中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范JJF2342—2025自動(dòng)核酸合成儀校準(zhǔn)規(guī)范CalibrationSpecificationforAutomaticNucleicAcidSynthesizers2025?11?05發(fā)布 2026?05?05實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局 發(fā)布JJF2342JJF2342—2025自動(dòng)核酸合成儀校準(zhǔn)規(guī)范CalibrationSpecificationforAutomaticNucleicAcidSynthesizers

JJF2342—2025歸 口 單 位：全國(guó)生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)主要起草單位：上海市計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究院有限公司中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院參加起草單位：廣東省計(jì)量科學(xué)研究院中國(guó)科學(xué)院上海高等研究院江蘇碩世生物科技股份有限公司百力格生物科技（上海）股份有限公司本規(guī)范委托全國(guó)生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)負(fù)責(zé)解釋本規(guī)范主要起草人：梁文（上海市計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究院有限公司）羅超（上海市計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究院有限公司）張永卓（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）林正皓（上海市計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究院有限公司）參加起草人：黃彥捷（廣東省計(jì)量科學(xué)研究院）王麗華（中國(guó)科學(xué)院上海高等研究院）王河清（江蘇碩世生物科技股份有限公司）JJF2342JJF2342—2025ⅠⅠ目 錄引言 1 范圍 （1）2 引用文件 （1）3 概述 （1）計(jì)量特性 （1）校準(zhǔn)條件 （2）環(huán)境條件 （2）校準(zhǔn)設(shè)備及試劑 （2）校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法 （2）壓力示值誤差 （2）壓力泄漏速率適用于合成腔有保壓功能的合成） （2）進(jìn)樣體積誤差 （3）進(jìn)樣體積重復(fù)性 （3）目標(biāo)序列核酸分子量相對(duì)誤差 （3）目標(biāo)序列核酸純度 （4）測(cè)試結(jié)果表達(dá) （4）復(fù)校時(shí)間間隔 （4）附錄A 不同溫度下乙腈的密度 （5）附錄B 目標(biāo)序列核酸純度測(cè)定的液相色譜條件示例 （6）附錄C 校準(zhǔn)原始記錄參考格式 （7）附錄D 校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)）參考格式 （9）附錄E 壓力示值誤差的不確定度評(píng)定示例 附錄F 進(jìn)樣體積誤差的不確定度評(píng)定示例 JJF2342JJF2342—2025引 言JJF1071—2010《國(guó)家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫(xiě)規(guī)則》、JJF1001—2011《通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)JJF1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》共同構(gòu)成支撐本規(guī)范制定工作的基礎(chǔ)性系列規(guī)范。本規(guī)范參考了GB/T6682《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》和GB/T34797《核酸引物探針質(zhì)量技術(shù)要求》等相關(guān)技術(shù)文件。本規(guī)范為首次發(fā)布。ⅡJJF2342JJF2342—202511自動(dòng)核酸合成儀校準(zhǔn)規(guī)范范圍本規(guī)范適用于基于固相亞磷酰胺法原理的自動(dòng)核酸合成儀的校準(zhǔn)。引用文件本規(guī)范引用了下列文件：GB/T6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T34797 核酸引物探針質(zhì)量技術(shù)要求凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本規(guī)范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本規(guī)范。概述自動(dòng)核酸合成儀以下簡(jiǎn)稱合成儀）是基于固相亞磷酰胺法原理的DNA或RNA類核酸自動(dòng)化合成儀器，由反應(yīng)液遞送系統(tǒng)、反應(yīng)合成腔和控制系統(tǒng)三部分組成。按照計(jì)算機(jī)控制程序，A、T、C、G不同堿基經(jīng)過(guò)脫保護(hù)、偶聯(lián)、蓋帽、氧化四個(gè)步驟后被依次添加到固體支持物上通常是可控孔徑玻璃，最終核酸從固相載體上切下，并去除保護(hù)基，得到目標(biāo)核酸。在核酸合成過(guò)程中，合成腔和管道的壓力控制、試劑的進(jìn)樣體積等量化指標(biāo)對(duì)最終核酸合成質(zhì)量起著關(guān)鍵作用。核酸的純度和相對(duì)分子質(zhì)量以下簡(jiǎn)稱分子量）相對(duì)誤差是評(píng)估合成質(zhì)量最重要的指標(biāo)。計(jì)量特性合成儀的計(jì)量特性，如表1所示。表1 合成儀的計(jì)量特性計(jì)量特性技術(shù)指標(biāo)壓力示值誤差±4 FS壓力泄漏速率≤0.5kPa/min進(jìn)樣體積誤差±4μL進(jìn)樣體積重復(fù)性≤2目標(biāo)序列核酸分子量相對(duì)誤差±0.05目標(biāo)序列核酸純度≥75注：以上技術(shù)指標(biāo)不用于合格判別，僅供參考。JJF2342JJF2342—2025校準(zhǔn)條件環(huán)境條件5.1.1 溫度：℃。5.1.2 相對(duì)濕度：≤65 。校準(zhǔn)設(shè)備及試劑壓力標(biāo)準(zhǔn)器：測(cè)量范圍大于或等于被檢合成儀壓力表測(cè)量范圍，最大允許誤差不大于±0.5kPa。通常要求具有加壓功能，如果沒(méi)有加壓功能，需要配置壓力泵輔助。分析天平：天平準(zhǔn)確度為級(jí)，分度值不大于0.1mg。秒表：最小分度值不大于0.1s。5.2.4 溫度計(jì)℃，分度值0.1℃液相色譜儀：須配有紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器，定性重復(fù)性≤1.0，定量重復(fù)性≤3.0。質(zhì)譜儀：質(zhì)量準(zhǔn)確性≤0.5u。其他輔助設(shè)備及配套試劑：輔助設(shè)備：三通及導(dǎo)壓管等；配套試劑：乙腈、甲醇、二異丙基乙胺、六氟異丙醇，均為分析純。校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法壓力示值誤差壓力標(biāo)準(zhǔn)器通過(guò)導(dǎo)壓管和合成儀的壓力儀表相連，若壓力標(biāo)準(zhǔn)器不含加壓功能，需要配備壓力泵等壓力發(fā)生器。在合成儀壓力儀表規(guī)定的測(cè)量范圍內(nèi)或工作壓力點(diǎn)附近3個(gè)示值誤差測(cè)量點(diǎn)。測(cè)量時(shí)，由零點(diǎn)均勻緩慢加壓至所選的式計(jì)算壓力示值誤差。?p=p-ps 式中：?p——壓力示值誤差，kPa；p——待測(cè)壓力儀表示值，kPa；ps——壓力標(biāo)準(zhǔn)值，kPa。壓力泄漏速率適用于合成腔有保壓功能的合成儀）壓力標(biāo)準(zhǔn)器通過(guò)導(dǎo)壓管和合成腔相連，對(duì)合成腔充壓，使其壓力達(dá)到合成儀正常工作時(shí)的壓力，停止充壓，持續(xù)1min，通過(guò)觀察壓力標(biāo)準(zhǔn)器的壓力變化量來(lái)評(píng)價(jià)合成腔的壓力泄漏速率S。按公式（2）計(jì)算壓力泄漏速率S。2JJF2342JJF2342—2025=S δ=t式中：S——壓力泄漏速率，kPa/min；

（2）δ——1min合成腔壓力的變化量，kPa；t——時(shí)間，此處為1min。進(jìn)樣體積誤差將儀器各部分連接好，以乙腈的進(jìn)樣管道為例，設(shè)定進(jìn)樣體積為200μL器，在進(jìn)樣管道出口用已稱重的潔凈離心管收集乙腈，收集完成之后，采用分析天平稱重，根據(jù)實(shí)驗(yàn)溫度及附錄A不同溫度下乙腈的密度將乙腈的質(zhì)量換算成體積，重復(fù)6次。根據(jù)公式和公式計(jì)算進(jìn)樣體積誤差?V。=V m2-m1=i ρ

（3）t= iV 1n= ini=1

（4）式中：

?V=V0-V ）Vi——第i次進(jìn)樣體積測(cè)量值，μL；m2——第i次測(cè)量離心管和乙腈的質(zhì)量，mg；m1——第i次測(cè)量離心管的質(zhì)量，mg；ρt ——實(shí)驗(yàn)溫度下乙腈的密度，mg/μL，不同溫度下乙腈的密度參見(jiàn)附錄A；V0——進(jìn)樣體積設(shè)定值，此處為200μL；V —6次進(jìn)樣體積的算術(shù)平均值；n ——重復(fù)測(cè)量次數(shù)，此處為6；?V——進(jìn)樣體積誤差。進(jìn)樣體積重復(fù)性6i=1(i6i=1(iV-V)25式中：

RSD=

V ×100 RSD——相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差， 。目標(biāo)序列核酸分子量相對(duì)誤差合成儀合成核酸序列ACACACACACACACACACACACACAT，使用質(zhì)譜儀測(cè)3JJF2342JJF2342—2025定合成核酸的分子量。宜先通過(guò)色譜分離后再進(jìn)入質(zhì)譜檢測(cè)，質(zhì)譜推薦采用電噴霧電離，負(fù)離子模式，具體實(shí)驗(yàn)條件參見(jiàn)GB/T34797附錄B，其他能實(shí)現(xiàn)同等分析能力和質(zhì)量分辨率的質(zhì)譜儀或質(zhì)譜檢測(cè)條件也可使用。本規(guī)范指定的核酸合成序列分子量為7784.26。按公式（7）計(jì)算合成的目標(biāo)序列核酸分子量相對(duì)誤差。7784.26ME=OM-7784.26×100 7784.26式中：ME——相對(duì)誤差；OM——檢測(cè)值。目標(biāo)序列核酸純度采用液相色譜儀對(duì)6.5中合成的核酸進(jìn)行純度測(cè)定，具體實(shí)驗(yàn)條件參見(jiàn)附錄B，計(jì)算目標(biāo)序列核酸的峰面積占合成產(chǎn)物總峰面積百分比，得出合成的目標(biāo)序列核酸純度。測(cè)試結(jié)果表達(dá)測(cè)試記錄應(yīng)盡可能詳盡地記載測(cè)量數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果，推薦的測(cè)試記錄格式見(jiàn)附錄C經(jīng)測(cè)試的儀器應(yīng)出具校準(zhǔn)證書(shū)，校準(zhǔn)證書(shū)應(yīng)符合JJF1071—20105.12的要求，校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)頁(yè)格式見(jiàn)附錄D。示值誤差的測(cè)量不確定度應(yīng)按JJF1059.1的要求評(píng)定，壓力示值誤差的不確定度評(píng)定示例見(jiàn)附錄E，進(jìn)樣體積誤差的不確定度評(píng)定示例見(jiàn)附錄F。復(fù)校時(shí)間間隔建議復(fù)校時(shí)間間隔不超過(guò)1年。由于復(fù)校時(shí)間間隔的長(zhǎng)短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等諸多因素所決定的，因此送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主確定復(fù)校時(shí)間間隔。4JJF2342JJF2342—2025附錄A不同溫度下乙腈的密度不同溫度下1kg乙腈的體積按公式（A.1）計(jì)算：V20=Vt[1+α(20-t)]

（A.1）式中：V20——20℃時(shí)1kg乙腈的體積，L；Vt——t溫度條件下，1kg乙腈體積，L；α —乙腈的體積膨脹系數(shù)，0.00137/℃可推導(dǎo)出公式mV20=Vt=ρt

=1+α(20-t

（A.2）式中：

Vt m ρ20V20ρ20——20℃時(shí)乙腈的密度，0.7822g/cm3；ρt——t溫度條件下乙腈的密度，g/cm3。因此，不同溫度下乙腈的密度按公式（A.3）計(jì)算：ρt=ρ20-k(t-20)

（A.3）式中：k—乙腈的溫度校準(zhǔn)系數(shù)，0.001072g/cm℃-1。5JJF2342JJF2342—2025附錄B目標(biāo)序列核酸純度測(cè)定的液相色譜條件示例采用超高效液相色譜（UPLC）進(jìn)行純度檢測(cè)，條件如下：色譜柱：經(jīng)過(guò)鈍化后適合核酸分析的C18柱，1.7μm，2.1mm×100mm；進(jìn)樣量：60μg/mL，進(jìn)樣體積：10μL；流動(dòng)相A：0.075 二異丙基乙胺1.5 六氟異丙醇動(dòng)相B：甲醇；4）柱溫：75℃；5）梯度洗脫：洗脫時(shí)間15min；具體洗脫梯度設(shè)置見(jiàn)表B.1。表B.1 核酸純度測(cè)定的液相色譜洗脫梯度時(shí)間min溶劑A溶劑B流速mL/min0.085150.3182180.31075250.31110900.312.485150.312.585150.31585150.3注：色譜柱可采用等效的C18柱。6JJF2342JJF2342—2025附錄C校準(zhǔn)原始記錄參考格式送校單位儀器名稱儀器型號(hào)儀器編號(hào)制造廠商檢測(cè)日期環(huán)境溫度相對(duì)濕度校準(zhǔn)人核驗(yàn)人技術(shù)依據(jù)主要測(cè)量設(shè)備名稱/型號(hào)測(cè)量范圍不確定度/準(zhǔn)確度等級(jí)/最大允許誤差檢定/校準(zhǔn)證書(shū)編號(hào)/有效期壓力示值誤差壓力儀表名稱壓力標(biāo)準(zhǔn)值/kPa壓力儀表示值/kPa示值誤差/kPa擴(kuò)展不確定度/kPa（k=2）壓力泄漏速率壓力初始值kPa壓力最終值kPa壓力變化量kPa壓力泄漏速率kPa/min進(jìn)樣體積誤差和重復(fù)性乙腈密度： mg/μL校準(zhǔn)項(xiàng)目檢測(cè)1檢測(cè)2檢測(cè)3檢測(cè)4檢測(cè)5檢測(cè)6質(zhì)量m2 mg質(zhì)量m1 mg體積Vi μL進(jìn)樣體積平均值/μL：進(jìn)樣體積誤差/μL：進(jìn)樣體積誤差的擴(kuò)展不確定度/μL（k=2）：進(jìn)樣體積重復(fù)性RSD/ ：7JJF2342JJF2342—2025目標(biāo)序列核酸分子量相對(duì)誤差標(biāo)準(zhǔn)值實(shí)測(cè)值相對(duì)誤差/峰面積百分比/峰面積百分比/8JJF2342JJF2342—2025附錄D校準(zhǔn)證書(shū)（內(nèi)頁(yè)）參考格式校準(zhǔn)結(jié)果壓力示值誤差壓力表名稱壓力標(biāo)準(zhǔn)值/kPa示值誤差/kPa擴(kuò)展不確定度/kPa壓力泄漏速率/壓力泄漏速率/（kPa/min）：進(jìn)樣體積誤差和重復(fù)性進(jìn)樣體積誤差/μL：進(jìn)樣體積誤差的擴(kuò)展不確定度/μL：進(jìn)樣體積重復(fù)性/ ：相對(duì)誤差/ ：相對(duì)誤差/ ：目標(biāo)序列核酸純度純度純度/ ：以下空白。第×頁(yè) 共×頁(yè)9JJF2342JJF2342—2025附錄E壓力示值誤差的不確定度評(píng)定示例測(cè)量模型式中：Δp——壓力示值誤差，kPa；

Δp=p-psp——待測(cè)壓力儀表示值，kPa；ps——壓力標(biāo)準(zhǔn)器示值，kPa。不確定度來(lái)源壓力標(biāo)準(zhǔn)器引入的不確定度；被測(cè)壓力儀表估讀引入的不確定度。不確定度的計(jì)算壓力標(biāo)準(zhǔn)器引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(ps)根據(jù)壓力標(biāo)準(zhǔn)器的檢定證書(shū)，準(zhǔn)確度等級(jí)為0.05級(jí)的壓力標(biāo)準(zhǔn)器，量程范圍的最大允許誤差為0.35kPa，假設(shè)在量程范圍內(nèi)壓力標(biāo)準(zhǔn)器的壓力值符合均勻分布，3ups0.35kPa÷ 0.21kPa。3被測(cè)壓力儀表估讀引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(p)5被測(cè)壓力表的最小分度值為0.69kPa，up0.69kPa1÷5

3≈0.08kPa。3標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表見(jiàn)表E.1。表E.1 標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)不確定度符號(hào)不確定度來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)不確定度/kPau(ps)壓力標(biāo)準(zhǔn)器0.21u(p)被測(cè)儀器估讀0.08合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc(Δp)= u2(ps)+u2(p)。擴(kuò)展不確定度取包含因子k=2，則儀器示值誤差的擴(kuò)展不確定度為：U(Δp)=k×u(Δp)=0.5kPa10JJF2342JJF2342—2025附錄F進(jìn)樣體積誤差的不確定度評(píng)定示例測(cè)量模型式中：

?V=200-m2-m1ρtρ?V——進(jìn)樣體積誤差，μL；m2——離心管和乙腈的質(zhì)量，mg；m1——離心管的質(zhì)量，mg；ρt ——實(shí)驗(yàn)溫度下乙腈的密度，mg/μL。不確定度來(lái)源進(jìn)樣體積測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度；天平稱量準(zhǔn)確性引入的不確定度；測(cè)量過(guò)程中乙腈密度隨溫度變化引入的不確定度。不確定度的計(jì)算進(jìn)樣體積測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(V)設(shè)定進(jìn)樣體積為200μL，進(jìn)樣體積重復(fù)測(cè)量6次，測(cè)得值如下（單位：μL）：199.9198.5198.9192.5199.0191.2計(jì)算測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(V=1.55μL。n