DB2301哈爾濱市市場監(jiān)督管理局發(fā)布I請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所農(nóng)業(yè)技術(shù)中1高效大豆根瘤菌菌株篩選技術(shù)規(guī)程GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn)NY/T1536微生物肥料田間試驗(yàn)技術(shù)規(guī)程及肥效評價(jià)指南NY/T1735根瘤菌生產(chǎn)菌株質(zhì)量評價(jià)技術(shù)規(guī)范存活能力強(qiáng)、具有高效固氮能力、競爭結(jié)瘤能力，接種后使大豆顯著增產(chǎn)的大豆根瘤菌菌株。凈后，選取4至6個(gè)新鮮的顆粒飽滿、深紅色的大2將采集的根瘤用0.1%升汞溶液表面滅菌3min，無菌水沖洗8次~10次。在無菌條件下，用鑷子將根瘤壓碎，擠出汁液涂布在根瘤菌瓊脂培養(yǎng)基上，26℃~28℃暗培養(yǎng)，快生菌培養(yǎng)3d~4d，慢生菌培養(yǎng)5d~7d，將長出的單菌落采用劃線培養(yǎng)法分離。根瘤菌瓊脂培養(yǎng)基配方應(yīng)符合NY410中的規(guī)定?？沙醪酱_定為大豆根瘤菌，菌體和菌落特征應(yīng)符合NY4瘤菌液體培養(yǎng)基中，在180r.min-1和28℃的恒溫?fù)u床中培大豆接種驗(yàn)證：選擇當(dāng)?shù)刂鲗?dǎo)大豆品種。大豆種子表面消毒后催芽，種芽長1mm~2mm時(shí)用純菌株接種液浸泡1min~2min，然后移植到試管根瘤菌瓊脂斜面上。設(shè)不接種的陰性對照和接種已知菌的陽性對照，每個(gè)處理重復(fù)≥3次，在20℃~25℃下培養(yǎng)，光強(qiáng)7000lx~8000lx，每天光照時(shí)間12h~13h。10d~20d后觀察大豆結(jié)瘤情況。如不接種的陰性對照結(jié)瘤，試驗(yàn)需要重試驗(yàn)沒有污染，在10-5稀釋度中70%植株結(jié)有效瘤，用刀片將根瘤切開，若根瘤內(nèi)部為粉紅色、紅色或褐色為有效根瘤，白色或綠色為無效根瘤，即確定接種菌為大豆根瘤菌蛭石采用間歇性高壓濕熱滅菌2次，每次121℃1h，然后置于陰涼通風(fēng)處2d~3d。盆缽用5%次氯酸鈉或0.1%高錳酸鉀溶液消毒，并用無菌水沖洗，將滅菌蛭石裝入盆缽中，澆適量無菌水備用。選擇當(dāng)?shù)刂鲗?dǎo)大豆品種。將4.2中確定的大豆根瘤菌菌株，制備成菌體數(shù)量≥1.0×10-9cfu/mL的接種液，證（待測根瘤菌接種將已表面滅菌的大豆種子在待測根瘤菌接種液中浸泡1min~2min，移植到滅菌后的蛭石中。然后在20℃~25℃下培養(yǎng)，光強(qiáng)7000lx~8000lx，每天光照時(shí)間12h~13h。每盆定植1株~2株大豆，不施肥或只施無氮營養(yǎng)液。5.3大豆根瘤菌與大豆品種的共生匹配性和固氮量。植株含氮量測定及其增加量的計(jì)算應(yīng)執(zhí)行NY/T比，收獲大豆植株總氮量增加≥20%，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)達(dá)到顯著水平，確定