I

DB21/T3994—2024

番茄褐色皺紋果病毒監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了番茄褐色皺紋果病毒（Tomatobrownrugosefruitvirus，ToBRFV）的監(jiān)測依據(jù)、

監(jiān)測工具、疫情監(jiān)測、診斷與鑒定、監(jiān)測報(bào)告、標(biāo)本保存與處理等技術(shù)內(nèi)容。

本文件適用于番茄褐色皺紋果病毒的監(jiān)測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

SN/T2964植物病毒檢測規(guī)范

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4監(jiān)測依據(jù)

番茄褐色皺紋果病毒，屬煙草花葉病毒屬，病毒粒子呈桿狀，寬約18nm，長約300nm。病毒通常

在種子中存活數(shù)年，種子萌芽時(shí)侵染幼苗嫩葉和頂芽，逐漸擴(kuò)展至莖桿、果實(shí)系統(tǒng)感染植株；也能隨種

子和機(jī)械摩擦、嫁接、搭架綁蔓、修枝打杈等農(nóng)事操作在田間快速擴(kuò)散。該病毒可引起番茄植株花葉，

花梗、花萼和葉柄出現(xiàn)褐變壞死條斑,果實(shí)出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)、變褐、表面皺縮、有斑紋、果實(shí)減少。其發(fā)

生規(guī)律、傳播途徑和典型癥狀等是該病毒監(jiān)測的重要依據(jù)。

5監(jiān)測工具

剪刀、鏟子、手套、取樣袋等。

6疫情監(jiān)測

監(jiān)測準(zhǔn)備

收集當(dāng)?shù)胤?、辣椒等茄科植物的種植情況，番茄褐色皺紋果病毒發(fā)生情況等相關(guān)資料；制定簡便

易行的番茄褐色皺紋果病毒監(jiān)測計(jì)劃。

監(jiān)測作物

監(jiān)測作物包括番茄、辣椒、茄子、煙草等茄科植物。

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監(jiān)測區(qū)域

6.3.1未發(fā)生區(qū)

重點(diǎn)監(jiān)測從疫情發(fā)生區(qū)調(diào)入茄科種苗及產(chǎn)品的地區(qū)，境外茄科引種種植區(qū)，茄科科種苗繁育基地、

出口茄科種子生產(chǎn)基地及周邊等疫情發(fā)生高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域。主要監(jiān)測是否傳入番茄褐色皺紋果病毒。

6.3.2發(fā)生區(qū)

重點(diǎn)監(jiān)測發(fā)生疫情的代表性地塊和邊緣區(qū)。主要監(jiān)測多年種植寄主植物并有番茄褐色皺紋果病毒發(fā)

生歷史的地塊和疫苗來源的育苗基地。監(jiān)測番茄褐色皺紋果病毒的發(fā)生動態(tài)和擴(kuò)散趨勢。

監(jiān)測時(shí)期

在茄科作物苗期、開花坐果期和結(jié)果期等番茄褐色皺紋果病毒顯癥期分別進(jìn)行2次～3次調(diào)查，各地

可根據(jù)當(dāng)?shù)氐臍夂蚝颓芽频纳诖_定具體的調(diào)查時(shí)間，重點(diǎn)開展結(jié)果期監(jiān)測。

監(jiān)測方法

6.5.1未發(fā)生區(qū)

6.5.1.1訪問調(diào)查

向菜農(nóng)、農(nóng)資經(jīng)銷商、農(nóng)技人員等相關(guān)人員詢問有關(guān)茄科作物果實(shí)變褐皺縮和花葉情況，初步了解

疫情可能發(fā)生地點(diǎn)、時(shí)間、危害情況。對詢問過程中發(fā)現(xiàn)的番茄褐色皺紋果病毒可疑發(fā)生地區(qū)，進(jìn)行深

入重點(diǎn)調(diào)查。

6.5.1.2田間踏查

對訪問調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)的可疑發(fā)生區(qū)和其他高風(fēng)險(xiǎn)茄科作物種植區(qū)，在生長期進(jìn)行2次～3次踏查，

觀察田間有無番茄褐色皺紋果病毒發(fā)病癥狀(見附錄A)。調(diào)查面積應(yīng)占可疑發(fā)生區(qū)和其他高風(fēng)險(xiǎn)茄科作

物種植區(qū)種植面積的20%～30%。

6.5.1.3定點(diǎn)調(diào)查

在訪問調(diào)查和踏查過程中，發(fā)現(xiàn)可疑疫情需進(jìn)行定點(diǎn)調(diào)查。采用5點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)隨機(jī)調(diào)查10株，

統(tǒng)計(jì)發(fā)病株率與病果率。

6.5.2發(fā)生區(qū)

6.5.2.1發(fā)生區(qū)范圍監(jiān)測

采取訪問調(diào)查和踏查方法（具體方法見6.5.1.1和6.5.1.2），監(jiān)測發(fā)生區(qū)的范圍變化。

6.5.2.2發(fā)生區(qū)發(fā)生動態(tài)監(jiān)測

采取定點(diǎn)調(diào)查法（具體方法見6.5.1.3），每縣（市、區(qū)）選10個(gè)調(diào)查點(diǎn)，每7d調(diào)查1次，整個(gè)生育

期調(diào)查4次。

7診斷與鑒定

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田間現(xiàn)場診斷

主要檢查葉片、花梗、花萼、葉柄和果實(shí)，觀察是否出現(xiàn)病毒危害癥狀。葉片和果實(shí)發(fā)病且符合典

型癥狀的可直接判定。

室內(nèi)鑒定

7.2.1采樣

經(jīng)現(xiàn)場診斷，不能確定為番茄褐色皺紋果病毒的，用剪刀剪取具有典型癥狀的葉片、果實(shí)或用鏟子

挖取疑似癥狀植株等植物樣本放入采樣袋，袋內(nèi)應(yīng)附有標(biāo)簽，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。標(biāo)簽應(yīng)記錄好采集

時(shí)間、地點(diǎn)、采集人、發(fā)病癥狀及發(fā)病面積等必要信息

7.2.2方法

采用RT-PCR法。鑒定步驟應(yīng)按照SN/T2964的規(guī)定執(zhí)行。

8監(jiān)測報(bào)告

詳細(xì)記錄監(jiān)測結(jié)果，記載調(diào)查地點(diǎn)、時(shí)間、寄主植物名稱、發(fā)生面積、危害程度等（見附錄B）。并

將原始記錄表連同照片、影像等其它資料整理匯總形成監(jiān)測報(bào)告，由縣級植物檢疫機(jī)構(gòu)按要求逐級報(bào)送。

9標(biāo)本保存與處理

監(jiān)測過程中使用的有關(guān)材料和用具，在使用完畢后須進(jìn)行消毒和除害處理。經(jīng)檢疫鑒定后的種子樣

品應(yīng)保存在4℃冰箱內(nèi)，葉片和果實(shí)樣品應(yīng)保存在-20℃以下或凍干保存3個(gè)月備查，保存期滿后，進(jìn)行

滅活處理。

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A

A

附錄A

（資料性）

番茄褐色皺紋果病毒典型癥狀

A.1番茄染病癥狀

染病后，嫩葉和頂芽上出現(xiàn)花葉癥狀，葉脈黃化、葉片變窄，嚴(yán)重時(shí)花梗、花萼和葉柄出現(xiàn)褐變壞

死條斑。在番茄生長后期，會導(dǎo)致果實(shí)顏色變淺，變綠或者出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)，嚴(yán)重時(shí)造成番茄果實(shí)變褐，

表面皺縮，有斑紋?；ê凸麑?shí)數(shù)量減少（見圖A.1）

圖A.1番茄上褐色皺紋果病毒引起的癥狀

A.2辣椒染病癥狀

染病后，植株發(fā)育遲緩，葉片變形、變黃、有斑點(diǎn)，果實(shí)癥狀為果實(shí)變形、出現(xiàn)黃、棕或綠色條紋

（見圖A.2）。

圖A.2辣椒上褐色皺紋果病毒引起的癥狀

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B

B

附錄B番茄褐色皺紋果病毒調(diào)查監(jiān)測記錄表

番茄褐色皺紋果病毒監(jiān)測結(jié)果填入表B.1。

表B.1番茄褐色皺紋果病毒調(diào)查監(jiān)測記錄表

調(diào)查地點(diǎn)：縣鄉(xiāng)(鎮(zhèn))村調(diào)查時(shí)間:

調(diào)查單位：調(diào)查人：

作物名稱：生育期：栽培方式：

種植面積(667m2):調(diào)查面積(667m2)：種苗來源：

疑似癥狀/危害狀：

調(diào)查點(diǎn)數(shù)1