藥品生物等效性試驗(yàn)步驟及保存要求生物等效性試驗(yàn)是評(píng)價(jià)仿制藥與原研藥在體內(nèi)吸收程度和速度是否無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的核心研究，其結(jié)果直接影響藥品的臨床等效性判定與上市審批。本文結(jié)合行業(yè)實(shí)踐與法規(guī)要求，系統(tǒng)闡述試驗(yàn)實(shí)施步驟及核心保存要點(diǎn)，為研發(fā)機(jī)構(gòu)、臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)提供實(shí)操參考。一、試驗(yàn)步驟：從設(shè)計(jì)到結(jié)果判定的全流程管理（一）試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方案制定生物等效性試驗(yàn)需基于藥物特性與法規(guī)要求設(shè)計(jì)科學(xué)方案：試驗(yàn)類型選擇：優(yōu)先采用隨機(jī)、兩周期交叉設(shè)計(jì)（如2×2交叉設(shè)計(jì)），通過(guò)“受試者自身對(duì)照”減少個(gè)體差異干擾；高變異藥物（如CYP3A4底物）或特殊劑型（如緩控釋制劑）可采用平行組設(shè)計(jì)或增加樣本量。樣本量估算：基于預(yù)試驗(yàn)或文獻(xiàn)的藥代參數(shù)（如AUC、Cmax的變異系數(shù)），通過(guò)Schuirmann法等統(tǒng)計(jì)學(xué)公式計(jì)算最小樣本量，確保試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)效能（通常需≥18例，具體依藥物變異度調(diào)整）。方案核心要素：明確試驗(yàn)?zāi)康?、受試藥物信息（劑型、?guī)格、批號(hào)）、受試者人群（健康志愿者/特定患者）、給藥劑量/次數(shù)、樣本采集時(shí)間點(diǎn)、分析方法、統(tǒng)計(jì)分析計(jì)劃等，方案需經(jīng)倫理委員會(huì)審批。（二）受試者篩選與入組受試者選擇直接影響試驗(yàn)結(jié)果代表性：納入標(biāo)準(zhǔn)：健康志愿者需年齡（通常18-45歲）、BMI（18.5-27kg/m2）符合范圍，無(wú)肝腎功能異常、藥物過(guò)敏史；特殊藥物（如心血管藥）可選擇目標(biāo)患者人群。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除合并重大疾病、近期使用CYP450抑制劑/誘導(dǎo)劑、妊娠/哺乳期女性、藥物濫用史者等。知情同意：向受試者充分告知試驗(yàn)流程、風(fēng)險(xiǎn)與受益，簽署知情同意書，確保自愿參與。（三）試驗(yàn)藥物管理藥物的一致性與穩(wěn)定性是試驗(yàn)可靠性的基礎(chǔ)：藥物準(zhǔn)備：受試制劑與參比制劑需來(lái)源合法、質(zhì)量一致（參比制劑為原研藥，受試制劑為自研仿制藥），核對(duì)批號(hào)、有效期、貯藏條件（如避光、2-8℃冷藏），確保試驗(yàn)期間藥物穩(wěn)定性。藥物分發(fā)：按方案要求，給藥前核對(duì)受試者信息、藥物劑型與劑量，采用單次/多次給藥（如穩(wěn)態(tài)試驗(yàn)），記錄給藥時(shí)間、劑量、受試者依從性（如是否嘔吐、漏服）。（四）給藥與生物樣本采集規(guī)范的給藥與采樣操作是數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的前提：給藥操作：空腹/餐后給藥（口服制劑常需空腹以減少食物干擾），給藥時(shí)飲水送服，記錄實(shí)際給藥時(shí)間（精確至分鐘）。樣本采集計(jì)劃：基于預(yù)試驗(yàn)藥代特征（吸收相、分布相、消除相）確定采樣時(shí)間點(diǎn)，如口服制劑通常在給藥前（0h）、給藥后0.5h、1h、2h…24h采集血樣（血漿/血清）；尿液樣本需采集特定時(shí)間段（如0-4h、4-8h）的尿液。樣本采集操作：使用抗凝管（如EDTA管）采集血液，離心（3000rpm，10分鐘）分離血漿/血清，標(biāo)記樣本編號(hào)、采集時(shí)間，立即處理或轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。（五）生物樣本分析分析方法的可靠性決定數(shù)據(jù)質(zhì)量：方法驗(yàn)證：遵循FDA/EMA/NMPA指導(dǎo)原則，驗(yàn)證方法的特異性、線性、精密度、準(zhǔn)確度、回收率、穩(wěn)定性（凍融/長(zhǎng)期穩(wěn)定性）等，確保分析結(jié)果可靠。樣本檢測(cè)：采用色譜法（HPLC、LC-MS/MS）或免疫分析法，按驗(yàn)證方法檢測(cè)樣本中藥物濃度，記錄原始數(shù)據(jù)，定期進(jìn)行質(zhì)量控制（隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線、質(zhì)控樣品）。（六）數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析科學(xué)的統(tǒng)計(jì)分析是等效性判定的核心：藥代參數(shù)計(jì)算：通過(guò)非房室模型（NCA）計(jì)算AUC???、AUC??∞、Cmax、Tmax、t?/?等參數(shù)。統(tǒng)計(jì)分析：以對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后的AUC和Cmax為主要指標(biāo)，采用方差分析（ANOVA）或線性混合模型比較受試制劑與參比制劑的幾何均值比（GMR），計(jì)算90%置信區(qū)間（CI）。若CI落在80.00%-125.00%范圍內(nèi)（或法規(guī)要求的其他范圍），則判定生物等效。二、保存要求：樣本、藥物與數(shù)據(jù)的合規(guī)管理（一）生物樣本保存生物樣本的穩(wěn)定保存是結(jié)果溯源的關(guān)鍵：短期保存：采集后的血漿/血清若需當(dāng)天處理，可暫存于2-8℃冰箱（≤4小時(shí)，依藥物穩(wěn)定性調(diào)整）；若需后續(xù)分析，需立即凍存于-20℃或-80℃冰箱。長(zhǎng)期保存：試驗(yàn)結(jié)束后，保留20%的樣本于-80℃冰箱，保存期限至少為試驗(yàn)報(bào)告批準(zhǔn)后2年（或法規(guī)要求），期間避免反復(fù)凍融（建議≤3次）。運(yùn)輸保存：樣本轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)用干冰或低溫運(yùn)輸箱，確保溫度穩(wěn)定，記錄運(yùn)輸過(guò)程的溫度數(shù)據(jù)（如每30分鐘監(jiān)測(cè)一次）。（二）試驗(yàn)藥物保存藥物的質(zhì)量穩(wěn)定是試驗(yàn)等效性的基礎(chǔ)：原輔料與制劑：按藥品說(shuō)明書貯藏條件保存（如遮光、密封、陰涼處≤20℃或冷處2-8℃），避免高溫、高濕、光照；試驗(yàn)藥物需單獨(dú)存放，與其他藥物隔離，防止混淆。剩余藥物處理：試驗(yàn)結(jié)束后，剩余藥物需清點(diǎn)、回收，按法規(guī)要求銷毀或返還申辦者，記錄處理過(guò)程（如銷毀時(shí)間、方式、執(zhí)行人）。（三）數(shù)據(jù)與資料保存數(shù)據(jù)的完整性與可追溯性是合規(guī)的核心：紙質(zhì)資料：試驗(yàn)方案、知情同意書、原始記錄（采樣/藥物分發(fā)/分析數(shù)據(jù)）需存檔，保存期限至少為藥品上市后5年（或法規(guī)要求），存放于干燥、避光、防蟲(chóng)的檔案室。電子數(shù)據(jù)：采用安全的電子系統(tǒng)（如EDC系統(tǒng)）存儲(chǔ)，定期備份（每周一次），設(shè)置訪問(wèn)權(quán)限，確保數(shù)據(jù)的完整性、可追溯性；備份數(shù)據(jù)需離線保存（如移動(dòng)硬盤），防止數(shù)據(jù)丟失。結(jié)