ICS65.020

B05

DB2308

黑龍江省佳木斯市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB2308/T124—2022

稻瘟病菌生理小種鑒定技術(shù)規(guī)范

2022-12-06發(fā)布2023-01-05實(shí)施

佳木斯市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB2308/T124—2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是資料性附錄。

本文件由佳木斯市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件由佳木斯市市場(chǎng)監(jiān)督管理局批準(zhǔn)發(fā)布。

本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所

本文件主要起草人：宋成艷、王桂玲、劉乃生、陸文靜、周雪松、韓笑、馬文東。

本文件為2022年首次發(fā)布。

Ⅰ

DB2308/T124—2022

稻瘟病菌生理小種鑒定技術(shù)規(guī)范

1適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了稻瘟病菌（Magnaportheoryzae）生理小種鑒定的術(shù)語(yǔ)、鑒別寄主選擇、

育苗、病菌采樣、分離、培養(yǎng)、接種、保濕培養(yǎng)、調(diào)查記載方法及抗性評(píng)價(jià)技術(shù)措施。

本文件適用于黑龍江省佳木斯市稻瘟病菌生理小種鑒定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改單）適用于本文件。

NY/T2646水稻品種試驗(yàn)稻瘟病抗性鑒定與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1對(duì)照品種controlvariety

未檢測(cè)出對(duì)病菌具有抗性基因，因而對(duì)病菌各個(gè)菌株均呈毒性反應(yīng)的鑒別寄主，用以檢

測(cè)菌株活力或環(huán)境條件是否適宜、操作是否符合規(guī)范。

4材料和用具

4.1常用儀器用具

常用儀器及用具包括：

剪刀、超凈工作臺(tái)、無(wú)菌載玻片、試管、接種針、9cm培養(yǎng)皿、冰箱、生物顯微鏡、培

養(yǎng)箱、高壓滅菌器、干燥滅菌器、醫(yī)用白瓷盤(pán)、濾紙、移液器、變色硅膠、干燥器、醫(yī)用紗

布、保濕隔離罩、旱田土、壯秧劑、喉頭噴霧器。

4.2專(zhuān)用器具

電動(dòng)吸引器：市場(chǎng)售賣(mài)的電動(dòng)吸引器接入反向電源變成向外噴霧。

4.3試驗(yàn)場(chǎng)地及設(shè)施

選擇水泥地面場(chǎng)所，有水源和電源，遮陽(yáng)布，防雀、鼠網(wǎng)。

4.4試劑及培養(yǎng)基

試劑及培養(yǎng)基包括：75%酒精、瓊脂粉、酵母培養(yǎng)基（淀粉10g、酵母粉2g、瓊脂粉

20g、水1000mL）；高粱粒培養(yǎng)基（高粱粒煮到中間有小硬心時(shí)，高溫滅菌40min）。

4.5鑒別寄主

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特特普、珍龍13、四豐43、合江18、東農(nóng)363、關(guān)東51、麗江新團(tuán)黑谷7個(gè)全國(guó)稻瘟病菌

生理小種鑒別寄主。

5鑒定方法

5.1病菌標(biāo)樣采集與保存

采集主要稻區(qū)主栽品種的節(jié)瘟或者穗頸瘟，晾干后放在有變色硅膠的干燥器內(nèi)于4℃保

存?zhèn)溆谩?/p>

5.2病菌產(chǎn)孢

將采集的病菌標(biāo)樣，用無(wú)菌水洗凈后放在26℃培養(yǎng)箱內(nèi)，保濕培養(yǎng)12h即可產(chǎn)生大量

分生孢子。

5.3病菌分離

懸掛震落法分離單孢菌株。

5.3.1孢子震落

在無(wú)菌條件下進(jìn)行，先在倒有瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿的內(nèi)蓋上抹上凡士林，將培養(yǎng)好帶有

霉層的病節(jié)粘在凡士林上，要求病節(jié)霉層面朝上（不與凡士林接觸），將粘有病節(jié)的培養(yǎng)皿

蓋子蓋到培養(yǎng)皿上，用手輕輕敲打培養(yǎng)皿蓋，震落一次后再換位置震落，使孢子均勻地散落

在培養(yǎng)基表面，敲打完后將培養(yǎng)皿反轉(zhuǎn)放置。

5.3.2單孢鏡檢

鏡檢時(shí)將培養(yǎng)皿反轉(zhuǎn)放在顯微鏡的載物臺(tái)上，在10倍×10倍的顯微鏡下查找稻瘟病菌

孢子，同時(shí)在其附近無(wú)其它孢子和雜菌存在時(shí)，用蘸水鋼筆在單孢處輕輕點(diǎn)一墨水小圓點(diǎn)，

以小圓點(diǎn)為中心畫(huà)個(gè)小圓圈，將點(diǎn)過(guò)的小圓點(diǎn)用酒精棉擦掉，再進(jìn)一步檢查所劃圓圈內(nèi)是否

是單個(gè)孢子，確定無(wú)其它孢子后，再用蘸水鋼筆在單孢處輕輕點(diǎn)一墨水小圓點(diǎn)，在無(wú)菌條件

下將所畫(huà)圓圈內(nèi)的單孢挑入酵母淀粉培養(yǎng)基上。

5.4病菌培養(yǎng)

將挑取的單孢放入酵母淀粉培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)皿上注明菌株編號(hào)、分離日期后，放入

26℃培養(yǎng)箱內(nèi)黑暗培養(yǎng)。

5.5接種體準(zhǔn)備

5.5.1菌絲培養(yǎng)

將挑取的單孢放入酵母淀粉培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)皿里培養(yǎng)5d～7d，再轉(zhuǎn)入斜面培養(yǎng)基上

培養(yǎng)7d。

5.5.2孢子培養(yǎng)

將斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)的各單孢菌株分別接種到高粱粒培養(yǎng)基上，在26℃培箱內(nèi)黑暗培

養(yǎng)14d左右備用。

5.5.3孢子懸浮液制備

2

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將高粱粒培養(yǎng)基培養(yǎng)的各單孢菌株分別用無(wú)菌水洗后再放在醫(yī)用白瓷盤(pán)內(nèi)培養(yǎng)48h促

其產(chǎn)孢，然后用無(wú)菌水洗下孢子，用2層醫(yī)用紗布過(guò)濾配制成2×105個(gè)/mL的孢子懸浮液

備用。孢子液的濃度符合NY/T26464.1.1的規(guī)定。

5.6鑒別寄主的培育

5.6.1育苗土

將過(guò)篩的旱田土拌入水稻壯秧劑，混均后裝入塑料方盆中，鋪平壓實(shí)后澆水劃區(qū)。

5.6.2種子消毒及催芽

將鑒別品種種子嚴(yán)格粒選，用清水浸種24h后放入培養(yǎng)箱中催芽48h。

5.6.3播種

將催芽的種子播入事先準(zhǔn)備好的白塑料方盆內(nèi)，每個(gè)品種播1穴，每穴播10粒～15粒，

播種后表面覆蓋0.5cm厚的細(xì)土。然后支上鐵架，蓋上鐵絲網(wǎng)和塑料薄膜，防鼠、雀害。

5.6.4苗期管理

出苗立針達(dá)到70%～80%后，打開(kāi)塑料膜兩端通風(fēng)，接種前3d追施尿素，按30g/m2施

尿素1次，保證稻苗嫩綠健壯。

5.7接種和保濕

5.7.1接種時(shí)期和接種方法

秧苗長(zhǎng)到3～4葉時(shí)接種。接種當(dāng)天將準(zhǔn)備好的高粱粒培養(yǎng)基產(chǎn)生的新鮮分生孢子用蒸

餾水洗下，各菌種切忌混雜，各種玻璃器皿專(zhuān)用，用電動(dòng)吸引器和喉頭噴霧器接種，菌液用

量，每菌株25mL，對(duì)照噴清水。

5.7.2保濕

接種后即罩保濕罩和遮陽(yáng)苫布，在適溫25℃～27℃、高濕、黑暗條件下遮蔭、保濕

24h。

5.7.3潛育期管理

接種24h后，打開(kāi)保濕罩和遮陽(yáng)苫布，保持水分管理，防鼠害、防雀害和蟲(chóng)害。

5.8發(fā)病調(diào)查

5.8.1調(diào)查方法

接種7d～10d后調(diào)查，病斑分3級(jí)，按附錄A中規(guī)定的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)查記載。

5.8.2無(wú)效數(shù)據(jù)重復(fù)測(cè)定

若某菌株對(duì)某鑒別品種出現(xiàn)“M”反應(yīng)，或某菌株對(duì)所有鑒別品種無(wú)致病力，則不能定

類(lèi)群，需重做或不計(jì)結(jié)果。

6生理小種命名

全國(guó)稻瘟病菌生理小種鑒別寄主接種結(jié)果以全國(guó)稻瘟病菌生理小種聯(lián)合試驗(yàn)組（1980）

3

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方法進(jìn)行小種鑒定。

附錄A（資料性）病斑反應(yīng)型記載標(biāo)準(zhǔn)：

R（抗）：無(wú)病斑或葉片上產(chǎn)生針頭狀褐點(diǎn)或稍大褐點(diǎn)；

M（中抗）：葉片上產(chǎn)生圓至橢圓形病斑，中間灰白，邊緣褐色，病斑大小在兩條葉脈間；

S（感）：葉片上產(chǎn)生梭形大斑，中間灰白，邊緣黃褐色的慢性型病斑，或灰暗色的急性

型病斑，且病斑大小超過(guò)兩葉脈間；

以病斑反應(yīng)型為主要依據(jù)，目測(cè)法調(diào)查記載。若一株葉片有不同病斑，只記最高反應(yīng)型。