備案號(hào):40366-2014DB11北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4微生物學(xué)等級(jí)分類 5檢測(cè)項(xiàng)目 6檢測(cè)程序 7檢測(cè)要求 8檢測(cè)方法 9結(jié)果判定 DB11/T1053的本部分按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。DB11/T1053《實(shí)驗(yàn)用魚》分為六個(gè)部分：——第1部分：微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)；——第2部分：寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)；——第3部分：遺傳質(zhì)量控制；——第4部分：病理學(xué)診斷規(guī)范；——第5部分：配合飼料技術(shù)要求；——第6部分：環(huán)境條件。本部分由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)提出。本部分由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)歸口。本部分由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)組織實(shí)施。本部分起草單位：國家人口計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所、中國科學(xué)院水生生物研究所、中國食品藥品檢定研究院。本部分主要起草人：李愛華、崔宗斌、孫德明、岳秉飛、王天奇。實(shí)驗(yàn)用魚第1部分：微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)DB11/T1053的本部分規(guī)定了實(shí)驗(yàn)用魚（斑馬魚和劍尾魚）微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)，包括普通級(jí)(CV)和無特定病原體級(jí)(SPF)實(shí)驗(yàn)用魚的微生物等級(jí)分類、檢測(cè)要求、檢測(cè)程序、檢測(cè)方案、檢測(cè)方法、結(jié)果判定和報(bào)告等。本部分適于實(shí)驗(yàn)用魚（斑馬魚和劍尾魚）的微生物學(xué)等級(jí)劃分和質(zhì)量監(jiān)測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T4789.7食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)GB4789.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)GB/T14926.15實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺炎鏈球菌檢測(cè)方法GB/T14926.16實(shí)驗(yàn)動(dòng)物乙型溶血性鏈球菌檢測(cè)方法GB/T18652致病性嗜水氣單胞菌檢驗(yàn)方法SC/T7201.2魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程第2部分：柱狀嗜纖維菌爛鰓病診斷方法SC/T7201.3魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程第3部分：嗜水氣單胞菌及豚鼠氣單胞菌腸炎病診斷方法SC/T7201.4魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程第4部分：熒光假單胞菌赤皮病診斷方法SN/T1869食品中多種致病細(xì)菌快速檢測(cè)方法PCR法SN/T2439魚鰓霉病檢疫技術(shù)規(guī)范《斑馬魚疾病健康手冊(cè)》2012年4月24日國際斑馬魚資源中心(ZIRCHealthServicesZebrafishDiseaseManual,M.L.Kent,J.M.Spitsbergen,J.M.Matthews,J.W.Fournie,K.N.MurM.Westerfield)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。經(jīng)人工飼養(yǎng)、繁育，對(duì)其攜帶的病原微生物及寄生蟲實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)、檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的魚類。4微生物學(xué)等級(jí)分類2不攜帶所規(guī)定的魚的烈性傳染病病原和與人共患病的病原。4.2無特定病原體級(jí)實(shí)驗(yàn)用魚specificpathogenfree(SPF)laboratoryfish除了普通級(jí)應(yīng)排除的病原體外，不攜帶所規(guī)定的對(duì)實(shí)驗(yàn)用魚危害大、重要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原體。5檢測(cè)項(xiàng)目5.1外觀檢查外觀健康、無異常。5.2微生物學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目普通級(jí)(CV)和無特定病原體級(jí)(SPF)實(shí)驗(yàn)用魚病原微生物檢測(cè)項(xiàng)目見表1。表1CV和SPF實(shí)驗(yàn)用魚病原微生物檢測(cè)項(xiàng)目無特定病原體級(jí)●●●●●●○柱狀黃桿菌Flavobacteriumcolumare嗜冷黃桿菌Flavobacteriumpsychrophilum●●●●●●○○○○○6檢測(cè)程序檢測(cè)程序見圖1。抽樣編號(hào)外觀檢查麻醉體表微生物學(xué)檢查和取材剖檢及體內(nèi)微生物學(xué)檢查和取材解剖鏡和顯微鏡檢查微生物學(xué)分離培養(yǎng)鑒定-----必要時(shí)取水樣檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)報(bào)告圖1微生物學(xué)檢測(cè)程序7檢測(cè)要求7.1檢測(cè)頻率每3個(gè)月至少檢測(cè)1次。7.2樣品要求7.2.1樣品應(yīng)為3月齡以上成魚，必要時(shí)同時(shí)取飼養(yǎng)環(huán)境水樣作為樣品。7.2.2應(yīng)在不同的水環(huán)境內(nèi)隨機(jī)抽樣。7.2.3抽樣采集樣品數(shù)量，見表2。表2抽樣采集樣品數(shù)量7.2.4采集的樣品應(yīng)新鮮，避免冰凍，避免人為污染和采樣誤差。每一樣品要附有編號(hào)和標(biāo)志并附送檢單，寫明樣品的來源、品種品系、級(jí)別、數(shù)量、檢測(cè)項(xiàng)目和采樣時(shí)間。7.2.5樣品采集：按照細(xì)菌、真菌的取樣要求，與寄生蟲學(xué)、病理學(xué)或遺傳學(xué)等檢測(cè)聯(lián)合取樣。47.2.6取樣順序：先做細(xì)菌、真菌接種，然后取樣用于PCR檢測(cè)，最后進(jìn)行固定，用于組織學(xué)檢查。7.3檢測(cè)內(nèi)容7.3.1外觀檢查：檢查體表、鰓部和天然孔。7.3.2剖檢檢查：檢查胸腔、腹腔內(nèi)各器官。7.3.3解剖鏡和顯微鏡檢查：通過外部、剖檢檢查取樣，利用組織印跡或組織涂片，采用適當(dāng)方法染色后，觀察是否有真菌、細(xì)菌等感染的存在。8檢測(cè)方法8.1細(xì)菌和真菌的檢測(cè)方法細(xì)菌和真菌的檢測(cè)方法見表3。表3細(xì)菌和真菌的檢測(cè)方法抗酸染色（ZIRC抗酸染色（ZIRC8.2分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法4種分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法見表4。表44種分枝桿菌的區(qū)別鑒定方法*硝酸還原解長尿素酶鐵吸收 ±±8.3PCR檢測(cè)方法按照SN/T1869進(jìn)行細(xì)菌DNA提取、PCR擴(kuò)增、電泳和結(jié)果分析。本部分中有關(guān)細(xì)菌的屬或種特異性PCR擴(kuò)增引物見表5。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)的分子克隆和測(cè)序比對(duì)。表5特異性PCR擴(kuò)增引物序列和產(chǎn)物大小Columare6表5特異性PCR擴(kuò)增引物序列和產(chǎn)物大?。ɡm(xù)