中國獸醫(yī)協(xié)會發(fā)布I請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。朱鵬辰、王朝、王蕊曦、范新藝、韋國山、黃家利、李趙睿羿、鐘浩、李亞麗、楊炳雄、周汝1豬球蟲病診斷技術(shù)本文件規(guī)定了豬球蟲病臨床診斷、病原檢查、病理檢查、綜合判定等診斷技術(shù)要NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范由艾美耳科（Eimeriidae）等孢屬（Isospore）和艾美耳屬（Eimeria）的16種球蟲所引起的以腹瀉4.1流行病學(xué)4.2.1囊等孢球蟲病臭（見附錄B的圖B.1）。病豬表現(xiàn)為衰弱，脫水，發(fā)育遲緩，時(shí)有死亡，存活的仔豬生長發(fā)育嚴(yán)重受4.2.2豬艾美耳球蟲病24.3病理檢查4.3.1材料準(zhǔn)備），4.3.1.2恒溫箱（4°C~60°C）、顯微鏡（100×)、酒精燈、手術(shù)刀、棉拭子、自封袋、平皿等。4.3.2病變檢查4.3.2.1對疑似球蟲感染致死或?qū)⒁劳龅呢i進(jìn)行解剖，觀察腸道病變情況。4.3.2.2尸體剖檢所觀察的特征性病變是急性腸炎，主要見于空腸和回腸，若發(fā)現(xiàn)腸道明顯腫大、脹），4.3.3.2將黏膜放在載玻片上，滴1滴~2滴磷），4.3.4卵囊檢查加蓋玻片，輕輕將內(nèi)容物壓散，置顯微鏡下檢查，若見大量球蟲卵囊，判為球蟲4.3.4.2或取有灰白色斑點(diǎn)或斑塊的腸道，縱向剪開，用磷酸鹽緩沖液輕輕洗去黏膜表層的雜物，刮5.1材料與試劑5.1.1器材3目）銅絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)、100mL量筒、50mL燒杯、50mL離心管、10mL離離心機(jī)、麥克馬斯特計(jì)數(shù)板、載玻片、蓋玻片5.1.2試劑飽和鹽水和2.5%重鉻酸鉀溶液，配置方法分別見附錄B的B.1和B5.2樣品采集、保存和運(yùn)輸若是群體采樣，采集新鮮糞便不少于300g；若是個(gè)體采樣，采集新鮮糞便不少于1將所采集樣品在24h內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，運(yùn)輸條件應(yīng)符合NY/T541的相關(guān)要求。5.3操作方法5.3.1.2輕輕攪勻，依次經(jīng)孔徑為0.25mm和0.15mm銅絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過濾。5.3.1.5室溫（25°C）用飽和鹽），5.3.1.7定性檢查的判定a)發(fā)現(xiàn)球蟲卵囊，判為陽性，說明該豬（群）已感染球蟲。將球蟲陽性糞樣置于2.5%重鉻酸鉀溶液中，在25°C~28°C環(huán)境培養(yǎng)至孢子化卵囊（見附錄A確定球蟲種類；5.3.2.1對定性檢查中呈陽性的糞樣，需進(jìn)行定量檢查。45.3.2.4用吸管吸取混懸液注滿麥克馬斯特計(jì)數(shù)板的25.3.2.5將麥克馬斯特計(jì)數(shù)板置于顯微鏡下，用10×10倍鏡計(jì)數(shù)每個(gè)計(jì)數(shù)室（5.3.2.6卵囊較少的糞便中的卵囊數(shù)計(jì)算公式對于卵囊數(shù)較少的糞便樣品，其卵囊數(shù)計(jì)算，按照公式（1）進(jìn)行計(jì)5.3.2.7卵囊較多的糞便中的卵囊數(shù)計(jì)算公式對于卵囊數(shù)較多的糞便樣品，可在60mL總體積的基礎(chǔ)上，用飽和鹽水再稀釋B倍后計(jì)數(shù)OPG＝A×40×B（2）B——飽和鹽水稀釋倍數(shù)。5.3.2.8定量檢查的判定5A.1豬球蟲及種類在我國，已發(fā)現(xiàn)的蟲種有：囊等孢球蟲（Isos新蒂氏艾美耳球蟲（Eimerianeodebliecki）、豬艾美耳球蟲（Eimeriaperminuta）和豚艾美耳球蟲（Eimeriaporci其中以囊等孢球蟲的致病力最強(qiáng)，其次為蒂氏艾美耳球蟲、光滑艾美耳球蟲、粗糙艾美耳球蟲和有刺艾美耳球蟲。A.2囊等孢球蟲卵囊呈球形或亞球形，大小為（18.67μm~23.88μm）×（16.9μm~20.67μm）。無微孔。卵囊內(nèi)孢子化時(shí)間最早約為63h。A.3蒂氏艾美耳球蟲殘?bào)w，有斯氏體和內(nèi)殘?bào)w。孢子化時(shí)間約為170h。A.4光滑艾美耳球蟲A.5粗糙艾美耳球蟲~25.13μm）。微孔明顯，無極帽。有斯氏體，無內(nèi)殘?bào)w。孢子化時(shí)間約為194h。A.6有刺艾美耳球蟲無微孔及外殘?bào)w，有極粒、斯氏體和內(nèi)殘?bào)w。孢子化時(shí)間約為260h。A.7新蒂氏艾美耳球蟲A.8豬艾美耳球蟲兩個(gè)折光球。卵囊孢子化時(shí)間約為144h。6A.9極細(xì)艾美耳球蟲殘?bào)w，有極粒。孢子囊近似橢圓形，有斯氏體，內(nèi)殘?bào)w顆粒粗大。卵囊孢子化時(shí)間約為168h。A.10豚艾美耳球蟲7(資料性)豬球蟲種類及其卵囊形態(tài)特征囊等孢球蟲病典型癥狀見圖B.1。圖B.1豬等孢球蟲病典型癥狀圖(Schubnelletal.,2016)8稱取25g重鉻酸鉀固體，放入1L燒杯中，加入蒸餾水至1000mL刻度處，充分?jǐn)嚢枋怪劂t酸鉀完全溶解后，冷卻至室溫，即為2.5%重鉻酸鉀溶液。充分?jǐn)噭?，用適量1mol/L鹽酸調(diào)溶液的pH至7.4，再加蒸餾水定容至的玻璃瓶中，在121kPa壓力下蒸汽滅菌20min，室溫保存。9[3]王楠皓.我國部分地區(qū)規(guī)模化豬場豬球蟲感染情況調(diào)查[D].河南農(nóng)業(yè)大學(xué).2023.[4]GongQL,ZhaoWX,WangYC,etal.Prevalenceofcoccidiaindomes1980and2019:asystemati