免疫介導(dǎo)規(guī)定一、免疫介導(dǎo)概述

免疫介導(dǎo)是指機(jī)體免疫系統(tǒng)在應(yīng)對(duì)外來抗原或自身成分時(shí)產(chǎn)生的異常反應(yīng)，可能導(dǎo)致組織損傷或疾病。這一過程涉及多種細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞和信號(hào)通路，其異?？赡芤l(fā)自身免疫性疾病、過敏反應(yīng)等。

（一）免疫介導(dǎo)的基本原理

1.免疫系統(tǒng)的雙重作用：正常情況下，免疫系統(tǒng)保護(hù)機(jī)體免受病原體侵害；異常時(shí)，自身免疫反應(yīng)可能攻擊健康組織。

2.關(guān)鍵分子機(jī)制：包括T細(xì)胞/B細(xì)胞的活化、細(xì)胞因子的釋放（如TNF-α、IL-6）、抗體介導(dǎo)的損傷等。

3.信號(hào)通路：如NF-κB、MAPK等在免疫應(yīng)答中發(fā)揮核心調(diào)控作用。

（二）免疫介導(dǎo)的常見類型

1.自身免疫性疾?。喝珙愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE），由免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤識(shí)別自身抗原引發(fā)。

2.過敏反應(yīng)：如哮喘、過敏性鼻炎，由IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化導(dǎo)致。

3.免疫缺陷?。喝缭l(fā)性免疫缺陷，機(jī)體防御能力下降易感染。

二、免疫介導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制

免疫介導(dǎo)的病理過程可通過多種途徑調(diào)控，以維持免疫平衡。

（一）免疫抑制策略

1.藥物干預(yù)：

(1)糖皮質(zhì)激素：如潑尼松，通過抑制炎癥細(xì)胞遷移和細(xì)胞因子合成減輕免疫反應(yīng)。

(2)免疫抑制劑：如甲氨蝶呤（MTX），主要抑制T細(xì)胞增殖，用于RA治療。

(3)生物制劑：如TNF-α抑制劑（阿達(dá)木單抗），阻斷細(xì)胞因子信號(hào)通路。

2.非藥物方法：

(1)免疫重建：如骨髓移植，重建正常免疫功能。

(2)免疫教育：通過健康教育提升個(gè)體對(duì)免疫調(diào)節(jié)的認(rèn)知。

（二）免疫調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用

1.腫瘤壞死因子（TNF）：既是致病因子，也可作為治療靶點(diǎn)（如依那西普）。

2.白介素（IL）：如IL-10，具有抗炎作用，可作為潛在治療藥物。

三、免疫介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究方法

體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是研究免疫介導(dǎo)機(jī)制的重要手段。

（一）體外實(shí)驗(yàn)技術(shù)

1.細(xì)胞培養(yǎng)：分離T細(xì)胞、B細(xì)胞等，觀察其活化及細(xì)胞因子分泌。

2.流式細(xì)胞術(shù)：定量分析免疫細(xì)胞亞群（如CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞）。

3.ELISA檢測(cè)：定量測(cè)定血清中細(xì)胞因子水平（如IL-6，正常范圍0.5–5.0pg/mL）。

（二）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

1.基因敲除小鼠：構(gòu)建特定免疫分子缺陷模型（如TNF-α敲除鼠）。

2.誘導(dǎo)性自身免疫模型：如通過注射自身抗原（如髓鞘堿性蛋白）誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）。

3.人類隊(duì)列研究：收集疾病樣本（如RA患者滑膜液），分析免疫標(biāo)志物。

四、免疫介導(dǎo)的潛在應(yīng)用

免疫介導(dǎo)研究可推動(dòng)疾病診療進(jìn)展。

（一）精準(zhǔn)醫(yī)療方向

1.分子分型：根據(jù)免疫表型（如HLA分型）指導(dǎo)個(gè)性化治療方案。

2.基因編輯技術(shù)：如CRISPR修飾T細(xì)胞，提高CAR-T治療腫瘤的特異性。

（二）預(yù)防與健康管理

1.免疫疫苗：如流感疫苗，通過誘導(dǎo)免疫記憶降低感染風(fēng)險(xiǎn)。

2.疾病監(jiān)測(cè)：定期檢測(cè)免疫指標(biāo)（如C反應(yīng)蛋白，正常值<5mg/L）預(yù)警異常。

五、總結(jié)

免疫介導(dǎo)涉及復(fù)雜的生物學(xué)機(jī)制，其調(diào)控與疾病關(guān)聯(lián)密切。通過藥物、實(shí)驗(yàn)技術(shù)及精準(zhǔn)手段，可優(yōu)化免疫紊亂的治療策略，推動(dòng)醫(yī)學(xué)發(fā)展。未來需進(jìn)一步探索免疫穩(wěn)態(tài)的維持機(jī)制，以應(yīng)對(duì)各類免疫相關(guān)疾病。

**一、免疫介導(dǎo)概述**

免疫介導(dǎo)是指機(jī)體免疫系統(tǒng)在應(yīng)對(duì)外來抗原或自身成分時(shí)產(chǎn)生的異常反應(yīng)，可能導(dǎo)致組織損傷或疾病。這一過程涉及多種細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞和信號(hào)通路，其異?？赡芤l(fā)自身免疫性疾病、過敏反應(yīng)等。正常情況下，免疫系統(tǒng)通過精確的識(shí)別和反應(yīng)保護(hù)機(jī)體免受病原體侵害，并通過免疫耐受機(jī)制避免攻擊自身組織。然而，當(dāng)這些調(diào)控機(jī)制失調(diào)時(shí)，免疫應(yīng)答可能過度、持續(xù)或針對(duì)錯(cuò)誤目標(biāo)，從而引發(fā)病理變化。理解免疫介導(dǎo)的機(jī)制對(duì)于診斷、治療和預(yù)防相關(guān)疾病至關(guān)重要。

（一）免疫介導(dǎo)的基本原理

1.免疫系統(tǒng)的雙重作用：免疫系統(tǒng)具有保護(hù)性和潛在致病性雙重特性。

***保護(hù)性作用**：識(shí)別并清除病原體（如細(xì)菌、病毒）、腫瘤細(xì)胞等異物。這涉及免疫細(xì)胞的識(shí)別（如T細(xì)胞受體識(shí)別抗原肽-MHC復(fù)合物）、活化（如通過BCR、TCR信號(hào)及共刺激分子）、增殖和效應(yīng)功能（如細(xì)胞毒性T細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞、巨噬細(xì)胞吞噬降解病原體）。

***致病性作用**：在異常情況下，免疫系統(tǒng)可能無法區(qū)分“自我”與“非我”，或?qū)o害抗原（如環(huán)境中的某些分子）產(chǎn)生過度反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷。例如，在自身免疫病中，自身反應(yīng)性T細(xì)胞或B細(xì)胞攻擊自身組織抗原（如類風(fēng)濕因子攻擊關(guān)節(jié)滑膜）。

2.關(guān)鍵分子機(jī)制：免疫介導(dǎo)過程涉及多種分子的精確調(diào)控。

***抗原呈遞**：抗原呈遞細(xì)胞（APC，如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）攝取、處理并呈遞抗原肽至MHC分子（MHC-I呈遞給CD8+T細(xì)胞，MHC-II呈遞給CD4+T細(xì)胞），是啟動(dòng)T細(xì)胞應(yīng)答的第一步。

***細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)**：細(xì)胞因子是免疫反應(yīng)中的關(guān)鍵信號(hào)分子，由不同免疫細(xì)胞產(chǎn)生，可促進(jìn)或抑制免疫應(yīng)答。例如：

***促炎細(xì)胞因子**：如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6），在感染或組織損傷早期促進(jìn)炎癥反應(yīng)和免疫細(xì)胞募集。

***抗炎/免疫抑制細(xì)胞因子**：如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β），在炎癥后期抑制免疫反應(yīng)，防止過度損傷。

***免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子**：如白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-13（IL-13），主要參與過敏反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)。

***免疫細(xì)胞相互作用**：免疫細(xì)胞間的直接接觸和旁分泌信號(hào)（如細(xì)胞因子）協(xié)同調(diào)控免疫應(yīng)答。例如，CD4+T輔助細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子（如IL-2、IL-4）來影響B(tài)細(xì)胞分化、細(xì)胞毒性T細(xì)胞活化和其他T細(xì)胞的增殖。

3.信號(hào)通路：多種信號(hào)通路在免疫細(xì)胞的活化、增殖、分化和凋亡中發(fā)揮核心作用。

***鈣信號(hào)通路**：細(xì)胞活化時(shí)鈣離子內(nèi)流，激活下游蛋白激酶（如鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶），調(diào)控基因表達(dá)。

***MAPK通路**：如p38MAPK、JNK、ERK，參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和分化。

***NF-κB通路**：調(diào)控多種促炎細(xì)胞因子和粘附分子的基因表達(dá)，在炎癥反應(yīng)中核心作用。

***JAK/STAT通路**：主要由細(xì)胞因子受體激活，下游STAT蛋白入核調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，影響細(xì)胞功能。

（二）免疫介導(dǎo)的常見類型

1.自身免疫性疾?。簷C(jī)體免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤識(shí)別自身抗原并發(fā)起攻擊，導(dǎo)致慢性炎癥和組織損傷。

***類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）**：以滑膜增生、軟骨和骨侵蝕為特征。免疫介導(dǎo)機(jī)制包括：T細(xì)胞（特別是Th17細(xì)胞）和巨噬細(xì)胞的活化導(dǎo)致滑膜炎癥；B細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)自身抗原（如瓜氨酸化蛋白）的抗體，形成免疫復(fù)合物沉積；細(xì)胞因子（TNF-α、IL-6）網(wǎng)絡(luò)失調(diào)加劇炎癥。

***系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）**：表現(xiàn)為多系統(tǒng)受累，包括皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟等。關(guān)鍵機(jī)制包括：產(chǎn)生多種自身抗體（抗雙鏈DNA抗體、抗核抗體），可攻擊細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)成分或形成免疫復(fù)合物沉積于血管；B細(xì)胞超活化；T細(xì)胞功能紊亂（如輔助性T細(xì)胞失衡）。

***1型糖尿?。═1D）**：胰島β細(xì)胞被自身免疫性T細(xì)胞（特別是CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞）特異性攻擊和破壞，導(dǎo)致胰島素分泌不足。主要靶抗原包括谷氨酸脫羧酶（GAD65）、胰島素自身抗原（IAA）等。

2.過敏反應(yīng)：機(jī)體對(duì)通常無害的物質(zhì)（過敏原）產(chǎn)生過度免疫反應(yīng)，主要涉及IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化。

***過敏性哮喘**：吸入過敏原后，Th2型輔助性T細(xì)胞（Th2細(xì)胞）被激活并大量分泌IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子。IL-4促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生特異性IgE抗體；IL-5促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞募集；IL-13引起支氣管平滑肌收縮和粘液高分泌。IgE與肥大細(xì)胞表面的高親和力受體（FcεRI）結(jié)合，當(dāng)再次接觸過敏原時(shí)觸發(fā)肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺、白三烯等介質(zhì)，導(dǎo)致呼吸道癥狀。

***過敏性鼻炎**：類似哮喘機(jī)制，但主要影響鼻腔黏膜。接觸過敏原后，Th2細(xì)胞活化，IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒，以及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)導(dǎo)致鼻塞、流涕、打噴嚏等癥狀。

***食物過敏**：口服或接觸食物過敏原后，在腸道等部位引發(fā)免疫反應(yīng)。機(jī)制可包括腸道屏障功能受損導(dǎo)致的過敏原滲透增加（“泄漏理論”），以及Th2細(xì)胞介導(dǎo)的IgE產(chǎn)生和肥大細(xì)胞活化。

3.免疫缺陷?。簷C(jī)體免疫系統(tǒng)部分或完全功能缺陷，導(dǎo)致對(duì)感染（尤其是機(jī)會(huì)性感染）的抵抗力下降或自身穩(wěn)定機(jī)制失常。

***原發(fā)性免疫缺陷?。≒ID）**：由基因突變導(dǎo)致特定免疫細(xì)胞或分子功能缺失。例如：

***選擇性IgA缺乏癥**：B細(xì)胞產(chǎn)生IgA的能力缺陷，易患呼吸道和消化道感染。

***普通變異型免疫缺陷?。–VID）**：T細(xì)胞和B細(xì)胞功能均存在不同程度的缺陷，表現(xiàn)為反復(fù)感染、自身免疫病或腫瘤風(fēng)險(xiǎn)增加。

***嚴(yán)重CombinedImmunodeficiency(SCID)**：如“氣泡男孩”癥，T細(xì)胞發(fā)育嚴(yán)重缺陷，幾乎無法產(chǎn)生功能性T細(xì)胞，暴露于環(huán)境中正常個(gè)體可耐受的微生物后即可致命。

***獲得性免疫缺陷**：如艾滋?。ˋIDS），由人類免疫缺陷病毒（HIV）感染導(dǎo)致。HIV主要攻擊CD4+T輔助細(xì)胞，隨著病毒復(fù)制和CD4+細(xì)胞大量死亡，免疫系統(tǒng)功能逐漸衰竭，患者易發(fā)生機(jī)會(huì)性感染和腫瘤。

**二、免疫介導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制**

免疫介導(dǎo)的病理過程可通過多種途徑調(diào)控，以維持免疫平衡。免疫系統(tǒng)的負(fù)反饋機(jī)制和免疫檢查點(diǎn)對(duì)于防止過度反應(yīng)和自身攻擊至關(guān)重要。這些調(diào)控機(jī)制失常時(shí)，則可能導(dǎo)致持續(xù)炎癥或免疫失調(diào)。

（一）免疫抑制策略

針對(duì)免疫介導(dǎo)疾病的治療通常需要抑制異常的免疫反應(yīng)，同時(shí)盡量保留對(duì)病原體的正常防御能力。治療策略的選擇取決于疾病的類型、嚴(yán)重程度和患者個(gè)體情況。

1.藥物干預(yù)：

(1)糖皮質(zhì)激素：如潑尼松、地塞米松。作用機(jī)制廣泛，包括：

*抑制免疫細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）向炎癥部位遷移。

*抑制細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、IL-6）的產(chǎn)生和釋放。

*抑制花生四烯酸代謝（阻斷前列腺素和白三烯的合成）。

*抑制B細(xì)胞增殖和抗體產(chǎn)生。

*主要用于急性期控制嚴(yán)重炎癥，長(zhǎng)期使用有顯著副作用。

(2)免疫抑制劑：主要用于控制慢性自身免疫性疾病或預(yù)防器官移植排斥。

***傳統(tǒng)免疫抑制劑**：

***甲氨蝶呤（MTX）**：通過抑制二氫葉酸還原酶，干擾DNA和RNA合成，主要抑制T細(xì)胞增殖，對(duì)B細(xì)胞影響較小。常用于RA治療。

***來氟米特（LEF）**：通過抑制嘧啶合成，抑制淋巴細(xì)胞增殖，并具有抗炎作用。

***硫唑嘌呤（AZA）**：抑制嘌呤合成，抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞增殖。

***環(huán)孢素A（CsA）**：抑制鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶，阻斷T細(xì)胞活化信號(hào)傳導(dǎo)。

***霉酚酸酯（MMF，如驍悉）**：抑制次黃嘌呤核苷單磷酸脫氫酶（IMPDH），抑制淋巴細(xì)胞增殖。

***生物制劑**：

***TNF-α抑制劑**（依那西普、阿達(dá)木單抗、英夫利西單抗等）：阻斷TNF-α與受體結(jié)合，抑制下游炎癥信號(hào)，用于治療RA、AS、銀屑病、克羅恩病等。

***IL-6受體抑制劑**（托珠單抗）：阻斷IL-6與其受體結(jié)合，用于治療RA、RS3PE等。

***T細(xì)胞共刺激調(diào)節(jié)劑**（阿巴西普、依帕珠單抗）：阻斷CTLA-4與CD80/CD86結(jié)合，抑制T細(xì)胞活化，用于治療RA、PsA等。

***B細(xì)胞清除劑**（利妥昔單抗）：針對(duì)CD20陽性B細(xì)胞，通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性（CDC）清除B細(xì)胞，用于治療CD20陽性的B細(xì)胞淋巴瘤、某些自身免疫?。ㄈ缋钳?、類風(fēng)濕）。

(3)小分子靶向藥物：如JAK抑制劑（托法替布、巴瑞替尼），直接抑制JAK信號(hào)通路，減少多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生，用于治療RA、JIA、特應(yīng)性皮炎等，相比傳統(tǒng)免疫抑制劑可能具有更好的安全性profiles。

2.非藥物方法：

(1)免疫重建：在某些情況下，可以通過移植方式重建正常的免疫功能。

***骨髓移植/造血干細(xì)胞移植**：主要用于治療某些類型的原發(fā)性免疫缺陷病或復(fù)發(fā)性嚴(yán)重感染。通過移植健康的造血干細(xì)胞，重建包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的整個(gè)造血系統(tǒng)。

***胸腺移植**：對(duì)于先天性胸腺發(fā)育不全（DiGeorge綜合征）患者，移植胸腺可能幫助重建T細(xì)胞免疫功能。

(2)免疫教育與管理：通過健康教育提升個(gè)體對(duì)自身疾病的認(rèn)知，教授自我管理技巧，如：

*識(shí)別疾病發(fā)作前兆。

*規(guī)律用藥，監(jiān)測(cè)副作用。

*避免已知的誘發(fā)因素（如某些食物、藥物、感染）。

*保持健康生活方式（均衡飲食、適度運(yùn)動(dòng)、充足睡眠）。

*定期復(fù)診，及時(shí)調(diào)整治療方案。

（二）免疫調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用

除了抑制免疫反應(yīng)，還可以利用免疫調(diào)節(jié)劑來“教育”或“平衡”免疫系統(tǒng)，使其恢復(fù)對(duì)自身抗原的耐受或?qū)^敏原的適當(dāng)反應(yīng)。

1.腫瘤壞死因子（TNF）：TNF既是重要的致病因子，也被開發(fā)為治療藥物，體現(xiàn)了其雙面性。

***致病作用**：在自身免疫性疾病中，TNF-α由活化的巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等產(chǎn)生，促進(jìn)炎癥反應(yīng)、血管生成和組織損傷。例如，在RA中，TNF-α誘導(dǎo)滑膜成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)關(guān)節(jié)破壞。

***治療應(yīng)用**：TNF-α抑制劑通過阻斷TNF-α的作用，顯著減輕多種自身免疫性疾病（如RA、AS、Psoriasis、克羅恩病、銀屑?。┑陌Y狀和病理改變。依那西普（完全人源IgG1單抗）、阿達(dá)木單抗（人源化IgG1單抗）、英夫利西單抗（嵌合IgG1單抗）是常用藥物。

2.白介素（IL）：IL家族包含多種細(xì)胞因子，其中一些具有免疫調(diào)節(jié)作用，可作為治療靶點(diǎn)。

***IL-10**：主要由活化巨噬細(xì)胞、Treg細(xì)胞等產(chǎn)生，具有顯著的抗炎和免疫抑制功能。IL-10可以抑制其他促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，促進(jìn)免疫耐受。目前已有IL-10類似物（如美洛西普）用于治療某些自身免疫病和炎癥性疾病，但效果和安全性仍在評(píng)估中。IL-10也參與調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡。

***IL-4**：主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，是促進(jìn)B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞并產(chǎn)生IgE的關(guān)鍵細(xì)胞因子，在過敏反應(yīng)和寄生蟲感染中發(fā)揮作用。針對(duì)IL-4或其受體的抑制劑（如抗IL-4R抗體）正在研究開發(fā)中，旨在抑制Th2型免疫應(yīng)答，治療過敏性疾病。

***IL-37**：是一種新型抗炎細(xì)胞因子，可以抑制IL-1β、IL-18的產(chǎn)生，并抑制NF-κB通路。IL-37在多種炎癥性疾病模型中顯示出免疫調(diào)節(jié)潛力，相關(guān)藥物研究正在進(jìn)行中。

**三、免疫介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究方法**

體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是研究免疫介導(dǎo)機(jī)制、評(píng)估藥物療效和探索疾病發(fā)生發(fā)展過程的重要手段。這些方法有助于從分子、細(xì)胞和整體水平深入理解免疫反應(yīng)。

（一）體外實(shí)驗(yàn)技術(shù)

體外實(shí)驗(yàn)在可控環(huán)境下研究免疫細(xì)胞的生物學(xué)行為和相互作用。

1.細(xì)胞培養(yǎng)：這是最基礎(chǔ)的技術(shù)，用于分離、純化和維持免疫細(xì)胞。

***分離方法**：

***密度梯度離心**：利用細(xì)胞在特定介質(zhì)（如Ficoll-Paque）中的浮力差異進(jìn)行分離，如分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）。

***磁珠分選（MACS）**：利用針對(duì)特定細(xì)胞表面標(biāo)記（如CD4、CD8、CD19）的磁珠，在磁場(chǎng)輔助下特異性富集目標(biāo)細(xì)胞。

***流式細(xì)胞術(shù)分選（FACS）**：結(jié)合熒光標(biāo)記抗體識(shí)別細(xì)胞表面標(biāo)記，并利用激光和電子檢測(cè)系統(tǒng)按細(xì)胞類型進(jìn)行物理性分離。

***培養(yǎng)體系**：

***單細(xì)胞培養(yǎng)**：將純化的單個(gè)免疫細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿或微孔板中，研究其增殖、分化和細(xì)胞因子分泌。

***共培養(yǎng)**：將不同類型的免疫細(xì)胞（如APC與T細(xì)胞）共同培養(yǎng)，研究細(xì)胞間的直接相互作用和信號(hào)傳遞。

***條件培養(yǎng)液**：收集某種細(xì)胞（如T細(xì)胞）分泌的細(xì)胞因子，用于刺激其他細(xì)胞（如B細(xì)胞），研究細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)。

***應(yīng)用**：檢測(cè)特定刺激（如LPS、抗原）對(duì)免疫細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生、細(xì)胞凋亡的影響；研究細(xì)胞因子間的協(xié)同或拮抗作用；篩選具有免疫調(diào)節(jié)功能的化合物。

2.流式細(xì)胞術(shù)（FCM）：一種高通量、多參數(shù)的細(xì)胞分析技術(shù)，可同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記、細(xì)胞內(nèi)分子（經(jīng)染色后）和細(xì)胞物理特性（如凋亡）。

***原理**：利用激光照射細(xì)胞，激發(fā)熒光染料，通過熒光探測(cè)器檢測(cè)不同顏色的熒光信號(hào)，結(jié)合細(xì)胞散射信號(hào)（前向散射FSC，側(cè)向散射SSC）進(jìn)行細(xì)胞識(shí)別和定量分析。

***標(biāo)記物**：使用熒光素（如FITC、PE、AlexaFluor）或同型對(duì)照抗體標(biāo)記細(xì)胞表面分子（如CD3,CD4,CD8,CD19,CD25）；使用透膜染料（如PI,7-AAD）或核酸染料（如DAPI,Hoechst）評(píng)估細(xì)胞周期或凋亡；使用細(xì)胞內(nèi)染色劑（如磷酸化抗體、細(xì)胞因子）評(píng)估細(xì)胞活化狀態(tài)或內(nèi)含物。

***數(shù)據(jù)分析**：通過設(shè)置門控（Gating）區(qū)域，選擇特定細(xì)胞群體（如CD4+T細(xì)胞），分析其亞群比例、平均熒光強(qiáng)度（MFI）等指標(biāo)?？捎糜诙糠治雒庖呒?xì)胞亞群（如Treg細(xì)胞比例）、活化狀態(tài)（如CD69,CD25表達(dá)）、細(xì)胞因子產(chǎn)生（如通過PE/Cy7標(biāo)記的細(xì)胞因子抗體）。

3.ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）：一種廣泛應(yīng)用于檢測(cè)樣本中特定蛋白質(zhì)（主要是細(xì)胞因子、抗體、激素等）濃度的方法。

***原理**：基于抗原抗體特異性結(jié)合原理，結(jié)合酶標(biāo)技術(shù)和顯色底物。通常分為雙抗體夾心法（檢測(cè)多抗性抗原）、間接法（檢測(cè)抗體）和競(jìng)爭(zhēng)法等。

***步驟**：

1.包被：將捕獲抗體固定在微孔板表面。

2.加樣：加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，與捕獲抗體結(jié)合。

3.結(jié)合：加入檢測(cè)抗體（酶標(biāo)二抗或生物素標(biāo)記抗體），形成“捕獲抗體-待測(cè)物-檢測(cè)抗體”三元復(fù)合物。

4.顯色：加入酶的底物（如TMB），酶催化底物變色。

5.讀板：用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中待測(cè)物濃度。

***應(yīng)用**：定量檢測(cè)血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織提取物中的細(xì)胞因子（如TNF-α,IL-6,IL-10濃度），檢測(cè)抗體水平（如IgG,IgE）。

4.細(xì)胞增殖試驗(yàn)：檢測(cè)免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞、B細(xì)胞）在特定刺激下的增殖活性。

***方法**：

***MTT法**：細(xì)胞在培養(yǎng)過程中產(chǎn)生代謝活性的黃原酸酯，與MTT試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色甲臜晶體，溶于DMSO后用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度。細(xì)胞增殖越活躍，甲臜晶體越多，吸光度越高。

***CCK-8法**：類似MTT，但使用更水溶性的WST-8試劑，操作更簡(jiǎn)便，毒性更低。

***[3H]-胸腺嘧啶摻入法**：將放射性同位素標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷加入細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞增殖時(shí)DNA合成會(huì)將其摻入，通過測(cè)定放射性計(jì)數(shù)來反映增殖水平。此方法靈敏度高，但涉及放射性廢料處理。

***應(yīng)用**：評(píng)估抗原、細(xì)胞因子、藥物對(duì)免疫細(xì)胞增殖的影響；檢測(cè)T細(xì)胞增殖反應(yīng)（如混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)MLR）。

5.WesternBlot：用于檢測(cè)細(xì)胞或組織中特定蛋白質(zhì)的條帶，并可半定量分析其表達(dá)水平。

***步驟**：

1.蛋白質(zhì)提取與變性：細(xì)胞裂解液提取總蛋白，加入SDS樣品緩沖液，煮沸使蛋白質(zhì)變性并加入紅色染料（如溴酚藍(lán)）進(jìn)行電泳時(shí)指示位置。

2.SDS電泳：在聚丙烯酰胺凝膠中，利用SDS使蛋白質(zhì)變性并帶負(fù)電荷，按分子量大小進(jìn)行分離。

3.轉(zhuǎn)膜：將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF或NC膜上。

4.封閉：用封閉液（如BSA、脫脂奶粉）封閉膜上非特異性位點(diǎn)。

5.一抗孵育：用特異性針對(duì)目標(biāo)蛋白的單克隆或多克隆抗體孵育。

6.二抗孵育：用標(biāo)記有酶（如HRP）或熒光基團(tuán)的二抗孵育，與結(jié)合在一抗上的蛋白結(jié)合。

7.顯色/檢測(cè)：加入酶底物（如TMB）進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯色，或使用化學(xué)發(fā)光/熒光成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)。

8.分析：通過凝膠成像系統(tǒng)分析目標(biāo)蛋白的條帶位置和相對(duì)強(qiáng)度。

***應(yīng)用**：檢測(cè)細(xì)胞因子、免疫相關(guān)蛋白（如信號(hào)通路蛋白、細(xì)胞因子受體）的表達(dá)水平變化；驗(yàn)證其他技術(shù)的結(jié)果。

（二）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)在更接近生理環(huán)境的動(dòng)物模型中研究免疫介導(dǎo)疾病的發(fā)生機(jī)制和藥物干預(yù)效果。

1.基因敲除/敲入小鼠：通過基因工程技術(shù)構(gòu)建缺乏特定基因（敲除）或引入新基因/改造現(xiàn)有基因（敲入）的小鼠，模擬人類疾病或研究特定基因的功能。

***構(gòu)建方式**：主要采用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）打靶技術(shù)或CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)。

***應(yīng)用**：

***基因敲除小鼠**：用于研究特定基因（如TNF-α,IL-10,HLA基因）在免疫系統(tǒng)功能或疾病發(fā)生中的作用。例如，TNF-α敲除小鼠對(duì)多種炎癥性疾?。ㄈ缙咸涯ぱ?、膠原?。┚哂械挚沽Α?/p>

***條件性基因敲除小鼠**：通過使用Cre-LoxP系統(tǒng)，在特定組織或特定發(fā)育階段特異性地敲除基因，更精確地研究基因功能。

***轉(zhuǎn)基因小鼠**：將人類基因（如自身抗原）導(dǎo)入小鼠基因組，用于研究自身免疫病機(jī)制或構(gòu)建過敏模型。

2.誘導(dǎo)性自身免疫模型：人為誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生特定的自身免疫反應(yīng)，模擬人類自身免疫病的部分特征。

***實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）**：主要用于研究多發(fā)性硬化癥（MS）的機(jī)制。通常在小鼠（常用C57BL/6,SJL等品系）體內(nèi)注射髓鞘堿性蛋白（MBP）、髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白（MOG）或我的elin蛋白等自身抗原，并聯(lián)合佐劑（如完全弗氏佐劑CFA或不完全弗氏佐劑IFA）和致炎劑（如Pertussistoxin）激發(fā)免疫反應(yīng)。通過觀察動(dòng)物的行為變化（如尾巴麻痹、后肢無力、體重下降）評(píng)估疾病嚴(yán)重程度。

***膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）**：主要用于研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的機(jī)制。在小鼠（常用DBA/1品系）關(guān)節(jié)內(nèi)或體內(nèi)注射牛型膠原蛋白（CII），誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)CII的自身抗體和細(xì)胞免疫，導(dǎo)致關(guān)節(jié)腫脹、侵蝕和功能障礙。

3.過敏動(dòng)物模型：用于研究過敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制和測(cè)試抗過敏藥物。

***被動(dòng)致敏模型**：通過腹腔注射或皮膚注射結(jié)合了過敏原和佐劑（如氫氧化鋁）的溶液，使動(dòng)物產(chǎn)生對(duì)該過敏原的特異性IgE抗體。隨后通過吸入或經(jīng)皮接觸過敏原，可誘發(fā)類似哮喘或過敏性鼻炎的癥狀。

***主動(dòng)致敏模型**：先注射過敏原和佐劑誘導(dǎo)IgE產(chǎn)生，一段時(shí)間后再次接觸過敏原，引發(fā)更強(qiáng)烈的過敏反應(yīng)。此模型更接近自然過敏發(fā)生過程。

***應(yīng)用**：評(píng)價(jià)抗過敏藥物（如抗IgE抗體、組胺受體拮抗劑、白三烯受體拮抗劑）對(duì)過敏癥狀和炎癥的改善效果。

4.免疫缺陷動(dòng)物模型：如SCID小鼠（嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷），缺乏功能性T細(xì)胞和B細(xì)胞，易感染機(jī)會(huì)性病原體，可用于研究免疫缺陷病的機(jī)制或測(cè)試疫苗。

5.人類隊(duì)列研究：在人體內(nèi)研究免疫介導(dǎo)疾病。

***樣本收集**：收集來自健康對(duì)照者和患者的血液、尿液、組織活檢樣本。

***檢測(cè)指標(biāo)**：分析免疫細(xì)胞表型（流式細(xì)胞術(shù)）、細(xì)胞因子水平（ELISA、multiplex）、自身抗體譜（ELISA、WesternBlot）、免疫細(xì)胞功能（增殖、細(xì)胞因子分泌）、基因表達(dá)譜（qPCR、RNA-Seq）、HLA分型等。

***研究設(shè)計(jì)**：前瞻性隊(duì)列研究（追蹤觀察人群發(fā)病情況）、回顧性病例對(duì)照研究（比較患者和對(duì)照的免疫特征）、交叉研究（在短期內(nèi)比較不同干預(yù)措施下的免疫反應(yīng)）。

***應(yīng)用**：識(shí)別疾病風(fēng)險(xiǎn)因素、發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物（用于診斷、預(yù)后或療效評(píng)估）、驗(yàn)證體外和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果、評(píng)估治療效果。

**四、免疫介導(dǎo)的潛在應(yīng)用**

免疫介導(dǎo)研究不僅加深了我們對(duì)疾病機(jī)制的理解，也為疾病診療和健康管理帶來了新的機(jī)遇。通過調(diào)控免疫反應(yīng)，可以更有效地治療免疫介導(dǎo)疾病，并預(yù)防或延緩其發(fā)生。

（一）精準(zhǔn)醫(yī)療方向

精準(zhǔn)醫(yī)療強(qiáng)調(diào)根據(jù)個(gè)體差異（基因、環(huán)境、生活方式等）制定個(gè)性化診療方案。免疫介導(dǎo)疾病的研究為精準(zhǔn)免疫治療奠定了基礎(chǔ)。

1.分子分型：

***免疫表型分型**：根據(jù)患者血液或組織中免疫細(xì)胞的組成和功能狀態(tài)（如T細(xì)胞亞群比例、細(xì)胞因子分泌譜、免疫檢查點(diǎn)表達(dá)）進(jìn)行分類。例如，RA患者可分為Th1/Th2型、Th17型、Treg細(xì)胞功能缺陷型等亞型，不同亞型對(duì)藥物治療的反應(yīng)可能不同。

***遺傳分型**：分析患者的HLA類型（如HLA-DRB1共享表位）和其他免疫相關(guān)基因變異，預(yù)測(cè)疾病易感性、嚴(yán)重程度和藥物反應(yīng)。例如，特定HLA型別與SLE的某些亞型或藥物（如TNF抑制劑）的療效相關(guān)。

***生物標(biāo)志物分型**：發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證可反映疾病狀態(tài)或治療反應(yīng)的客觀指標(biāo)（如可溶性IL-2受體水平、特定抗體滴度、外泌體攜帶的免疫分子）。這些標(biāo)志物可用于風(fēng)險(xiǎn)分層、療效預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展。

2.靶向治療優(yōu)化：

***基于分型的治療選擇**：根據(jù)患者的免疫分型選擇最合適的藥物。例如，對(duì)Th17高表達(dá)的RA患者可能更適用IL-17抑制劑（如司庫(kù)奇尤單抗），對(duì)TNF-α產(chǎn)生過多的患者使用TNF抑制劑。

***動(dòng)態(tài)調(diào)整治療方案**：通過監(jiān)測(cè)治療過程中的免疫反應(yīng)變化（如藥物靶點(diǎn)表達(dá)水平、細(xì)胞因子譜），及時(shí)調(diào)整藥物劑量或更換治療方案，以獲得最佳療效并減少副作用。

3.新型治療開發(fā)：

***細(xì)胞療法**：如CAR-T細(xì)胞療法，通過基因工程技術(shù)改造患者自身的T細(xì)胞，使其表達(dá)針對(duì)特定腫瘤抗原的嵌合抗原受體（CAR），從而特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。該技術(shù)已在某些血液腫瘤中取得顯著成功，并探索應(yīng)用于自身免疫病領(lǐng)域。

***免疫檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑**：除了現(xiàn)有藥物，更多作用于PD-1/PD-L1、CTLA-4等免疫檢查點(diǎn)的藥物正在研發(fā)中，有望提高免疫治療的療效和適用范圍，尤其是在腫瘤和自身免疫性疾病中。

（二）預(yù)防與健康管理

除了治療，免疫介導(dǎo)研究也為疾病的預(yù)防和管理提供了新思路。

1.疾病預(yù)測(cè)與早期干預(yù)：

***風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型**：整合遺傳因素、免疫表型、環(huán)境暴露等多種信息，建立預(yù)測(cè)模型，識(shí)別有高發(fā)免疫介導(dǎo)疾病風(fēng)險(xiǎn)的人群。

***早期篩查**：開發(fā)基于免疫標(biāo)志物的篩查方法，在疾病癥狀出現(xiàn)前或早期發(fā)現(xiàn)異常，及時(shí)進(jìn)行干預(yù)。例如，監(jiān)測(cè)血清中某些自身抗體或細(xì)胞因子水平的變化，可能有助于早期診斷SLE或RA。

2.免疫疫苗：

***感染性疫苗**：傳統(tǒng)疫苗通過誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體和細(xì)胞免疫（特別是T細(xì)胞免疫）來預(yù)防感染。研究免疫機(jī)制有助于設(shè)計(jì)更有效的疫苗，如針對(duì)新型病原體的mRNA疫苗或病毒載體疫苗。

***預(yù)防自身免疫病疫苗**：理論上，通過誘導(dǎo)對(duì)自身抗原的耐受性T細(xì)胞（如誘導(dǎo)Treg細(xì)胞）或封閉自身抗體，可能預(yù)防或延緩自身免疫病的發(fā)生。相關(guān)研究正在探索中，但面臨巨大挑戰(zhàn)。

3.持續(xù)免疫監(jiān)測(cè)：

***健康管理工具**：開發(fā)便捷的免疫檢測(cè)技術(shù)（如基于智能手機(jī)的流式細(xì)胞儀、便攜式細(xì)胞因子檢測(cè)儀），用于個(gè)體化健康監(jiān)測(cè)。定期檢測(cè)免疫指標(biāo)（如CD4+/CD8+比例、關(guān)鍵細(xì)胞因子水平），可能有助于評(píng)估免疫狀態(tài)、預(yù)警疾病復(fù)發(fā)或監(jiān)測(cè)治療副作用。

***生活方式指導(dǎo)**：根據(jù)免疫檢測(cè)結(jié)果，提供個(gè)性化的生活方式建議，如飲食調(diào)整（補(bǔ)充特定維生素、益生菌）、壓力管理、適度運(yùn)動(dòng)等，以支持免疫功能健康。

**五、總結(jié)**

免疫介導(dǎo)涉及復(fù)雜的生物學(xué)機(jī)制，其病理過程與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。通過深入理解免疫細(xì)胞的相互作用、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)以及免疫耐受與免疫激活的調(diào)控機(jī)制，可以為開發(fā)新的診斷方法和治療策略提供理論基礎(chǔ)。當(dāng)前的治療策略主要包括抑制過度免疫反應(yīng)（如使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、生物制劑）和調(diào)節(jié)免疫平衡（如使用免疫調(diào)節(jié)劑）。實(shí)驗(yàn)研究，包括體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（如細(xì)胞培養(yǎng)、流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、WesternBlot）和體內(nèi)動(dòng)物模型（如基因敲除小鼠、自身免疫模型），是探索免疫介導(dǎo)機(jī)制和評(píng)估干預(yù)措施效果的關(guān)鍵工具。未來，隨著精準(zhǔn)醫(yī)療的發(fā)展，基于個(gè)體免疫特征的分子分型和靶向治療將成為趨勢(shì)。此外，通過免疫監(jiān)測(cè)和健康管理，有望實(shí)現(xiàn)免疫介導(dǎo)疾病的早期預(yù)測(cè)、有效干預(yù)和長(zhǎng)期管理。持續(xù)的研究投入將推動(dòng)我們對(duì)免疫系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)不斷深入，為人類健康帶來更多福祉。

一、免疫介導(dǎo)概述

免疫介導(dǎo)是指機(jī)體免疫系統(tǒng)在應(yīng)對(duì)外來抗原或自身成分時(shí)產(chǎn)生的異常反應(yīng)，可能導(dǎo)致組織損傷或疾病。這一過程涉及多種細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞和信號(hào)通路，其異?？赡芤l(fā)自身免疫性疾病、過敏反應(yīng)等。

（一）免疫介導(dǎo)的基本原理

1.免疫系統(tǒng)的雙重作用：正常情況下，免疫系統(tǒng)保護(hù)機(jī)體免受病原體侵害；異常時(shí)，自身免疫反應(yīng)可能攻擊健康組織。

2.關(guān)鍵分子機(jī)制：包括T細(xì)胞/B細(xì)胞的活化、細(xì)胞因子的釋放（如TNF-α、IL-6）、抗體介導(dǎo)的損傷等。

3.信號(hào)通路：如NF-κB、MAPK等在免疫應(yīng)答中發(fā)揮核心調(diào)控作用。

（二）免疫介導(dǎo)的常見類型

1.自身免疫性疾?。喝珙愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE），由免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤識(shí)別自身抗原引發(fā)。

2.過敏反應(yīng)：如哮喘、過敏性鼻炎，由IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化導(dǎo)致。

3.免疫缺陷?。喝缭l(fā)性免疫缺陷，機(jī)體防御能力下降易感染。

二、免疫介導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制

免疫介導(dǎo)的病理過程可通過多種途徑調(diào)控，以維持免疫平衡。

（一）免疫抑制策略

1.藥物干預(yù)：

(1)糖皮質(zhì)激素：如潑尼松，通過抑制炎癥細(xì)胞遷移和細(xì)胞因子合成減輕免疫反應(yīng)。

(2)免疫抑制劑：如甲氨蝶呤（MTX），主要抑制T細(xì)胞增殖，用于RA治療。

(3)生物制劑：如TNF-α抑制劑（阿達(dá)木單抗），阻斷細(xì)胞因子信號(hào)通路。

2.非藥物方法：

(1)免疫重建：如骨髓移植，重建正常免疫功能。

(2)免疫教育：通過健康教育提升個(gè)體對(duì)免疫調(diào)節(jié)的認(rèn)知。

（二）免疫調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用

1.腫瘤壞死因子（TNF）：既是致病因子，也可作為治療靶點(diǎn)（如依那西普）。

2.白介素（IL）：如IL-10，具有抗炎作用，可作為潛在治療藥物。

三、免疫介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究方法

體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是研究免疫介導(dǎo)機(jī)制的重要手段。

（一）體外實(shí)驗(yàn)技術(shù)

1.細(xì)胞培養(yǎng)：分離T細(xì)胞、B細(xì)胞等，觀察其活化及細(xì)胞因子分泌。

2.流式細(xì)胞術(shù)：定量分析免疫細(xì)胞亞群（如CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞）。

3.ELISA檢測(cè)：定量測(cè)定血清中細(xì)胞因子水平（如IL-6，正常范圍0.5–5.0pg/mL）。

（二）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

1.基因敲除小鼠：構(gòu)建特定免疫分子缺陷模型（如TNF-α敲除鼠）。

2.誘導(dǎo)性自身免疫模型：如通過注射自身抗原（如髓鞘堿性蛋白）誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）。

3.人類隊(duì)列研究：收集疾病樣本（如RA患者滑膜液），分析免疫標(biāo)志物。

四、免疫介導(dǎo)的潛在應(yīng)用

免疫介導(dǎo)研究可推動(dòng)疾病診療進(jìn)展。

（一）精準(zhǔn)醫(yī)療方向

1.分子分型：根據(jù)免疫表型（如HLA分型）指導(dǎo)個(gè)性化治療方案。

2.基因編輯技術(shù)：如CRISPR修飾T細(xì)胞，提高CAR-T治療腫瘤的特異性。

（二）預(yù)防與健康管理

1.免疫疫苗：如流感疫苗，通過誘導(dǎo)免疫記憶降低感染風(fēng)險(xiǎn)。

2.疾病監(jiān)測(cè)：定期檢測(cè)免疫指標(biāo)（如C反應(yīng)蛋白，正常值<5mg/L）預(yù)警異常。

五、總結(jié)

免疫介導(dǎo)涉及復(fù)雜的生物學(xué)機(jī)制，其調(diào)控與疾病關(guān)聯(lián)密切。通過藥物、實(shí)驗(yàn)技術(shù)及精準(zhǔn)手段，可優(yōu)化免疫紊亂的治療策略，推動(dòng)醫(yī)學(xué)發(fā)展。未來需進(jìn)一步探索免疫穩(wěn)態(tài)的維持機(jī)制，以應(yīng)對(duì)各類免疫相關(guān)疾病。

**一、免疫介導(dǎo)概述**

免疫介導(dǎo)是指機(jī)體免疫系統(tǒng)在應(yīng)對(duì)外來抗原或自身成分時(shí)產(chǎn)生的異常反應(yīng)，可能導(dǎo)致組織損傷或疾病。這一過程涉及多種細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞和信號(hào)通路，其異?？赡芤l(fā)自身免疫性疾病、過敏反應(yīng)等。正常情況下，免疫系統(tǒng)通過精確的識(shí)別和反應(yīng)保護(hù)機(jī)體免受病原體侵害，并通過免疫耐受機(jī)制避免攻擊自身組織。然而，當(dāng)這些調(diào)控機(jī)制失調(diào)時(shí)，免疫應(yīng)答可能過度、持續(xù)或針對(duì)錯(cuò)誤目標(biāo)，從而引發(fā)病理變化。理解免疫介導(dǎo)的機(jī)制對(duì)于診斷、治療和預(yù)防相關(guān)疾病至關(guān)重要。

（一）免疫介導(dǎo)的基本原理

1.免疫系統(tǒng)的雙重作用：免疫系統(tǒng)具有保護(hù)性和潛在致病性雙重特性。

***保護(hù)性作用**：識(shí)別并清除病原體（如細(xì)菌、病毒）、腫瘤細(xì)胞等異物。這涉及免疫細(xì)胞的識(shí)別（如T細(xì)胞受體識(shí)別抗原肽-MHC復(fù)合物）、活化（如通過BCR、TCR信號(hào)及共刺激分子）、增殖和效應(yīng)功能（如細(xì)胞毒性T細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞、巨噬細(xì)胞吞噬降解病原體）。

***致病性作用**：在異常情況下，免疫系統(tǒng)可能無法區(qū)分“自我”與“非我”，或?qū)o害抗原（如環(huán)境中的某些分子）產(chǎn)生過度反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷。例如，在自身免疫病中，自身反應(yīng)性T細(xì)胞或B細(xì)胞攻擊自身組織抗原（如類風(fēng)濕因子攻擊關(guān)節(jié)滑膜）。

2.關(guān)鍵分子機(jī)制：免疫介導(dǎo)過程涉及多種分子的精確調(diào)控。

***抗原呈遞**：抗原呈遞細(xì)胞（APC，如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）攝取、處理并呈遞抗原肽至MHC分子（MHC-I呈遞給CD8+T細(xì)胞，MHC-II呈遞給CD4+T細(xì)胞），是啟動(dòng)T細(xì)胞應(yīng)答的第一步。

***細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)**：細(xì)胞因子是免疫反應(yīng)中的關(guān)鍵信號(hào)分子，由不同免疫細(xì)胞產(chǎn)生，可促進(jìn)或抑制免疫應(yīng)答。例如：

***促炎細(xì)胞因子**：如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6），在感染或組織損傷早期促進(jìn)炎癥反應(yīng)和免疫細(xì)胞募集。

***抗炎/免疫抑制細(xì)胞因子**：如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β），在炎癥后期抑制免疫反應(yīng)，防止過度損傷。

***免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子**：如白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-13（IL-13），主要參與過敏反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)。

***免疫細(xì)胞相互作用**：免疫細(xì)胞間的直接接觸和旁分泌信號(hào)（如細(xì)胞因子）協(xié)同調(diào)控免疫應(yīng)答。例如，CD4+T輔助細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子（如IL-2、IL-4）來影響B(tài)細(xì)胞分化、細(xì)胞毒性T細(xì)胞活化和其他T細(xì)胞的增殖。

3.信號(hào)通路：多種信號(hào)通路在免疫細(xì)胞的活化、增殖、分化和凋亡中發(fā)揮核心作用。

***鈣信號(hào)通路**：細(xì)胞活化時(shí)鈣離子內(nèi)流，激活下游蛋白激酶（如鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶），調(diào)控基因表達(dá)。

***MAPK通路**：如p38MAPK、JNK、ERK，參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和分化。

***NF-κB通路**：調(diào)控多種促炎細(xì)胞因子和粘附分子的基因表達(dá)，在炎癥反應(yīng)中核心作用。

***JAK/STAT通路**：主要由細(xì)胞因子受體激活，下游STAT蛋白入核調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，影響細(xì)胞功能。

（二）免疫介導(dǎo)的常見類型

1.自身免疫性疾?。簷C(jī)體免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤識(shí)別自身抗原并發(fā)起攻擊，導(dǎo)致慢性炎癥和組織損傷。

***類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）**：以滑膜增生、軟骨和骨侵蝕為特征。免疫介導(dǎo)機(jī)制包括：T細(xì)胞（特別是Th17細(xì)胞）和巨噬細(xì)胞的活化導(dǎo)致滑膜炎癥；B細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)自身抗原（如瓜氨酸化蛋白）的抗體，形成免疫復(fù)合物沉積；細(xì)胞因子（TNF-α、IL-6）網(wǎng)絡(luò)失調(diào)加劇炎癥。

***系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）**：表現(xiàn)為多系統(tǒng)受累，包括皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟等。關(guān)鍵機(jī)制包括：產(chǎn)生多種自身抗體（抗雙鏈DNA抗體、抗核抗體），可攻擊細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)成分或形成免疫復(fù)合物沉積于血管；B細(xì)胞超活化；T細(xì)胞功能紊亂（如輔助性T細(xì)胞失衡）。

***1型糖尿?。═1D）**：胰島β細(xì)胞被自身免疫性T細(xì)胞（特別是CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞）特異性攻擊和破壞，導(dǎo)致胰島素分泌不足。主要靶抗原包括谷氨酸脫羧酶（GAD65）、胰島素自身抗原（IAA）等。

2.過敏反應(yīng)：機(jī)體對(duì)通常無害的物質(zhì)（過敏原）產(chǎn)生過度免疫反應(yīng)，主要涉及IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化。

***過敏性哮喘**：吸入過敏原后，Th2型輔助性T細(xì)胞（Th2細(xì)胞）被激活并大量分泌IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子。IL-4促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生特異性IgE抗體；IL-5促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞募集；IL-13引起支氣管平滑肌收縮和粘液高分泌。IgE與肥大細(xì)胞表面的高親和力受體（FcεRI）結(jié)合，當(dāng)再次接觸過敏原時(shí)觸發(fā)肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺、白三烯等介質(zhì)，導(dǎo)致呼吸道癥狀。

***過敏性鼻炎**：類似哮喘機(jī)制，但主要影響鼻腔黏膜。接觸過敏原后，Th2細(xì)胞活化，IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒，以及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)導(dǎo)致鼻塞、流涕、打噴嚏等癥狀。

***食物過敏**：口服或接觸食物過敏原后，在腸道等部位引發(fā)免疫反應(yīng)。機(jī)制可包括腸道屏障功能受損導(dǎo)致的過敏原滲透增加（“泄漏理論”），以及Th2細(xì)胞介導(dǎo)的IgE產(chǎn)生和肥大細(xì)胞活化。

3.免疫缺陷?。簷C(jī)體免疫系統(tǒng)部分或完全功能缺陷，導(dǎo)致對(duì)感染（尤其是機(jī)會(huì)性感染）的抵抗力下降或自身穩(wěn)定機(jī)制失常。

***原發(fā)性免疫缺陷?。≒ID）**：由基因突變導(dǎo)致特定免疫細(xì)胞或分子功能缺失。例如：

***選擇性IgA缺乏癥**：B細(xì)胞產(chǎn)生IgA的能力缺陷，易患呼吸道和消化道感染。

***普通變異型免疫缺陷?。–VID）**：T細(xì)胞和B細(xì)胞功能均存在不同程度的缺陷，表現(xiàn)為反復(fù)感染、自身免疫病或腫瘤風(fēng)險(xiǎn)增加。

***嚴(yán)重CombinedImmunodeficiency(SCID)**：如“氣泡男孩”癥，T細(xì)胞發(fā)育嚴(yán)重缺陷，幾乎無法產(chǎn)生功能性T細(xì)胞，暴露于環(huán)境中正常個(gè)體可耐受的微生物后即可致命。

***獲得性免疫缺陷**：如艾滋?。ˋIDS），由人類免疫缺陷病毒（HIV）感染導(dǎo)致。HIV主要攻擊CD4+T輔助細(xì)胞，隨著病毒復(fù)制和CD4+細(xì)胞大量死亡，免疫系統(tǒng)功能逐漸衰竭，患者易發(fā)生機(jī)會(huì)性感染和腫瘤。

**二、免疫介導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制**

免疫介導(dǎo)的病理過程可通過多種途徑調(diào)控，以維持免疫平衡。免疫系統(tǒng)的負(fù)反饋機(jī)制和免疫檢查點(diǎn)對(duì)于防止過度反應(yīng)和自身攻擊至關(guān)重要。這些調(diào)控機(jī)制失常時(shí)，則可能導(dǎo)致持續(xù)炎癥或免疫失調(diào)。

（一）免疫抑制策略

針對(duì)免疫介導(dǎo)疾病的治療通常需要抑制異常的免疫反應(yīng)，同時(shí)盡量保留對(duì)病原體的正常防御能力。治療策略的選擇取決于疾病的類型、嚴(yán)重程度和患者個(gè)體情況。

1.藥物干預(yù)：

(1)糖皮質(zhì)激素：如潑尼松、地塞米松。作用機(jī)制廣泛，包括：

*抑制免疫細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）向炎癥部位遷移。

*抑制細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、IL-6）的產(chǎn)生和釋放。

*抑制花生四烯酸代謝（阻斷前列腺素和白三烯的合成）。

*抑制B細(xì)胞增殖和抗體產(chǎn)生。

*主要用于急性期控制嚴(yán)重炎癥，長(zhǎng)期使用有顯著副作用。

(2)免疫抑制劑：主要用于控制慢性自身免疫性疾病或預(yù)防器官移植排斥。

***傳統(tǒng)免疫抑制劑**：

***甲氨蝶呤（MTX）**：通過抑制二氫葉酸還原酶，干擾DNA和RNA合成，主要抑制T細(xì)胞增殖，對(duì)B細(xì)胞影響較小。常用于RA治療。

***來氟米特（LEF）**：通過抑制嘧啶合成，抑制淋巴細(xì)胞增殖，并具有抗炎作用。

***硫唑嘌呤（AZA）**：抑制嘌呤合成，抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞增殖。

***環(huán)孢素A（CsA）**：抑制鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶，阻斷T細(xì)胞活化信號(hào)傳導(dǎo)。

***霉酚酸酯（MMF，如驍悉）**：抑制次黃嘌呤核苷單磷酸脫氫酶（IMPDH），抑制淋巴細(xì)胞增殖。

***生物制劑**：

***TNF-α抑制劑**（依那西普、阿達(dá)木單抗、英夫利西單抗等）：阻斷TNF-α與受體結(jié)合，抑制下游炎癥信號(hào)，用于治療RA、AS、銀屑病、克羅恩病等。

***IL-6受體抑制劑**（托珠單抗）：阻斷IL-6與其受體結(jié)合，用于治療RA、RS3PE等。

***T細(xì)胞共刺激調(diào)節(jié)劑**（阿巴西普、依帕珠單抗）：阻斷CTLA-4與CD80/CD86結(jié)合，抑制T細(xì)胞活化，用于治療RA、PsA等。

***B細(xì)胞清除劑**（利妥昔單抗）：針對(duì)CD20陽性B細(xì)胞，通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性（CDC）清除B細(xì)胞，用于治療CD20陽性的B細(xì)胞淋巴瘤、某些自身免疫?。ㄈ缋钳?、類風(fēng)濕）。

(3)小分子靶向藥物：如JAK抑制劑（托法替布、巴瑞替尼），直接抑制JAK信號(hào)通路，減少多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生，用于治療RA、JIA、特應(yīng)性皮炎等，相比傳統(tǒng)免疫抑制劑可能具有更好的安全性profiles。

2.非藥物方法：

(1)免疫重建：在某些情況下，可以通過移植方式重建正常的免疫功能。

***骨髓移植/造血干細(xì)胞移植**：主要用于治療某些類型的原發(fā)性免疫缺陷病或復(fù)發(fā)性嚴(yán)重感染。通過移植健康的造血干細(xì)胞，重建包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的整個(gè)造血系統(tǒng)。

***胸腺移植**：對(duì)于先天性胸腺發(fā)育不全（DiGeorge綜合征）患者，移植胸腺可能幫助重建T細(xì)胞免疫功能。

(2)免疫教育與管理：通過健康教育提升個(gè)體對(duì)自身疾病的認(rèn)知，教授自我管理技巧，如：

*識(shí)別疾病發(fā)作前兆。

*規(guī)律用藥，監(jiān)測(cè)副作用。

*避免已知的誘發(fā)因素（如某些食物、藥物、感染）。

*保持健康生活方式（均衡飲食、適度運(yùn)動(dòng)、充足睡眠）。

*定期復(fù)診，及時(shí)調(diào)整治療方案。

（二）免疫調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用

除了抑制免疫反應(yīng)，還可以利用免疫調(diào)節(jié)劑來“教育”或“平衡”免疫系統(tǒng)，使其恢復(fù)對(duì)自身抗原的耐受或?qū)^敏原的適當(dāng)反應(yīng)。

1.腫瘤壞死因子（TNF）：TNF既是重要的致病因子，也被開發(fā)為治療藥物，體現(xiàn)了其雙面性。

***致病作用**：在自身免疫性疾病中，TNF-α由活化的巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等產(chǎn)生，促進(jìn)炎癥反應(yīng)、血管生成和組織損傷。例如，在RA中，TNF-α誘導(dǎo)滑膜成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)關(guān)節(jié)破壞。

***治療應(yīng)用**：TNF-α抑制劑通過阻斷TNF-α的作用，顯著減輕多種自身免疫性疾?。ㄈ鏡A、AS、Psoriasis、克羅恩病、銀屑?。┑陌Y狀和病理改變。依那西普（完全人源IgG1單抗）、阿達(dá)木單抗（人源化IgG1單抗）、英夫利西單抗（嵌合IgG1單抗）是常用藥物。

2.白介素（IL）：IL家族包含多種細(xì)胞因子，其中一些具有免疫調(diào)節(jié)作用，可作為治療靶點(diǎn)。

***IL-10**：主要由活化巨噬細(xì)胞、Treg細(xì)胞等產(chǎn)生，具有顯著的抗炎和免疫抑制功能。IL-10可以抑制其他促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，促進(jìn)免疫耐受。目前已有IL-10類似物（如美洛西普）用于治療某些自身免疫病和炎癥性疾病，但效果和安全性仍在評(píng)估中。IL-10也參與調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡。

***IL-4**：主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，是促進(jìn)B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞并產(chǎn)生IgE的關(guān)鍵細(xì)胞因子，在過敏反應(yīng)和寄生蟲感染中發(fā)揮作用。針對(duì)IL-4或其受體的抑制劑（如抗IL-4R抗體）正在研究開發(fā)中，旨在抑制Th2型免疫應(yīng)答，治療過敏性疾病。

***IL-37**：是一種新型抗炎細(xì)胞因子，可以抑制IL-1β、IL-18的產(chǎn)生，并抑制NF-κB通路。IL-37在多種炎癥性疾病模型中顯示出免疫調(diào)節(jié)潛力，相關(guān)藥物研究正在進(jìn)行中。

**三、免疫介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究方法**

體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是研究免疫介導(dǎo)機(jī)制、評(píng)估藥物療效和探索疾病發(fā)生發(fā)展過程的重要手段。這些方法有助于從分子、細(xì)胞和整體水平深入理解免疫反應(yīng)。

（一）體外實(shí)驗(yàn)技術(shù)

體外實(shí)驗(yàn)在可控環(huán)境下研究免疫細(xì)胞的生物學(xué)行為和相互作用。

1.細(xì)胞培養(yǎng)：這是最基礎(chǔ)的技術(shù)，用于分離、純化和維持免疫細(xì)胞。

***分離方法**：

***密度梯度離心**：利用細(xì)胞在特定介質(zhì)（如Ficoll-Paque）中的浮力差異進(jìn)行分離，如分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）。

***磁珠分選（MACS）**：利用針對(duì)特定細(xì)胞表面標(biāo)記（如CD4、CD8、CD19）的磁珠，在磁場(chǎng)輔助下特異性富集目標(biāo)細(xì)胞。

***流式細(xì)胞術(shù)分選（FACS）**：結(jié)合熒光標(biāo)記抗體識(shí)別細(xì)胞表面標(biāo)記，并利用激光和電子檢測(cè)系統(tǒng)按細(xì)胞類型進(jìn)行物理性分離。

***培養(yǎng)體系**：

***單細(xì)胞培養(yǎng)**：將純化的單個(gè)免疫細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿或微孔板中，研究其增殖、分化和細(xì)胞因子分泌。

***共培養(yǎng)**：將不同類型的免疫細(xì)胞（如APC與T細(xì)胞）共同培養(yǎng)，研究細(xì)胞間的直接相互作用和信號(hào)傳遞。

***條件培養(yǎng)液**：收集某種細(xì)胞（如T細(xì)胞）分泌的細(xì)胞因子，用于刺激其他細(xì)胞（如B細(xì)胞），研究細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)。

***應(yīng)用**：檢測(cè)特定刺激（如LPS、抗原）對(duì)免疫細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生、細(xì)胞凋亡的影響；研究細(xì)胞因子間的協(xié)同或拮抗作用；篩選具有免疫調(diào)節(jié)功能的化合物。

2.流式細(xì)胞術(shù)（FCM）：一種高通量、多參數(shù)的細(xì)胞分析技術(shù)，可同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記、細(xì)胞內(nèi)分子（經(jīng)染色后）和細(xì)胞物理特性（如凋亡）。

***原理**：利用激光照射細(xì)胞，激發(fā)熒光染料，通過熒光探測(cè)器檢測(cè)不同顏色的熒光信號(hào)，結(jié)合細(xì)胞散射信號(hào)（前向散射FSC，側(cè)向散射SSC）進(jìn)行細(xì)胞識(shí)別和定量分析。

***標(biāo)記物**：使用熒光素（如FITC、PE、AlexaFluor）或同型對(duì)照抗體標(biāo)記細(xì)胞表面分子（如CD3,CD4,CD8,CD19,CD25）；使用透膜染料（如PI,7-AAD）或核酸染料（如DAPI,Hoechst）評(píng)估細(xì)胞周期或凋亡；使用細(xì)胞內(nèi)染色劑（如磷酸化抗體、細(xì)胞因子）評(píng)估細(xì)胞活化狀態(tài)或內(nèi)含物。

***數(shù)據(jù)分析**：通過設(shè)置門控（Gating）區(qū)域，選擇特定細(xì)胞群體（如CD4+T細(xì)胞），分析其亞群比例、平均熒光強(qiáng)度（MFI）等指標(biāo)?？捎糜诙糠治雒庖呒?xì)胞亞群（如Treg細(xì)胞比例）、活化狀態(tài)（如CD69,CD25表達(dá)）、細(xì)胞因子產(chǎn)生（如通過PE/Cy7標(biāo)記的細(xì)胞因子抗體）。

3.ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）：一種廣泛應(yīng)用于檢測(cè)樣本中特定蛋白質(zhì)（主要是細(xì)胞因子、抗體、激素等）濃度的方法。

***原理**：基于抗原抗體特異性結(jié)合原理，結(jié)合酶標(biāo)技術(shù)和顯色底物。通常分為雙抗體夾心法（檢測(cè)多抗性抗原）、間接法（檢測(cè)抗體）和競(jìng)爭(zhēng)法等。

***步驟**：

1.包被：將捕獲抗體固定在微孔板表面。

2.加樣：加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，與捕獲抗體結(jié)合。

3.結(jié)合：加入檢測(cè)抗體（酶標(biāo)二抗或生物素標(biāo)記抗體），形成“捕獲抗體-待測(cè)物-檢測(cè)抗體”三元復(fù)合物。

4.顯色：加入酶的底物（如TMB），酶催化底物變色。

5.讀板：用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中待測(cè)物濃度。

***應(yīng)用**：定量檢測(cè)血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織提取物中的細(xì)胞因子（如TNF-α,IL-6,IL-10濃度），檢測(cè)抗體水平（如IgG,IgE）。

4.細(xì)胞增殖試驗(yàn)：檢測(cè)免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞、B細(xì)胞）在特定刺激下的增殖活性。

***方法**：

***MTT法**：細(xì)胞在培養(yǎng)過程中產(chǎn)生代謝活性的黃原酸酯，與MTT試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色甲臜晶體，溶于DMSO后用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度。細(xì)胞增殖越活躍，甲臜晶體越多，吸光度越高。

***CCK-8法**：類似MTT，但使用更水溶性的WST-8試劑，操作更簡(jiǎn)便，毒性更低。

***[3H]-胸腺嘧啶摻入法**：將放射性同位素標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷加入細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞增殖時(shí)DNA合成會(huì)將其摻入，通過測(cè)定放射性計(jì)數(shù)來反映增殖水平。此方法靈敏度高，但涉及放射性廢料處理。

***應(yīng)用**：評(píng)估抗原、細(xì)胞因子、藥物對(duì)免疫細(xì)胞增殖的影響；檢測(cè)T細(xì)胞增殖反應(yīng)（如混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)MLR）。

5.WesternBlot：用于檢測(cè)細(xì)胞或組織中特定蛋白質(zhì)的條帶，并可半定量分析其表達(dá)水平。

***步驟**：

1.蛋白質(zhì)提取與變性：細(xì)胞裂解液提取總蛋白，加入SDS樣品緩沖液，煮沸使蛋白質(zhì)變性并加入紅色染料（如溴酚藍(lán)）進(jìn)行電泳時(shí)指示位置。

2.SDS電泳：在聚丙烯酰胺凝膠中，利用SDS使蛋白質(zhì)變性并帶負(fù)電荷，按分子量大小進(jìn)行分離。

3.轉(zhuǎn)膜：將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF或NC膜上。

4.封閉：用封閉液（如BSA、脫脂奶粉）封閉膜上非特異性位點(diǎn)。

5.一抗孵育：用特異性針對(duì)目標(biāo)蛋白的單克隆或多克隆抗體孵育。

6.二抗孵育：用標(biāo)記有酶（如HRP）或熒光基團(tuán)的二抗孵育，與結(jié)合在一抗上的蛋白結(jié)合。

7.顯色/檢測(cè)：加入酶底物（如TMB）進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯色，或使用化學(xué)發(fā)光/熒光成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)。

8.分析：通過凝膠成像系統(tǒng)分析目標(biāo)蛋白的條帶位置和相對(duì)強(qiáng)度。

***應(yīng)用**：檢測(cè)細(xì)胞因子、免疫相關(guān)蛋白（如信號(hào)通路蛋白、細(xì)胞因子受體）的表達(dá)水平變化；驗(yàn)證其他技術(shù)的結(jié)果。

（二）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)在更接近生理環(huán)境的動(dòng)物模型中研究免疫介導(dǎo)疾病的發(fā)生機(jī)制和藥物干預(yù)效果。

1.基因敲除/敲入小鼠：通過基因工程技術(shù)構(gòu)建缺乏特定基因（敲除）或引入新基因/改造現(xiàn)有基因（敲入）的小鼠，模擬人類疾病或研究特定基因的功能。

***構(gòu)建方式**：主要采用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）打靶技術(shù)或CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)。

***應(yīng)用**：

***基因敲除小鼠**：用于研究特定基因（如TNF-α,IL-10,HLA基因）在免疫系統(tǒng)功能或疾病發(fā)生中的作用。例如，TNF-α敲除小鼠對(duì)多種炎癥性疾?。ㄈ缙咸涯ぱ?、膠原?。┚哂械挚沽?。

***條件性基因敲除小鼠**：通過使用Cre-LoxP系統(tǒng)，在特定組織或特定發(fā)育階段特異性地敲除基因，更精確地研究基因功能。

***轉(zhuǎn)基因小鼠**：將人類基因（如自身抗原）導(dǎo)入小鼠基因組，用于研究自身免疫病機(jī)制或構(gòu)建過敏模型。

2.誘導(dǎo)性自身免疫模型：人為誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生特定的自身免疫反應(yīng)，模擬人類自身免疫病的部分特征。

***實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）**：主要用于研究多發(fā)性硬化癥（MS）的機(jī)制。通常在小鼠（常用C57BL/6,SJL等品系）體內(nèi)注射髓鞘堿性蛋白（MBP）、髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白（MOG）或我的elin蛋白等自身抗原，并聯(lián)合佐劑（如完全弗氏佐劑CFA或不完全弗氏佐劑IFA）和致炎劑（如Pertussistoxin）激發(fā)免疫反應(yīng)。通過觀察動(dòng)物的行為變化（如尾巴麻痹、后肢無力、體重下降）評(píng)估疾病嚴(yán)重程度。

***膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）**：主要用于研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的機(jī)制。在小鼠（常用DBA/1品系）關(guān)節(jié)內(nèi)或體內(nèi)注射牛型膠原蛋白（CII），誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)CII的自身抗體和細(xì)胞免疫，導(dǎo)致關(guān)節(jié)腫脹、侵蝕和功能障礙。

3.過敏動(dòng)物模型：用于研究過敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制和測(cè)試抗過敏藥物。

***被動(dòng)致敏模型**：通過腹腔注射或皮膚注射結(jié)合了過敏原和佐劑（如氫氧化鋁）的溶液，使動(dòng)物產(chǎn)生對(duì)該過敏原的特異性IgE抗體。隨后通過吸入或經(jīng)皮接觸過敏原，可誘發(fā)類似哮喘或過敏性鼻炎的癥狀。

***主動(dòng)致敏模型**：先注射過敏原和佐劑誘導(dǎo)IgE產(chǎn)生，一段時(shí)間后再次接觸過敏原，引發(fā)更強(qiáng)烈的過敏反應(yīng)。此模型更接近自然過敏發(fā)生過程。

***應(yīng)用**：評(píng)價(jià)抗過敏藥物（如抗Ig