，工作站顯示“Ready”）。2.泵操作：設(shè)置流速（如1.0mL/min）、梯度程序（若需），點(diǎn)擊“Purge”排氣（流速5mL/min，持續(xù)1~2分鐘），再調(diào)至分析流速（如1.0mL/min），啟動(dòng)泵，觀察柱壓穩(wěn)定（波動(dòng)≤0.5MPa）。（二）方法設(shè)置與平衡1.參數(shù)設(shè)置：新建方法，設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)（如254nm）、柱溫（如30℃）、進(jìn)樣體積（如20μL）、流動(dòng)相比例（如甲醇-水=50:50）、運(yùn)行時(shí)間（保留時(shí)間的2~3倍）。2.色譜柱平衡：待流速、柱壓穩(wěn)定后，持續(xù)運(yùn)行流動(dòng)相，直至基線平穩(wěn)（紫外檢測(cè)器噪聲≤0.001AU，漂移≤0.005AU/h），通常需15~30分鐘（新柱或換流動(dòng)相需延長(zhǎng)）。（三）樣品分析1.進(jìn)樣準(zhǔn)備：樣品置進(jìn)樣瓶，蓋緊密封墊；進(jìn)樣器切至“Load”，微量進(jìn)樣針吸取樣品（排氣泡，吸取量為進(jìn)樣體積的2~3倍），注入進(jìn)樣口，旋閥至“Inject”，工作站自動(dòng)采集數(shù)據(jù)。2.數(shù)據(jù)監(jiān)控：觀察峰形（對(duì)稱、無(wú)拖尾）、保留時(shí)間（RSD≤1.0%）、峰面積（RSD≤2.0%）重復(fù)性，異常時(shí)暫停分析，檢查流動(dòng)相、色譜柱或操作。（四）關(guān)機(jī)流程1.分析結(jié)束后，進(jìn)樣閥切至“Load”，停止采集，用初始流動(dòng)相（或10%甲醇水）低流速（0.5mL/min）沖洗色譜柱30分鐘（去除殘留與緩沖鹽）。2.關(guān)閉泵流速（設(shè)為0），依次關(guān)閉檢測(cè)器、泵、工作站、電源；若用緩沖鹽，需用純水（0.5mL/min）沖洗泵頭與管路30分鐘，再用甲醇沖洗10分鐘（防鹽析堵塞）。五、維護(hù)與保養(yǎng)（一）日常清潔1.進(jìn)樣器：每周用異丙醇棉簽擦拭進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子、定子；進(jìn)樣針用甲醇超聲清洗（每次進(jìn)樣后立即沖洗）。2.檢測(cè)器流通池：每月用注射器反向沖洗流通池（流速≤0.5mL/min），去除殘留樣品或緩沖鹽。（二）定期維護(hù)1.色譜柱：每使用100次或柱效下降10%以上時(shí)，用純甲醇（0.5mL/min）沖洗4小時(shí)（反相柱），晾干后密封保存。2.泵：每季度檢查密封墊（漏液或壓力波動(dòng)時(shí)更換）；每年更換泵入口濾芯。（三）耗材更換進(jìn)樣墊：每進(jìn)樣100次后更換；濾膜（流動(dòng)相、樣品過(guò)濾）破損或堵塞時(shí)更換。六、故障處理（一）壓力異常過(guò)高：管路/濾膜/色譜柱篩板堵塞、流動(dòng)相比例不當(dāng)。處理：反向沖洗管路，更換濾膜；低流速?zèng)_洗色譜柱，或更換篩板。過(guò)低：漏液（接頭松動(dòng)、密封墊損壞）、流動(dòng)相不足。處理：擰緊接頭，補(bǔ)充流動(dòng)相，更換密封墊。（二）峰形異常拖尾：色譜柱污染、柱效下降。處理：甲醇沖洗色譜柱；拖尾因子＞1.5時(shí)更換色譜柱。分叉：進(jìn)樣量過(guò)大、篩板堵塞。處理：減少進(jìn)樣量；沖洗或更換篩板。（三）基線漂移/噪聲大漂移：流動(dòng)相揮發(fā)、柱溫波動(dòng)。處理：密封流動(dòng)相瓶，檢查柱溫；更換流動(dòng)相，重新平衡。噪聲：流動(dòng)相含氣泡、檢測(cè)器燈能量不足。處理：超聲脫氣，更換使用超2000小時(shí)的氘燈。七、注意事項(xiàng)1.安全操作：接觸有機(jī)溶劑時(shí)戴手套、護(hù)目鏡，避免吸入；高壓部件操作時(shí)禁止觸碰，關(guān)機(jī)后待壓力為0再拆卸管路。2.數(shù)據(jù)合規(guī)性：數(shù)據(jù)實(shí)時(shí)記錄、備份，原始數(shù)據(jù)保留至項(xiàng)目驗(yàn)收后至少2年。3.儀器管理：專人操作維護(hù)，填寫《儀器