寵物基因編輯師高級(jí)面試題集一、單選題（共5題，每題2分）題目1：在犬類中，利用CRISPR技術(shù)進(jìn)行斑點(diǎn)病（VWD）基因修復(fù)時(shí)，最常選用的等位基因是？A.VWD基因野生型B.VWD基因突變型（R506Q）C.VWD基因缺失型（ΔArg506）D.VWD基因增強(qiáng)型（P369L）答案：A解析：犬類斑點(diǎn)?。╒WD）通常由VWD基因的純合突變引起，修復(fù)時(shí)優(yōu)先選擇野生型等位基因以恢復(fù)正常凝血功能。題目2：在貓的白色斑紋?。↙eucistic）中，以下哪種基因編輯策略最適用于減少脫靶效應(yīng)？A.無(wú)痕編輯（HDR修復(fù)）B.點(diǎn)突變校正（SNP修正）C.同源重組修復(fù)（HOM修復(fù)）D.非同源末端連接（NHEJ修復(fù)）答案：C解析：同源重組修復(fù)（HOM修復(fù)）具有更高的精確性，適用于糾正貓的白色斑紋病等復(fù)雜遺傳病，脫靶效應(yīng)最低。題目3：以下哪種生物標(biāo)志物可用于評(píng)估基因編輯后的細(xì)胞表型穩(wěn)定性？A.karyotyping（核型分析）B.Westernblot（蛋白質(zhì)印跡）C.FISH（熒光原位雜交）D.ddPCR（數(shù)字PCR）答案：D解析：數(shù)字PCR（ddPCR）可精確定量基因編輯后的脫靶突變，適用于評(píng)估細(xì)胞表型穩(wěn)定性。題目4：在豬的克隆胚胎中，基因編輯前需進(jìn)行哪種檢測(cè)以避免內(nèi)源逆轉(zhuǎn)錄病毒（endogenousretrovirus,ERV）污染？A.PCR檢測(cè)B.qPCR檢測(cè)C.Southernblot檢測(cè)D.ELISA檢測(cè)答案：B解析：qPCR可實(shí)時(shí)定量ERV拷貝數(shù)，確?？寺∨咛o(wú)病毒污染，提高基因編輯效率。題目5：以下哪種技術(shù)最適合檢測(cè)基因編輯后的嵌合體比例？A.流式細(xì)胞術(shù)（Flowcytometry）B.熒光定量PCR（qPCR）C.數(shù)字PCR（ddPCR）D.基因測(cè)序（Whole-genomesequencing）答案：A解析：流式細(xì)胞術(shù)可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)嵌合體比例，適用于實(shí)時(shí)評(píng)估基因編輯效果。二、多選題（共5題，每題3分）題目1：以下哪些因素會(huì)影響基因編輯在犬類中的脫靶效率？A.gRNA序列特異性B.遞送載體類型C.基因組大小D.細(xì)胞分裂速率E.基因編輯工具版本答案：A、B、C、D解析：gRNA特異性、遞送載體、基因組復(fù)雜性和細(xì)胞分裂速率均影響脫靶率，工具版本次要。題目2：在貓的漸變毛色（Tortoiseshell）基因編輯中，以下哪些技術(shù)可避免嵌合體形成？A.單細(xì)胞編輯（Single-cellediting）B.胚胎顯微注射（Embryomicroinjection）C.CRISPR堿基編輯（Baseediting）D.基因座重組（Genelocusrearrangement）答案：A、C解析：?jiǎn)渭?xì)胞編輯和堿基編輯可避免嵌合體，顯微注射和基因重組仍需體外培養(yǎng)。題目3：以下哪些檢測(cè)方法可用于評(píng)估基因編輯后的免疫原性？A.ELISA檢測(cè)（抗體水平）B.流式細(xì)胞術(shù)（細(xì)胞因子分析）C.免疫組化（組織染色）D.Westernblot（蛋白質(zhì)修飾）E.qPCR（炎癥因子轉(zhuǎn)錄）答案：A、B、C、E解析：免疫原性評(píng)估需綜合抗體、細(xì)胞因子和組織染色，蛋白質(zhì)修飾與免疫原性關(guān)聯(lián)較弱。題目4：在豬的耐疫基因編輯中，以下哪些策略可提高編輯效率？A.雙等位基因編輯（Doublealleleediting）B.嵌合體篩選（Chimericselection）C.轉(zhuǎn)錄調(diào)控（Epigeneticmodification）D.基因合成（Syntheticgeneinsertion）答案：A、B、C解析：雙等位基因編輯、嵌合體篩選和表觀遺傳調(diào)控可顯著提高編輯效率，基因合成需額外驗(yàn)證。題目5：以下哪些法規(guī)需寵物基因編輯師了解？A.USDA動(dòng)物福利法案（AnimalWelfareAct）B.FDA基因編輯動(dòng)物指南（GeneticallyEngineeredAnimals）C.ISO生物安全標(biāo)準(zhǔn)（ISO14644）D.IACUC倫理審查（InstitutionalAnimalCareandUseCommittee）答案：A、B、D解析：USDA、FDA和IACUC是核心法規(guī)，ISO標(biāo)準(zhǔn)主要適用于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。三、簡(jiǎn)答題（共5題，每題4分）題目1：簡(jiǎn)述CRISPR-Cas9系統(tǒng)中PAM序列的作用及其在貓基因編輯中的選擇依據(jù)。答案：PAM序列是Cas9蛋白的識(shí)別位點(diǎn)，決定gRNA的切割效率。貓基因組中，NGG是常見PAM，選擇時(shí)需避免與內(nèi)源基因重疊以降低脫靶風(fēng)險(xiǎn)。題目2：解釋基因編輯后的嵌合體形成機(jī)制及其在犬繁育中的應(yīng)用。答案：嵌合體由編輯不完全的細(xì)胞分裂導(dǎo)致，在犬繁育中可通過(guò)嵌合體篩選優(yōu)化基因編輯效率，提高純合子比例。題目3：比較TALEN和CRISPR-Cas9技術(shù)在豬基因編輯中的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：TALEN特異性高但設(shè)計(jì)復(fù)雜，CRISPR靈活但脫靶風(fēng)險(xiǎn)稍高。豬基因編輯中，CRISPR更常用，但TALEN適用于高保守基因。題目4：描述基因編輯后生物標(biāo)志物的選擇標(biāo)準(zhǔn)。答案：標(biāo)志物需特異性強(qiáng)、靈敏度高，如qPCR檢測(cè)脫靶突變，流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估嵌合體，ELISA監(jiān)測(cè)免疫反應(yīng)。題目5：列舉3種減少基因編輯脫靶效應(yīng)的方法。答案：1.優(yōu)化gRNA設(shè)計(jì)；2.使用堿基編輯替代切割編輯；3.增強(qiáng)修復(fù)模板的純度。四、案例分析題（共2題，每題10分）題目1：某研究團(tuán)隊(duì)試圖通過(guò)CRISPR編輯狗的肥胖基因（LEP），但發(fā)現(xiàn)嵌合體比例僅30%。分析可能的原因并提出改進(jìn)方案。答案：原因：1.gRNA效率低；2.遞送載體毒性；3.基因組重復(fù)序列干擾。改進(jìn)：1.優(yōu)化gRNA篩選；2.使用脂質(zhì)納米顆粒遞送；3.增加同源修復(fù)模板。題目2：某農(nóng)場(chǎng)嘗試編輯豬的耐腹瀉基因（ITGB3），但發(fā)現(xiàn)編輯豬出現(xiàn)免疫異常。分析可能機(jī)制并建議解決方案