16牛腸道病毒研究的國內外文獻綜述目錄TOC\o"1-3"\h\u27665牛腸道病毒研究的國內外文獻綜述 1174621.1.1牛腸道病毒的形態(tài)與基因組結構 1127411.1.2病毒基因組 237911.1.3病毒的復制 3121611.1.4病毒的理化性質 4274351.1.5牛腸道病毒的分類和致病機制 4牛腸道病毒的形態(tài)與基因組結構BEV-HN1817病毒在顯微觀察下呈現(xiàn)圓球狀無囊膜膜，直徑為22~30nm?；蚪M是7.5KB的單鏈RNA，由1個開放閱讀框（ORF）5’非翻譯區(qū)（5'UTR）加上3'非翻譯區(qū)（3'UTR）組成。病毒一個ORF可以作為mRNA轉化為前體蛋白[2]。該前體多蛋白可再度分解為三個蛋白P1，P2和P3。前體結合蛋白P和P1分別水解為四個立體結構蛋白粒子（VP1，VP2，VP3和VP4），另外7個非結構蛋白片段粒子組成包括2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D[3-4]。圖11腸道病毒結構圖Fig1-1structureofenterovirus表11腸道病毒屬（引自PicornavirusHome()）Table1-1ThegenusEnterovirusCurrentspeciesnameFormerspeciesnameEnterovirusAHumanenterovirusAEnterovirusBHumanenterovirusBEnterovirusCHumanenterovirusCEnterovirusDHumanenterovirusDEnterovirusEBovineenterovirus（groupA）EnterovirusFBovineenterovirus（groupB）EnterovirusGPorcineenterovirusBEnterovirusHSimianenterovirusEnterovirusI-EnterovirusJUnclassifiedsimianvirusesEnterovirusK-EnterovirusL-RhinovirusAHumanrhinovirusARhinovirusBHumanrhinovirusBRhinovirusCHumanrhinovirusC病毒基因組小RNA基因病毒感染粒子基因中的RNA基因具有感染性,可以被作為感染病毒的主要基因組，病毒的多蛋白前體合成的過程如圖1-2，起始由IRESS位點啟動,基因組上的單一分子ORFS被翻譯后,產生1個分子量(2.4-2.5)×105、包含結構病毒蛋白結構抗原蛋白和非結構病毒蛋白的多蛋白前體[5]。圖12腸道病毒屬多聚蛋白內部分解過程示意圖Fig.1-2Schematicdiagramoftheinternaldecompositionprocessofenteroviruspolyprotein小RNA病毒典型的基因組從5'端到3',端依次為:VPg+5'UTR1B-[1A-1B-1C-1D/2A-2B-2C/3A-3B-3C-3D]3'UTR-poly(A),其中，中括號([])內編碼區(qū)，"/"代表最初的切割?！?’’代表最終的切割，在不同種病毒中,這些基因結構可能存在一定程度的不同，有的病毒在基因組中可能出現(xiàn)某個基因組區(qū)域的多個拷貝或多個不同類型的區(qū)域[6]。病毒的復制RNA復制時。首先以一條病毒正鏈RNA為合成模板,復制出不相互補的兩條負鏈RNA,形成雙鏈RNA,即合成復制型病毒RNA(ReplicativeformRNA,RFRNA),以病毒RFRNA上的一條負鏈RNA為合成模板,復制合成一條具有活性的正鏈RNA,屬于合成于滑面病毒內質網(wǎng)上的一個復制中間體(Replicationintermidiate,RI)上,RI由1條負鏈RNA和具有多條正鏈存在RNA上的拷貝連接組成[7]。新病毒合成時以正鏈RNA拷貝為模版,合成病毒開始所有必需的結合蛋白機構和空間構型;另一種以部分負鏈作為復制模板,合成負鏈RNA,從而產生所需必要的循環(huán)[8]。病毒的理化性質小RNA病毒顆粒具有三個特征Molecularweight=(8~9)×106,沉降系數(shù)140~65S,空衣殼沉降系數(shù)70-80S.同種異體病毒氯化絕中的浮密度為1.33~1.45g/cm，腸道病毒在其他酸性化學條件下保持高病毒穩(wěn)定性在低于PH3或更低的濃度PH下仍有可能完全存活;某此病毒成員在濃度在小于或者微低于PH7.0的酸性環(huán)境下不穩(wěn)定,如腹腔口蹄疫源性病毒等在低于PH6以下數(shù)小時即可完全失活,因此一些條件相對普通場所采用類似原理杜絕口蹄疫病毒的入侵[9]。對酸和PH病毒穩(wěn)定性的影響差異也有可能與其病毒的腸道感染傳播途徑不同,對PH敏感的病毒，例如口腔通路疫源性病毒,往往在鼻部就能引起腸道感染,了解這些理化性質為我們在生物防控時制定切實可行的方案提供重要的基礎[10]。牛腸道病毒的分類和致病機制牛腸道病毒的四種結構蛋白是誘導宿主免疫應答的關鍵位點[6]。1985年利用免疫學知識將牛腸道病毒分為兩個重要血清型，然而，不同BEV血清型之間存在交叉免疫反應。依據(jù)5'UTR序列和衣殼蛋白結構，牛腸道病毒的兩種血清型被確認[11]。在VP1蛋白研究過程中，發(fā)現(xiàn)其具有類型特異性的重要表位。它們通常被用作腸病毒分型的基礎。根據(jù)VP1的核苷酸序列（大于75％）和氨基酸序列（大于85％）對牛腸病毒進行分類。VP1蛋白因其獨特的穩(wěn)定性，被廣泛認為是BEV分類的基礎[12]。隨后的研究表明，VP4和VP1的分類結果是一致的。隨后幾年間根據(jù)5'UTR序列和衣殼蛋白的結構，經(jīng)過深入認識發(fā)現(xiàn)不同血清型之間存在交叉反應。它們再具有高度的種屬特異性外，也時刻發(fā)生著細微重組進化。它們通常被用作腸道病毒分型的基礎[12]。2009年，對BEVP1核酸進行測序，并且根據(jù)新的技術條件開始建立基于P1，VP1，VP2，VP3和VP4的系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)某些毒株不符合VP1分型標準[13]。認為應該比較VP1蛋白的完整序列，氨基酸同源性應大于88％才可作為分類標準。否則，不能作為分類標準。隨著技術設備發(fā)展，借助免疫電子顯微鏡和中和試驗的結果為分類增加了有力佐證。后來根據(jù)VP1，VP2和VP4對BEV進行分類時，VP4與他們的結果不完全一致。繼而BEV病毒被分為8種血清型，即BEV1~8[14]。截至2017年3月，根據(jù)病毒委員會的分類報告，病毒委員會分類報告將BEV分為E型（BEVA群）和腸道病毒F型（BEVB群）[15]。EnterovirusE可分為四個亞型：EV-E1到EV-E4；EnterovirusF分為六個亞型，EV-F1到EV-F6。到目前為止，BEV的發(fā)病機理尚不清楚。據(jù)報道，它是一種隱性感染，在某些情況下會引起腹瀉和呼吸系統(tǒng)疾病，并伴有睪丸炎、流產和死胎。這些嚴重的癥狀可能與致病性和基因型有關。由于宿主的特殊性和實驗條件的限制，難以在實驗動物模型中重現(xiàn)臨床癥狀[3,16]。牛腸道病毒（BEV）是小核糖核酸病毒科的一個成員。2015年，蓋小春建立了HY12品系的小鼠感染模型，發(fā)現(xiàn)只有ICR小鼠可以被感染。該病毒可以以不同的方式感染，并且在不同的組織中繁殖。最后，他確定了小鼠的感染途徑和抗原分布。BEV感染不會引起嚴重的動物健康問題，并且通常是無癥狀的[17]。2020年，MohsanSaeed研究小組采用了subtiligase標記方法，以對病毒感染后裂解的蛋白質進行整體鑒定。通過將此方法應用于來自多種腸病毒物種的五種病毒，確定了許多已知的和新穎的細胞靶標，在新發(fā)現(xiàn)的裂解底物中，有LSM14A，一種P體駐留蛋白，以前與某些RNA和DNA病毒的防御有關[18]。我們顯示該蛋白的腸病毒2Apro介導的切割阻止它增強抗病毒防御。以上研究為BEV的致病機理和免疫研究提供了重要的理論基礎[19]。參考文獻[1]李婷,孔佳,于曉方,等.人類腸道病毒68型3A蛋白可溶區(qū)的表達及其結構初步研究[J].病毒學報,2015,31(6):653-659.[2]安東.牛腸道病毒2A和3C蛋白酶通過負調控MAVS抑制牛β干擾素表達的研究[D].東北農業(yè)大學,2017.[3]李英利,常繼濤,于力.牛腸道病毒的分離鑒定[J].中國預防獸醫(yī)學報,2011,33(5):388-390.[4]劉亞靜,李欣,張群,等.吉林省不同地區(qū)牛腸道病毒遺傳變異分析[J].中國獸醫(yī)學報,2018,38(1):59-63,68.[5]郭金玉,高志強,張鶴曉,等.牛腸道病毒2型VP1~+表達和間接ELISA方法的建立與應用[J].中國獸醫(yī)雜志,2014,50(11):40-43.[6]邢澤黎,王新平,朱利塞,等.雙抗體夾心ELISA檢測牛腸道病毒抗原方法的建立及流行病學調查[J].中國獸醫(yī)學報,2016,36(4):567-571.[7]ZhuL,XingZ,GaiX,etal.IdentificationofaNovelEnterovirusEIsolatesHy12FromCattlewithSevereRespiratoryandEntericDiseases.[J].PlosOne,2017,9(5).[8]周萍萍,張海麗,安東,等.牛腸道病毒3D抗體與感染相關性研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2018,543(3):151-154,157.[9]RnaViruses-Enterovirus;NewEnterovirusFindingsFromTokyoUniversityofAgricultureandTechnologyReported(dembo-pcrTechniquefortheDetectionofBovineAbortion,Diarrhea,andRespiratoryDiseaseComplexInfectiousAgentsinPotentialVectorsandReservoirs)[J].VeterinaryWeek,2018.[10]莊金秋,梅建國,張穎,等.牛腸道病毒的病原學特征及檢測技術研究進展[J].中國草食動物科學,2017,37(6):49-51.[11]MC,RAS,GBM,etal.DetectionandMolecularCharacterisationofBovineEnterovirusinBrazil:FourDecadesSincetheFirstReport.[J].EpidemiologyandInfection,2019,147.[12]莊金秋,梅建國,劉吉山,等.牛腸道病毒的病原學特征及檢測技術研究進展[J].中國動物檢疫,2017,34(10):43-45,74.[13]KelliGC,MerianeD,AntunesEAK,etal.SeroprevalenceofBovineAdenovirusandEnterovirusAntibodiesRevealsDifferentInfectionDynamicsinCattleHerds[J].ActaScientiaeVeterinariae,2017,45(1).[14]侯佩莉,王洪梅,楊盛華,等.牛腸道病毒山東分離株的分離鑒定及序列分析[C]//中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術研討會論文集,2013:1072-1075.[15]PhilipR,MGH,TimP,etal.High-speedFixed-targetSerialVirusCrystallography.[J].NatureMethods,2017,14(8).[16]張姍.牛腸道病毒BJ101株感染性cDNA克隆的構建及病毒拯救[D].河北農業(yè)大學,2018.[17]蓋小春,邢澤黎,朱利塞,等.E種腸道病毒HY12小鼠感染模型的建立[C]//中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病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