ICS65.020.20

CCSB42

34

安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB34/T5095—2025

畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)細(xì)菌耐藥性水平評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationforevaluationofbacterialresistancelevelinlivestockand

poultryfarms

2025-01-24發(fā)布2025-02-24實(shí)施

安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB34/T5095—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。

本文件由安徽省獸藥飼料監(jiān)察所提出。

本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。

本文件起草單位：安徽省獸藥飼料監(jiān)察所、安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心、安徽華澳生物技術(shù)有

限公司、安徽省農(nóng)機(jī)安全監(jiān)理總站、安徽賽如分析檢測(cè)科技有限公司、安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳畜牧獸醫(yī)局。

本文件主要起草人：劉發(fā)全、苗文萍、吳利蘋(píng)、江定豐、陳斌、明文慶、吳昊、許世富、顏秀梅、

程瑩、王麗霞、汪秀娟、王偉。

I

DB34/T5095—2025

畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)細(xì)菌耐藥性水平評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)細(xì)菌耐藥性水平評(píng)價(jià)的樣品采集與保存、菌株分離鑒定與記錄、耐藥性監(jiān)

測(cè)項(xiàng)目與操作、結(jié)果判定與水平評(píng)價(jià)的技術(shù)要求。

本文件適用于安徽省畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)的細(xì)菌耐藥性水平評(píng)價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB4789.1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

NY/T4141動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)祥品采集技術(shù)規(guī)程

NY/T4142動(dòng)物源細(xì)菌抗菌藥物敏感性測(cè)試技術(shù)規(guī)程微量肉湯稀釋法

NY/T4145動(dòng)物源金黃色葡萄球菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程

NY/T4147動(dòng)物源腸球菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程

NY/T4149動(dòng)物源大腸埃希菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程

《動(dòng)物病原微生物菌（毒）種保藏管理辦法》2008年11月26日農(nóng)業(yè)部令第16號(hào)公布，2016年5月

30日農(nóng)業(yè)部令2016年第3號(hào)、2022年1月7日農(nóng)業(yè)農(nóng)村部令2022年第1號(hào)修訂

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

最低抑菌濃度minimuminhibitoryconcentration，MIC

在體外試驗(yàn)中抑制特定微生物生長(zhǎng)所需的最低抗菌藥物濃度，用以判斷測(cè)試菌株對(duì)抗菌藥物的敏

感程度。

折點(diǎn)breakpoint

用于區(qū)分菌株為敏感、中介和耐藥的MIC值。

敏感susceptible

抗菌藥物對(duì)菌株的MIC值等于或低于敏感折點(diǎn),即菌株對(duì)該藥物表現(xiàn)為敏感。

中介intermediate

抗菌藥物對(duì)菌株的MIC值在高于敏感折點(diǎn)且低于耐藥折點(diǎn)的范圍內(nèi),即菌株對(duì)該藥物表現(xiàn)為中介。

耐藥resistant

1

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抗菌藥物對(duì)菌株的MIC值等于或高于耐藥折點(diǎn),即菌株對(duì)該藥物表現(xiàn)為耐藥。

4樣品采集、記錄與保存

樣品采集

樣品應(yīng)從養(yǎng)雞場(chǎng)、養(yǎng)鴨場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、養(yǎng)羊場(chǎng)或奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)采集，根據(jù)養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)模，每個(gè)點(diǎn)采集5～

10份樣本，相同圈舍來(lái)源樣品每種菌收集1株，來(lái)自同一養(yǎng)殖場(chǎng)的指示菌收集不超過(guò)10株，致病

菌收集不超過(guò)5株，采樣按照NY/T4141的規(guī)定操作。

采樣記錄

采樣的同時(shí)做好養(yǎng)殖場(chǎng)用藥情況和飼料來(lái)源調(diào)查，按附錄A的要求填寫(xiě)采樣記錄表，對(duì)同一養(yǎng)殖場(chǎng)

用藥情況不同的動(dòng)物群，分開(kāi)填寫(xiě)采樣記錄表。

樣品保存

樣品采集后分別放置于清潔的容器中，存放溫度為0℃～10℃，應(yīng)在48h內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌分離。

5菌株分離鑒定與記錄

菌株分離鑒定。

5.1.1金黃色葡萄球菌分離與鑒定按NY/T4145的規(guī)定執(zhí)行。

5.1.2腸球菌分離與鑒定按NY/T4147的規(guī)定執(zhí)行。

5.1.3大腸埃希菌分離與鑒定按NY/T4149的規(guī)定執(zhí)行。

菌株分離鑒定結(jié)果記錄

采樣人員記錄養(yǎng)殖場(chǎng)基本信息和樣品來(lái)源信息，按附錄B的要求填寫(xiě)細(xì)菌分離鑒定結(jié)果。

6細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)項(xiàng)目與試驗(yàn)操作

藥物敏感性監(jiān)測(cè)項(xiàng)目

6.1.1監(jiān)測(cè)腸球菌、金黃色葡萄球菌2種革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)紅霉素、克林霉素、恩諾沙星、頭孢噻呋、

磺胺間甲氧嘧啶、鹽酸多西環(huán)素、氟苯尼考、泰妙菌素、替米考星、慶大霉素等10種抗菌藥的耐藥性。

6.1.2監(jiān)測(cè)大腸桿菌革蘭氏陰性菌對(duì)氨芐西林、慶大霉素、大觀霉素、鹽酸多西環(huán)素、氟苯尼考、磺

胺間甲氧嘧啶、頭孢噻呋、恩諾沙星、粘桿菌素等9種抗菌藥的耐藥性。

細(xì)菌耐藥性試驗(yàn)操作

采用微量肉湯稀釋法對(duì)分離菌株進(jìn)行藥物敏感性測(cè)試。具體操作方法和步驟按NY/T4142的規(guī)定

操作。

7細(xì)菌耐藥性結(jié)果判定與水平評(píng)價(jià)

細(xì)菌耐藥性結(jié)果判定

2

DB34/T5095—2025

根據(jù)不同抗菌藥物對(duì)受試菌的MIC值結(jié)果,將菌株判定為敏感、中介或耐藥。不同細(xì)菌的耐藥性判定

參考值見(jiàn)附錄C、附錄D。

細(xì)菌耐藥性水平評(píng)價(jià)

將每一受試菌的菌株編號(hào)、菌種名稱(chēng)、對(duì)各種藥物的MIC結(jié)果以及判定結(jié)果記錄于藥物敏感性試驗(yàn)

結(jié)果記錄表中，見(jiàn)附錄E、附錄F。按照公式（1）、公式（2）、公式（3）分別計(jì)算分離菌株的敏感率、

中介率及耐藥率。

敏感菌株數(shù)

敏感率(%)=()×100%········································(1)

受試菌株總數(shù)

中介菌株數(shù)

中介率(%)=()×100%········································(2)

受試菌株總數(shù)

耐藥菌株數(shù)

耐藥率(%)=()×100%········································(3)

受試菌株總數(shù)

8生物安全

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合GB4789.1的要求。

廢棄物處理應(yīng)按照GB19489的規(guī)定執(zhí)行。

菌株管理按照《動(dòng)物病原微生物菌（毒）種保藏管理辦法》的規(guī)定執(zhí)行。

3

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附錄A

（資料性）

采樣記錄表

采集畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)基本信息和樣品來(lái)源信息等按表A.1的要求填寫(xiě)。

表A.1采樣記錄表

采樣地：養(yǎng)殖場(chǎng)：

采樣時(shí)間：聯(lián)系人姓名、電話：

樣品來(lái)源

□豬日齡____□消化道□呼吸道□泌尿生殖道

□雞日齡____□肝膽□腦□淋巴結(jié)

□牛日齡____□關(guān)節(jié)□奶樣□皮膚

其他________日齡____□糞便其他______________

采樣動(dòng)物健康狀況養(yǎng)殖量

□健康□發(fā)病及癥狀：

。

養(yǎng)殖場(chǎng)使用抗菌藥情況：

飼料來(lái)源、添加抗菌藥種類(lèi)治療用抗菌藥種類(lèi)與使用方式

藥物名稱(chēng)

生產(chǎn)廠名稱(chēng)

使用方式

飼料添加的藥物名稱(chēng)

劑量單個(gè)動(dòng)物劑量

劑量

飲水添加劑量

使用時(shí)間

飼料添加劑量

用藥天數(shù)

采樣人（簽名）：

采樣日期：年月日

4

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附錄B

（資料性）

細(xì)菌分離鑒定記錄表

填寫(xiě)菌株編號(hào)信息和菌種分離鑒定結(jié)果等信息按表B.1的要求填寫(xiě)。

表B.1細(xì)菌分離鑒定記錄表

采樣時(shí)間養(yǎng)殖場(chǎng)名稱(chēng)

樣品來(lái)源樣品類(lèi)型

樣品數(shù)量分離人

菌株編號(hào)菌種分離鑒定結(jié)果保存方式

5

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附錄C

（資料性）

革蘭氏陽(yáng)性菌耐藥性判定參考值

表C.1給出了革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)不同藥物的耐藥性判定參考值。

表C.1革蘭氏陽(yáng)性菌耐藥性判定參考值

折點(diǎn)，

編號(hào)藥物名稱(chēng)(μg/mL)

敏感中介耐藥

1紅霉素≤0.51-4≥8

2克林霉素≤0.51-2≥4

3恩諾沙星≤0.51-2≥4

4頭孢噻呋≤24≥8

5磺胺間甲氧嘧啶≤256384≥512

6鹽酸多西環(huán)素≤48≥16

7氟苯尼考≤24≥8

8泰妙菌素≤1616≥32

9替米考星≤816≥32

10慶大霉素≤48≥16

6

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附錄D

（資料性）

革蘭氏陰性菌耐藥性判定參考值

表D.1給出了革蘭氏陰性菌對(duì)不同藥物的耐藥性判定參考值。

表D.1革蘭氏陰性菌耐藥性判定參考值

折點(diǎn)，

編號(hào)藥物名稱(chēng)(μg/mL)

敏感中介耐藥

1氨芐西林≤816≥32

2慶大霉素≤48≥16

3大觀霉素≤3264≥128

4鹽酸多西環(huán)素≤48≥16

5氟苯尼考≤48≥16

6磺胺間甲氧嘧啶≤256384≥512

7頭孢噻呋≤24≥8

8恩諾沙星≤0.250.5-1≥2

9粘桿菌素≤24≥8

7

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附錄E

（資料性）

革蘭氏陽(yáng)性菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果記錄

表E.1給出了藥物敏感性試驗(yàn)中畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)不同抗菌藥MIC值、判定結(jié)果及耐藥性

水平評(píng)價(jià)。

表E.1畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)革蘭氏陽(yáng)性菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果記錄表

養(yǎng)殖場(chǎng)名稱(chēng)檢測(cè)時(shí)間記錄人

磺胺間甲鹽酸多西

紅霉素克林霉素恩諾沙星頭孢噻呋氟苯尼考泰妙菌素替米考星慶大霉素

菌株菌株氧嘧啶環(huán)素

編號(hào)名稱(chēng)MIC值判定MIC值判定MIC值判定MIC值判定MIC值判定MIC值判定MIC值判定MIC值判定MIC值判定MIC值判定

μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果μg/mL結(jié)果

敏感率

中介率

耐藥率

8

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附錄F

（資料性）

革蘭氏陰性菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果記錄

表F.1給出了藥物敏感性試驗(yàn)中畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)革蘭氏陰性菌對(duì)不同抗菌藥MIC值、判定結(jié)果及耐藥性

水平評(píng)價(jià)。

表F.1畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)革蘭氏陰性菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果記錄表

養(yǎng)殖場(chǎng)名稱(chēng)檢測(cè)時(shí)間記錄人

鹽酸多西磺胺間甲

氨芐西林慶大霉素大觀霉素氟苯尼考頭孢噻呋恩諾沙星粘桿菌素

菌株菌株