細(xì)胞培養(yǎng)室常用儀器操作面試題一、選擇題（每題2分，共20題）說明：請選擇最符合題意的選項。1.細(xì)胞培養(yǎng)室常用的超凈工作臺，其潔凈等級通常達(dá)到（）。A.ISO5級B.ISO7級C.ISO8級D.ISO9級2.在進(jìn)行細(xì)胞傳代時，培養(yǎng)基pH值應(yīng)維持在（）。A.6.0-6.5B.7.0-7.5C.8.0-8.5D.9.0-9.53.下列哪種細(xì)胞培養(yǎng)基最適合用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)？（）A.DMEM/F12B.F12C.RPMI-1640D.M1994.細(xì)胞凍存時，常用的凍存劑是（）。A.DMSO（二甲基亞砜）B.FBS（胎牛血清）C.PBS（磷酸鹽緩沖液）D.HEPES緩沖液5.使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)時，通常需要添加的試劑是（）。A.PI（碘化丙啶）B.DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）C.TrypanBlue（臺盼藍(lán)）D.FITC（熒光素異硫氰酸酯）6.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，下列哪種操作會導(dǎo)致細(xì)胞污染？（）A.無菌操作B.使用無菌吸管C.培養(yǎng)皿未滅菌D.定期更換培養(yǎng)基7.下列哪種設(shè)備用于檢測細(xì)胞的DNA含量？（）A.倒置顯微鏡B.熒光顯微鏡C.流式細(xì)胞儀D.酶標(biāo)儀8.細(xì)胞培養(yǎng)箱的CO?濃度通?？刂圃冢ǎ.5%B.10%C.15%D.20%9.進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)時，使用的是（）。A.顯微鏡計數(shù)板B.酶標(biāo)儀C.流式細(xì)胞儀D.熒光分光光度計10.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基中的葡萄糖濃度通常維持在（）。A.5-10mMB.20-30mMC.50-60mMD.100-120mM二、判斷題（每題2分，共10題）說明：請判斷下列說法的正誤。1.細(xì)胞培養(yǎng)室應(yīng)定期進(jìn)行微生物檢測。（√）2.細(xì)胞凍存時，直接將細(xì)胞置于液氮中保存即可。（×）3.使用移液器時，應(yīng)垂直吸取和釋放液體。（√）4.細(xì)胞培養(yǎng)皿可以直接用酒精擦拭消毒。（×）5.流式細(xì)胞儀可以用于檢測細(xì)胞的凋亡情況。（√）6.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，pH值的變化不會影響細(xì)胞生長。（×）7.細(xì)胞傳代時，應(yīng)確保細(xì)胞密度在80%-90%之間。（√）8.細(xì)胞凍存時，應(yīng)先緩慢降溫至-80℃再轉(zhuǎn)入液氮。（√）9.使用酶標(biāo)儀進(jìn)行細(xì)胞檢測時，無需校準(zhǔn)儀器。（×）10.細(xì)胞培養(yǎng)室應(yīng)保持相對濕度在40%-60%之間。（√）三、簡答題（每題5分，共5題）說明：請簡要回答下列問題。1.簡述細(xì)胞培養(yǎng)室的無菌操作要點。2.細(xì)胞凍存時，為什么要使用DMSO？3.流式細(xì)胞儀的原理是什么？4.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如何判斷細(xì)胞是否污染？5.細(xì)胞計數(shù)時，臺盼藍(lán)染色的原理是什么？四、操作題（每題10分，共2題）說明：請描述具體操作步驟。1.描述細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的詳細(xì)步驟。2.描述使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測的操作步驟。答案與解析一、選擇題答案與解析1.A解析：超凈工作臺通常達(dá)到ISO5級潔凈度（100級），能滿足細(xì)胞培養(yǎng)的無菌要求。2.B解析：大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值維持在7.0-7.5，以保證細(xì)胞正常生長。3.A解析：DMEM/F12是常用的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)基，含有較低的血清濃度，適合懸浮培養(yǎng)。4.A解析：DMSO是常用的凍存劑，能降低細(xì)胞膜的通透性，防止細(xì)胞凍傷。5.C解析：臺盼藍(lán)染色可用于細(xì)胞計數(shù)，死細(xì)胞會被染色，活細(xì)胞則無色。6.C解析：培養(yǎng)皿未滅菌會導(dǎo)致細(xì)菌污染，影響細(xì)胞生長。7.C解析：流式細(xì)胞儀可以檢測細(xì)胞的DNA含量、凋亡情況等。8.A解析：細(xì)胞培養(yǎng)箱的CO?濃度通?？刂圃?%，以維持培養(yǎng)基的pH值。9.A解析：顯微鏡計數(shù)板用于手動細(xì)胞計數(shù)，操作簡單且經(jīng)濟(jì)。10.A解析：大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基的葡萄糖濃度維持在5-10mM，符合細(xì)胞代謝需求。二、判斷題答案與解析1.√解析：定期進(jìn)行微生物檢測可以確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的安全性。2.×解析：細(xì)胞凍存時應(yīng)逐步降溫至-80℃，再轉(zhuǎn)入液氮保存，避免細(xì)胞損傷。3.√解析：使用移液器時，垂直吸取和釋放可以減少氣泡和誤差。4.×解析：細(xì)胞培養(yǎng)皿應(yīng)高壓滅菌，酒精擦拭只能表面消毒。5.√解析：流式細(xì)胞儀可通過AnnexinV/PI染色檢測細(xì)胞凋亡。6.×解析：pH值變化會影響細(xì)胞酶活性，進(jìn)而影響細(xì)胞生長。7.√解析：細(xì)胞傳代時，密度過高或過低都會影響細(xì)胞生長。8.√解析：逐步降溫可以防止細(xì)胞形成冰晶，減少凍傷。9.×解析：酶標(biāo)儀檢測前需校準(zhǔn)，確保結(jié)果準(zhǔn)確。10.√解析：相對濕度過高或過低都會影響細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。三、簡答題答案與解析1.細(xì)胞培養(yǎng)室的無菌操作要點-操作前洗手并穿戴無菌手套、口罩、實驗服。-使用酒精燈或紫外燈消毒工作臺面。-移液器、吸管等器械需滅菌。-避免說話、咳嗽等動作，減少污染風(fēng)險。2.細(xì)胞凍存時使用DMSO的原因-DMSO能降低細(xì)胞膜的通透性，防止細(xì)胞內(nèi)水分結(jié)冰。-保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，提高凍存存活率。3.流式細(xì)胞儀的原理-通過激光照射細(xì)胞，檢測細(xì)胞表面的熒光或散射信號。-根據(jù)信號強度和細(xì)胞數(shù)量，分析細(xì)胞特征（如凋亡、分化等）。4.判斷細(xì)胞污染的方法-觀察培養(yǎng)基是否渾濁，可能由細(xì)菌或真菌污染。-涂片染色（如Gram染色）確認(rèn)污染類型。5.臺盼藍(lán)染色的原理-臺盼藍(lán)是陽離子染料，只能進(jìn)入細(xì)胞膜受損的細(xì)胞。-活細(xì)胞膜完整，不會被染色；死細(xì)胞膜通透性增加，被染色。四、操作題答案與解析1.細(xì)胞凍存和復(fù)蘇步驟-凍存：1.收集細(xì)胞，用凍存液（含10%DMSO和基礎(chǔ)培養(yǎng)基）重懸。2.分裝至凍存管，緩慢置于-20℃過夜。3.翌日轉(zhuǎn)移至-80℃保存，或直接投入液氮。-復(fù)蘇：1.從液氮中快速取出，置于37℃水浴解凍。2.加入預(yù)溫培養(yǎng)基，離心收集細(xì)胞。3.重新接種培養(yǎng)，觀察細(xì)胞狀態(tài)。2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡步驟1.收集細(xì)