DB22T152018農(nóng)田土壤中甲基汞、乙基汞的測定高效液相色譜電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了農(nóng)田土壤中甲基汞和乙基汞的高效液相色譜電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)田土壤中甲基汞和乙基汞含量的測定。方法檢出限：甲基汞為0.05μg/kg，乙基汞為0.08μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3原理土壤樣品中的甲基汞和乙基汞經(jīng)提取、凈化后，采用高效液相色譜進(jìn)行分離，以電感耦合等離子體質(zhì)譜作為檢測器，通過測定汞的特征離子響應(yīng)值進(jìn)行定量分析。樣品中的甲基汞和乙基汞在C18反相色譜柱上實(shí)現(xiàn)分離，流動相為甲醇乙酸銨緩沖溶液，采用梯度洗脫程序。經(jīng)色譜分離后的汞形態(tài)化合物進(jìn)入電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，在高溫等離子體中原子化并離子化，通過質(zhì)譜檢測器測定m/z=202的汞離子信號強(qiáng)度，以外標(biāo)法定量。4試劑和材料除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682中一級水規(guī)格。4.1甲醇（CH3OH）：色譜純。4.2乙酸銨（CH3COONH4）：優(yōu)級純。4.3L半胱氨酸（C3H7NO2S）：純度≥98%。4.4鹽酸（HCl）：優(yōu)級純，ρ=1.19g/mL。4.5硝酸（HNO3）：優(yōu)級純，ρ=1.42g/mL。4.6氫氧化鈉（NaOH）：優(yōu)級純。4.7乙酸銨緩沖溶液（0.05mol/L）：稱取3.85g乙酸銨，溶于900mL水中，用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.5，轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，用水定容至標(biāo)線，混勻。4.8L半胱氨酸溶液（2%）：稱取2.0gL半胱氨酸，溶于100mL水中，現(xiàn)用現(xiàn)配。4.9鹽酸溶液（1+1）：取50mL鹽酸緩慢加入50mL水中，混勻。4.10硝酸溶液（1+1）：取50mL硝酸緩慢加入50mL水中，混勻。4.11氫氧化鈉溶液（1mol/L）：稱取4.0g氫氧化鈉，溶于100mL水中。4.12甲基汞標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱取0.1254g氯化甲基汞（CH3HgCl，純度≥98%），用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，混勻。于4℃避光保存，有效期6個(gè)月。4.13乙基汞標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱取0.1354g氯化乙基汞（C2H5HgCl，純度≥98%），用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，混勻。于4℃避光保存，有效期6個(gè)月。4.14甲基汞、乙基汞混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（10mg/L）：分別吸取1.0mL甲基汞和乙基汞標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，混勻。于4℃避光保存，有效期1個(gè)月。4.15甲基汞、乙基汞混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，用甲醇水（1:1，v/v）逐級稀釋至所需濃度，現(xiàn)用現(xiàn)配。4.16固相萃取柱：C18反相固相萃取柱，500mg/6mL，或相當(dāng)者。4.17微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)相系。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀（HPLCICPMS）：配有高效液相色譜泵、自動進(jìn)樣器、C18反相色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）和電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測器。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3超聲波清洗器：功率250W，頻率40kHz。5.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。5.5氮吹濃縮儀。5.6渦旋混合器。5.7恒溫水浴鍋。5.8pH計(jì)：精度±0.01。5.9固相萃取裝置。5.10聚丙烯離心管：50mL，具塞。5.11容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL、1000mL。5.12移液器：10μL、100μL、1000μL、5000μL。6樣品采集與保存7分析步驟7.1樣品前處理7.1.1樣品提?。悍Q取2.0g（精確至0.01g）土壤樣品于50mL聚丙烯離心管中，加入10mL鹽酸溶液（1+1），渦旋混合2min，超聲提取30min，期間每隔10min渦旋混合一次。提取結(jié)束后，以4000r/min離心10min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一潔凈離心管中。7.1.2樣品凈化：將上清液通過預(yù)先用5mL甲醇和5mL水活化過的C18固相萃取柱，控制流速為12mL/min。用5mL水淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液。用5mL甲醇洗脫目標(biāo)化合物，收集洗脫液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至標(biāo)線，混勻。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后，待HPLCICPMS分析。7.2儀器條件7.2.1液相色譜條件：流動相：A為甲醇，B為0.05mol/L乙酸銨緩沖溶液（含0.1%L半胱氨酸）梯度洗脫程序：05min，20%A；515min，20%80%A；1520min，80%A；2025min，80%20%A；2530min，20%A流速：1.0mL/min進(jìn)樣量：20μL柱溫：30℃7.2.2ICPMS條件：RF功率：1550W等離子體氣流速：15L/min輔助氣流速：0.9L/min載氣流速：0.95L/min采樣深度：8.0mm測定同位素：202Hg積分時(shí)間：1.0s采樣模式：時(shí)間分辨分析（TRA）7.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別吸取適量甲基汞、乙基汞混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用甲醇水（1:1，v/v）稀釋成濃度分別為0.1μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。按7.2規(guī)定的儀器條件進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.4樣品測定8結(jié)果計(jì)算樣品中甲基汞和乙基汞的含量按公式（1）計(jì)算：X=(C×V)/m式中：X——樣品中甲基汞或乙基汞的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的甲基汞或乙基汞的濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——樣品定容體積，單位為毫升（mL）；m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。9精密度和準(zhǔn)確度9.1精密度：在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。9.2準(zhǔn)確度：對土壤樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，甲基汞的加標(biāo)回收率為85%110%，乙基汞的加標(biāo)回收率為80%105%。10質(zhì)量保證與質(zhì)量控制10.1空白試驗(yàn)：每批樣品分析時(shí)，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)，空白值應(yīng)低于方法檢出限。10.2標(biāo)準(zhǔn)曲線：每批樣品分析時(shí)，應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.999。10.3平行樣：每批樣品應(yīng)至少測定10%的平行雙樣，平行雙樣測定結(jié)果的相對偏差應(yīng)≤20%。10.4加標(biāo)回收：每批樣品應(yīng)至少測定10%的加標(biāo)樣品，加標(biāo)回收率應(yīng)在80%120%之間。10.5中間濃度校準(zhǔn)：每測定10個(gè)樣品后，應(yīng)測定一個(gè)中間濃度校準(zhǔn)點(diǎn)，其測定值與標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)值的相對偏差應(yīng)≤10%。11廢物處理實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的廢液應(yīng)集中收集，按照《實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)廢物污染防治技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行處理，不得隨意排放。12注意事項(xiàng)12.1汞及其化合物具有高毒性，實(shí)驗(yàn)