電泳儀使用培訓(xùn)演講人：日期:CATALOGUE目錄01設(shè)備結(jié)構(gòu)與原理02標(biāo)準(zhǔn)操作流程03安全操作規(guī)范04常見故障排除05結(jié)果分析要點(diǎn)06日常維護(hù)保養(yǎng)01設(shè)備結(jié)構(gòu)與原理核心組件功能介紹電源模塊提供穩(wěn)定的直流電壓和電流輸出，控制電泳過程中的電場強(qiáng)度，確保帶電粒子遷移的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。容納緩沖液和樣品，通常由透明材料制成以便觀察電泳進(jìn)程，設(shè)計(jì)需保證電場均勻分布和散熱性能。由正負(fù)極（鉑金或碳棒）組成，負(fù)責(zé)建立電場，需定期清潔以避免氧化或污染影響電泳效果。部分高端機(jī)型配備循環(huán)水冷卻或半導(dǎo)體溫控模塊，防止電泳過程中因焦耳熱導(dǎo)致蛋白變性或凝膠熔化。電泳槽電極系統(tǒng)冷卻裝置電荷效應(yīng)介質(zhì)阻力帶電粒子在電場中受庫侖力驅(qū)動，遷移速率與凈電荷量成正比，與粒子半徑成反比（依據(jù)斯托克斯定律）。凝膠（如聚丙烯酰胺或瓊脂糖）的分子篩效應(yīng)使不同大小粒子分離，分辨率取決于凝膠孔徑與交聯(lián)度。電泳基礎(chǔ)理論簡述pH值影響緩沖液pH決定蛋白質(zhì)等兩性分子的解離狀態(tài)，進(jìn)而影響其凈電荷及遷移方向（等電點(diǎn)聚焦電泳的核心原理）。電場參數(shù)電壓梯度（V/cm）直接影響遷移速度，過高電壓可能導(dǎo)致發(fā)熱或條帶畸變，需根據(jù)樣品類型優(yōu)化設(shè)置。不同型號的最大輸出參數(shù)（如3000V或500mA）決定其適用場景（如高通量篩查或微量樣品分析）。電壓/電流范圍檢查電極接口類型、凝膠板尺寸及緩沖液槽容量是否匹配實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有耗材（如Bio-Rad與GEHealthcare的配件標(biāo)準(zhǔn)）。兼容性標(biāo)識01020304垂直電泳儀（適合SDS）與水平電泳儀（適合核酸電泳）的結(jié)構(gòu)差異，以及雙向電泳系統(tǒng)的特殊配置要求。功能差異通過CE、UL等國際認(rèn)證的機(jī)型具備過載保護(hù)、漏電檢測等功能，確保操作人員安全。安全認(rèn)證儀器型號識別要點(diǎn)02標(biāo)準(zhǔn)操作流程確保DNA、RNA或蛋白質(zhì)樣本無雜質(zhì)污染，需通過分光光度計(jì)檢測A260/A280比值，DNA理想范圍為1.8-2.0，RNA為2.0-2.2，蛋白質(zhì)需通過BCA或Bradford法測定濃度。樣本制備規(guī)范樣本純度要求根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇TBE、TAE或SDS緩沖液，嚴(yán)格按比例稀釋，避免離子強(qiáng)度過高或過低影響電泳效果。緩沖液配制混合樣本與6×LoadingBuffer，確保染料比例準(zhǔn)確（通常1:5），避免因染料過量導(dǎo)致條帶畸變或遷移異常。樣本加載染料添加電壓與電流選擇短片段DNA（<1kb）需30-60分鐘，長片段（>5kb）需2-4小時(shí)，蛋白質(zhì)電泳時(shí)間根據(jù)分子量大小設(shè)定，通常為1-2小時(shí)。電泳時(shí)間控制溫度監(jiān)控電泳過程中需監(jiān)測緩沖液溫度，避免過熱導(dǎo)致凝膠變形或條帶擴(kuò)散，必要時(shí)使用循環(huán)冷卻系統(tǒng)維持恒溫。根據(jù)凝膠類型（瓊脂糖或聚丙烯酰胺）和分離片段大小調(diào)整電壓，瓊脂糖凝膠通常設(shè)為80-120V，聚丙烯酰胺凝膠為100-200V，電流需控制在安全范圍內(nèi)（≤50mA）。參數(shù)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)上樣操作步驟加樣孔清潔使用微量移液器吸頭或注射針頭清除加樣孔中殘留的凝膠碎片或氣泡，確保樣本順利進(jìn)入孔內(nèi)。樣本精準(zhǔn)加載將移液器垂直對準(zhǔn)加樣孔，緩慢釋放樣本，避免產(chǎn)生氣泡或樣本溢出污染相鄰孔位。分子量標(biāo)記放置在首尾或中間孔位加入預(yù)染或熒光標(biāo)記的分子量標(biāo)準(zhǔn)品，便于后續(xù)條帶分析和結(jié)果比對。電泳槽密封檢查確認(rèn)電泳槽蓋緊密閉合，電極連接正確（黑色為負(fù)極，紅色為正極），防止短路或電泳中斷。03安全操作規(guī)范防電擊保護(hù)措施每次使用前需確認(rèn)電泳儀電源線接地良好，避免因漏電導(dǎo)致電擊風(fēng)險(xiǎn)，定期使用萬用表檢測接地電阻是否符合標(biāo)準(zhǔn)。設(shè)備接地檢查操作人員需穿戴絕緣手套和防靜電鞋，尤其在接觸高壓電極或濕度過高的環(huán)境時(shí)，需額外檢查防護(hù)裝備的完整性。絕緣防護(hù)裝備根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求分階段調(diào)整電壓，避免一次性加載過高電壓，同時(shí)設(shè)置過載保護(hù)裝置以自動切斷異常電流。電壓分級控制廢液處理流程分類收集廢液電泳緩沖液與染色廢液需分開存放于專用防腐蝕容器中，并標(biāo)注成分及濃度，嚴(yán)禁混合傾倒以避免化學(xué)反應(yīng)。中和處理步驟若廢液接觸過生物樣本，需先經(jīng)高溫高壓滅菌或加入消毒劑靜置后再處理，防止微生物擴(kuò)散污染環(huán)境。含酸堿廢液需先用中和劑調(diào)節(jié)至中性（pH6-8），再轉(zhuǎn)移至危廢暫存區(qū)，由專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行無害化處理。生物污染防控緊急情況處置電擊事故響應(yīng)立即切斷電源并使用絕緣工具移開受害者，若出現(xiàn)昏迷或心律不齊，需實(shí)施心肺復(fù)蘇并同步聯(lián)系醫(yī)療救援。廢液泄漏處理小范圍泄漏時(shí)用吸附棉覆蓋并收集至密封袋，大范圍泄漏需疏散人員并啟動實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急預(yù)案，使用防化材料圍堵。設(shè)備過熱處理發(fā)現(xiàn)異常升溫或冒煙時(shí)，迅速關(guān)閉電源并啟用通風(fēng)系統(tǒng)，待冷卻后檢查電路是否短路或散熱部件故障。04常見故障排除異常條帶分析條帶位置偏移若分子量標(biāo)記與預(yù)期不符，可能是電泳時(shí)間過長、凝膠溫度過高或電場不均勻所致，需校準(zhǔn)電泳時(shí)間并確保冷卻系統(tǒng)正常運(yùn)行。條帶缺失或非特異性條帶通常由樣本降解、上樣量不足或引物二聚體污染引起，建議重新提取高質(zhì)量核酸、優(yōu)化上樣體積并進(jìn)行引物特異性驗(yàn)證。條帶模糊或拖尾可能因凝膠配制比例不當(dāng)、電泳緩沖液重復(fù)使用次數(shù)過多或電壓設(shè)置過高導(dǎo)致，需檢查凝膠均勻性并更換新鮮緩沖液，調(diào)整電壓至推薦范圍。設(shè)備報(bào)警處理電壓/電流異常報(bào)警檢查電極連接是否氧化或松動，確認(rèn)緩沖液液面覆蓋電極，若問題持續(xù)需排查電源模塊或主板故障。門蓋未閉合報(bào)警檢查安全感應(yīng)開關(guān)是否靈敏，清理軌道異物，若感應(yīng)器損壞需更換硬件并重新校準(zhǔn)安全鎖定機(jī)制。溫度過高報(bào)警清潔散熱風(fēng)扇及通風(fēng)口，確保冷卻循環(huán)系統(tǒng)無堵塞，必要時(shí)更換老化制冷劑或聯(lián)系廠商檢修溫控模塊。定期使用去離子水擦拭鉑金電極，避免鹽結(jié)晶沉積影響導(dǎo)電性，每月用0.1MHNO?浸泡去除氧化層。電極清潔與保養(yǎng)觀察灌膠時(shí)是否滲漏，更換老化密封圈并均勻涂抹凡士林以增強(qiáng)密封效果。凝膠托盤密封性檢查運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)DNA/蛋白樣本，對比歷史數(shù)據(jù)評估分辨率與遷移率，記錄基線參數(shù)用于后續(xù)故障診斷參考。系統(tǒng)性能驗(yàn)證儀器維護(hù)自檢05結(jié)果分析要點(diǎn)成像系統(tǒng)操作多通道熒光兼容性若檢測熒光標(biāo)記樣本，需選擇適配的激發(fā)/發(fā)射濾光片組合，避免信號串?dāng)_，并校準(zhǔn)各通道間的色彩平衡。03使用成像系統(tǒng)軟件中的背景扣除功能，消除凝膠邊緣或孔道殘留的雜散光干擾，提高目標(biāo)條帶的對比度。02背景校正與去噪處理圖像采集參數(shù)設(shè)置根據(jù)電泳凝膠類型（如瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠）調(diào)整曝光時(shí)間、增益值和分辨率，確保圖像清晰且無過曝或欠曝現(xiàn)象。01條帶形狀與邊緣分析通過測量條帶與前沿染料的遷移距離比值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線判斷目標(biāo)分子大小，注意排除凝膠濃度不均導(dǎo)致的局部遷移速率差異。相對遷移率計(jì)算異常條帶識別額外條帶可能源于樣本降解、非特異性結(jié)合或污染，需通過重復(fù)實(shí)驗(yàn)或?qū)φ諛颖掘?yàn)證其來源。正常條帶應(yīng)呈現(xiàn)均勻的梭形或矩形，邊緣清晰；若出現(xiàn)拖尾、擴(kuò)散或扭曲，可能提示上樣量過大、電壓不穩(wěn)定或凝膠制備缺陷。條帶判讀技巧選用覆蓋目標(biāo)分子量范圍的多重標(biāo)準(zhǔn)品（如DNAladder或蛋白質(zhì)Marker），確保線性區(qū)間涵蓋待測樣本，避免外推誤差。分子量標(biāo)定方法標(biāo)準(zhǔn)品選擇與梯度設(shè)計(jì)采用對數(shù)-線性或三次樣條插值法建立遷移距離-分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線，優(yōu)先選擇R2>0.99的高置信度模型。非線性回歸擬合同一批次的多個(gè)凝膠需同步運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)品，比較各凝膠間的標(biāo)定曲線斜率，評估系統(tǒng)誤差是否在允許范圍內(nèi)（通?！?%）?？缒z校準(zhǔn)驗(yàn)證06日常維護(hù)保養(yǎng)清潔消毒規(guī)程1234儀器表面清潔使用無絨軟布蘸取中性清潔劑擦拭電泳儀外殼，避免液體滲入內(nèi)部電路，清潔后需用干燥布擦凈殘留水分，防止腐蝕或短路。每次使用后需倒棄緩沖液，用去離子水沖洗槽體三次，隨后以75%酒精噴灑內(nèi)壁并靜置，最后用無菌超純水沖洗避免化學(xué)殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。電泳槽消毒凝膠托盤處理拆卸托盤后用軟毛刷清除殘留凝膠，浸泡于含酶清洗液中，超聲震蕩去除頑固污漬，高溫高壓滅菌后晾干備用。通風(fēng)系統(tǒng)維護(hù)定期拆卸風(fēng)扇濾網(wǎng)，用壓縮空氣清除積塵，必要時(shí)用異丙醇棉簽清潔扇葉軸承，確保散熱效率并降低噪音。鉑金電極拋光每月采用氧化鋁拋光膏對電極表面進(jìn)行機(jī)械拋光，去除氧化層和蛋白質(zhì)沉積，拋光后需用硝酸浸泡活化電極活性位點(diǎn)。電極極性切換建議每完成電泳后手動切換正負(fù)極，避免單側(cè)電極過度損耗，延長電極使用壽命。導(dǎo)電性檢測每周使用萬用表測量電極間電阻值，若阻值超過標(biāo)準(zhǔn)范圍，需檢查電極連接處是否氧化或松動，必要時(shí)更換電極線纜。緩沖液污染監(jiān)控當(dāng)電極出現(xiàn)氣泡異常增多或電泳速度下降時(shí)，應(yīng)立即更換新配制的緩沖液，避免鹽結(jié)晶腐蝕電極。電極保養(yǎng)周期長期存放要求環(huán)境濕度控