《臨床分子診斷學(xué)》期末考試試卷（附答案）一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.以下哪種技術(shù)不屬于核酸分子雜交技術(shù)（）A.Southern印跡雜交B.Northern印跡雜交C.Western印跡雜交D.原位雜交2.PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供模板B.提供3'OH末端，引導(dǎo)DNA合成C.提供能量D.激活DNA聚合酶3.下列關(guān)于基因芯片技術(shù)的描述，錯(cuò)誤的是（）A.可以同時(shí)檢測大量基因的表達(dá)情況B.只能用于基因表達(dá)譜的分析C.其原理是核酸分子雜交D.可用于疾病的診斷和預(yù)后評估4.線粒體DNA突變與下列哪種疾病關(guān)系最密切（）A.腫瘤B.遺傳性代謝病C.神經(jīng)系統(tǒng)疾病D.心血管疾病5.FISH技術(shù)中，熒光標(biāo)記的是（）A.染色體B.蛋白質(zhì)C.核酸探針D.抗體6.SNP是指（）A.單核苷酸多態(tài)性B.短串聯(lián)重復(fù)序列C.插入/缺失突變D.拷貝數(shù)變異7.用于檢測RNA表達(dá)水平的技術(shù)是（）A.Southern印跡雜交B.Northern印跡雜交C.Western印跡雜交D.免疫組織化學(xué)8.下列關(guān)于基因治療的描述，正確的是（）A.只適用于單基因遺傳病B.可以通過導(dǎo)入正?；騺砑m正缺陷基因C.目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床D.不會(huì)引發(fā)倫理問題9.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)中，常用的熒光標(biāo)記方法不包括（）A.SYBRGreen熒光染料法B.TaqMan探針法C.MolecularBeacon探針法D.免疫熒光法10.腫瘤的分子診斷中，檢測腫瘤標(biāo)志物的主要目的是（）A.確定腫瘤的組織來源B.早期診斷腫瘤C.評估腫瘤的預(yù)后D.以上都是11.以下哪種技術(shù)可用于基因分型（）A.RFLPB.PCRC.DNA測序D.以上都是12.下列關(guān)于miRNA的描述，錯(cuò)誤的是（）A.是一類非編碼RNAB.長度一般為2024個(gè)核苷酸C.主要通過與靶mRNA的互補(bǔ)配對來調(diào)控基因表達(dá)D.只在植物中存在13.用于蛋白質(zhì)檢測的技術(shù)是（）A.Southern印跡雜交B.Northern印跡雜交C.Western印跡雜交D.原位雜交14.基因診斷的材料不包括（）A.血液B.尿液C.痰液D.空氣15.下列關(guān)于二代測序技術(shù)的特點(diǎn)，錯(cuò)誤的是（）A.通量高B.成本低C.測序讀長較長D.可以同時(shí)對大量樣本進(jìn)行測序二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共15分）1.臨床分子診斷學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.疾病的診斷B.疾病的治療監(jiān)測C.疾病的預(yù)后評估D.藥物基因組學(xué)E.產(chǎn)前診斷2.核酸提取的基本步驟包括（）A.細(xì)胞裂解B.核酸與蛋白質(zhì)分離C.核酸沉淀D.核酸洗滌E.核酸溶解3.基因編輯技術(shù)包括（）A.ZFNsB.TALENsC.CRISPR/Cas9D.同源重組E.RNAi4.常見的基因擴(kuò)增技術(shù)有（）A.PCRB.LCRC.NASBAD.TMAE.SDA5.腫瘤的分子改變包括（）A.基因突變B.基因擴(kuò)增C.基因重排D.甲基化異常E.染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常三、名詞解釋（每題5分，共20分）1.分子診斷2.基因芯片技術(shù)3.FISH4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR四、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理和主要步驟。2.簡述基因診斷的常用技術(shù)方法及其應(yīng)用。五、論述題（15分）論述臨床分子診斷學(xué)在腫瘤診斷和治療中的應(yīng)用及意義。答案一、單項(xiàng)選擇題1.C。Western印跡雜交是用于蛋白質(zhì)檢測的技術(shù)，不屬于核酸分子雜交技術(shù)；Southern印跡雜交用于DNA檢測，Northern印跡雜交用于RNA檢測，原位雜交可在組織或細(xì)胞原位進(jìn)行核酸雜交。2.B。引物為DNA合成提供3'OH末端，引導(dǎo)DNA聚合酶合成新的DNA鏈，模板是待擴(kuò)增的DNA分子，引物不提供能量，也不激活DNA聚合酶。3.B?；蛐酒夹g(shù)不僅可用于基因表達(dá)譜分析，還可用于基因突變檢測、基因分型等，其原理是核酸分子雜交，可用于疾病的診斷和預(yù)后評估。4.C。線粒體DNA突變與神經(jīng)系統(tǒng)疾病關(guān)系密切，因?yàn)樯窠?jīng)系統(tǒng)對能量需求高，線粒體功能異常易導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)病變；腫瘤、遺傳性代謝病、心血管疾病也可能與線粒體DNA有關(guān)，但相對而言神經(jīng)系統(tǒng)疾病關(guān)聯(lián)性更強(qiáng)。5.C。FISH技術(shù)即熒光原位雜交技術(shù)，是用熒光標(biāo)記的核酸探針與染色體或細(xì)胞內(nèi)的核酸進(jìn)行雜交。6.A。SNP是單核苷酸多態(tài)性，是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性；短串聯(lián)重復(fù)序列是STR，插入/缺失突變是Indel，拷貝數(shù)變異是CNV。7.B。Northern印跡雜交用于檢測RNA表達(dá)水平；Southern印跡雜交檢測DNA，Western印跡雜交檢測蛋白質(zhì)，免疫組織化學(xué)用于檢測組織或細(xì)胞中的抗原。8.B?；蛑委熆赏ㄟ^導(dǎo)入正?；騺砑m正缺陷基因，不僅適用于單基因遺傳病，也可用于多基因病等；目前基因治療還處于研究和臨床試驗(yàn)階段，未廣泛應(yīng)用于臨床，且會(huì)引發(fā)倫理問題。9.D。免疫熒光法主要用于蛋白質(zhì)或細(xì)胞表面抗原的檢測，不是實(shí)時(shí)熒光定量PCR常用的熒光標(biāo)記方法；SYBRGreen熒光染料法、TaqMan探針法、MolecularBeacon探針法是實(shí)時(shí)熒光定量PCR常用的標(biāo)記方法。10.D。檢測腫瘤標(biāo)志物可用于早期診斷腫瘤、確定腫瘤的組織來源、評估腫瘤的預(yù)后等。11.D。RFLP（限制性片段長度多態(tài)性）、PCR（結(jié)合特定引物和方法）、DNA測序都可用于基因分型。12.D。miRNA是一類非編碼RNA，長度一般為2024個(gè)核苷酸，主要通過與靶mRNA的互補(bǔ)配對來調(diào)控基因表達(dá)，在動(dòng)植物等多種生物中都存在。13.C。Western印跡雜交用于蛋白質(zhì)檢測；Southern印跡雜交檢測DNA，Northern印跡雜交檢測RNA，原位雜交檢測核酸。14.D?；蛟\斷的材料可以是血液、尿液、痰液等含有人體細(xì)胞或核酸的樣本，空氣不能作為基因診斷的材料。15.C。二代測序技術(shù)通量高、成本低、可以同時(shí)對大量樣本進(jìn)行測序，但測序讀長相對較短。二、多項(xiàng)選擇題1.ABCDE。臨床分子診斷學(xué)在疾病的診斷、治療監(jiān)測、預(yù)后評估、藥物基因組學(xué)以及產(chǎn)前診斷等領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。2.ABCDE。核酸提取的基本步驟包括細(xì)胞裂解使核酸釋放出來，然后將核酸與蛋白質(zhì)分離，通過沉淀使核酸從溶液中析出，洗滌去除雜質(zhì)，最后將核酸溶解。3.ABC。ZFNs（鋅指核酸酶）、TALENs（轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶）、CRISPR/Cas9是常見的基因編輯技術(shù)；同源重組是一種自然的基因重組方式，RNAi是RNA干擾技術(shù)，主要用于基因表達(dá)的沉默，不屬于基因編輯技術(shù)。4.ABCDE。PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）、LCR（連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）、NASBA（核酸序列依賴性擴(kuò)增）、TMA（轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增）、SDA（鏈置換擴(kuò)增）都是常見的基因擴(kuò)增技術(shù)。5.ABCDE。腫瘤的分子改變包括基因突變、基因擴(kuò)增、基因重排、甲基化異常以及染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常等。三、名詞解釋1.分子診斷：是以核酸和蛋白質(zhì)為診斷材料，通過分析基因的結(jié)構(gòu)、表達(dá)水平及其產(chǎn)物的功能，為疾病的診斷、治療、預(yù)防和預(yù)后評估等提供信息和決策依據(jù)的一門診斷技術(shù)。它涉及到基因克隆、核酸測序、核酸雜交、基因擴(kuò)增等多種技術(shù)。2.基因芯片技術(shù)：是指將大量已知序列的核酸片段（基因探針）有序地固定在固相支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品核酸進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號(hào)的強(qiáng)度及分布來分析樣品中核酸的數(shù)量和序列信息。該技術(shù)可同時(shí)對大量基因的表達(dá)水平、基因突變等進(jìn)行檢測，具有高通量、高靈敏度等特點(diǎn)。3.FISH：即熒光原位雜交技術(shù)，是一種利用熒光標(biāo)記的核酸探針與染色體或細(xì)胞內(nèi)的核酸進(jìn)行雜交，在熒光顯微鏡下直接觀察核酸在染色體或細(xì)胞中的位置和分布的技術(shù)。它可以用于染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常的檢測、基因定位等。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR：是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。常用的熒光標(biāo)記方法有SYBRGreen熒光染料法、TaqMan探針法等，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、可定量等優(yōu)點(diǎn)。四、簡答題1.PCR技術(shù)的基本原理：PCR是一種體外酶促合成特異DNA片段的方法，其原理類似于DNA的天然復(fù)制過程。它以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5'端和3'端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。主要步驟：變性：將反應(yīng)體系加熱至9495℃，使雙鏈DNA模板解鏈成為單鏈，為引物結(jié)合提供模板。退火：將溫度降至引物的退火溫度（一般為5065℃），引物與單鏈模板的互補(bǔ)序列特異性結(jié)合。延伸：將溫度升高至72℃，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，從引物的3'OH端開始，按照堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。重復(fù)變性、退火、延伸步驟2535個(gè)循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴(kuò)增。2.基因診斷的常用技術(shù)方法及其應(yīng)用：核酸分子雜交技術(shù)：Southern印跡雜交：用于檢測DNA中特定基因的存在、拷貝數(shù)及基因的結(jié)構(gòu)變化等，可用于基因缺失、插入等突變的檢測，如地中海貧血的基因診斷。Northern印跡雜交：用于檢測RNA的表達(dá)水平和大小，可研究基因的轉(zhuǎn)錄情況，如腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)分析。原位雜交：可在組織或細(xì)胞原位檢測核酸的存在和分布，用于病毒感染的組織定位、基因表達(dá)的細(xì)胞定位等。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)：普通PCR：用于擴(kuò)增特定的DNA片段，可用于病原體的檢測、基因突變的篩查等，如乙肝病毒、結(jié)核桿菌的檢測。實(shí)時(shí)熒光定量PCR：可對樣本中的核酸進(jìn)行定量分析，用于病原體載量的測定、基因表達(dá)水平的定量等，如艾滋病病毒載量的檢測。DNA測序技術(shù)：Sanger測序：是傳統(tǒng)的測序方法，可準(zhǔn)確測定DNA序列，用于基因突變的確診，如單基因遺傳病的致病基因測序。二代測序技術(shù)：具有高通量、低成本等特點(diǎn)，可同時(shí)對大量基因進(jìn)行測序，用于全基因組測序、轉(zhuǎn)錄組測序等，在腫瘤的分子分型、遺傳病的基因診斷等方面有廣泛應(yīng)用?；蛐酒夹g(shù)：可同時(shí)檢測大量基因的表達(dá)水平、基因突變等，用于疾病的診斷、預(yù)后評估、藥物基因組學(xué)研究等，如腫瘤的基因表達(dá)譜分析、藥物敏感性檢測。蛋白質(zhì)檢測技術(shù)：Western印跡雜交：用于檢測特定蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和分子量，可研究基因的表達(dá)產(chǎn)物，如腫瘤標(biāo)志物的檢測。免疫組織化學(xué)：用于檢測組織或細(xì)胞中的抗原，可對腫瘤進(jìn)行病理診斷和分型，如乳腺癌中雌激素受體、孕激素受體的檢測。五、論述題臨床分子診斷學(xué)在腫瘤診斷和治療中的應(yīng)用及意義如下：應(yīng)用1.腫瘤的早期診斷腫瘤標(biāo)志物檢測：通過檢測血液或其他體液中的腫瘤標(biāo)志物，如甲胎蛋白（AFP）用于肝癌的早期篩查，癌胚抗原（CEA）在多種惡性腫瘤中可升高，可作為腫瘤的輔助診斷指標(biāo)?；蛲蛔儥z測：檢測特定腫瘤相關(guān)基因的突變，如肺癌中的EGFR基因突變檢測，有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的分子改變，實(shí)現(xiàn)腫瘤的早期診斷。微小殘留病檢測：采用分子診斷技術(shù)可檢測腫瘤治療后體內(nèi)殘留的少量腫瘤細(xì)胞，如白血病患者化療后通過檢測特定的融合基因來判斷是否存在微小殘留病。2.腫瘤的分子分型基因表達(dá)譜分析：利用基因芯片技術(shù)或二代測序技術(shù)分析腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)譜，將腫瘤分為不同的分子亞型，如乳腺癌可分為LuminalA型、LuminalB型、HER2過表達(dá)型和基底樣型等，不同亞型的治療方案和預(yù)后不同?；蛲蛔儥z測：檢測腫瘤相關(guān)基因的突變狀態(tài)，如結(jié)直腸癌中的KRAS基因突變檢測，可指導(dǎo)西妥昔單抗等靶向藥物的使用。3.腫瘤的預(yù)后評估基因表達(dá)水平檢測：某些基因的表達(dá)水平與腫瘤的預(yù)后相關(guān)，如乳腺癌中ER、PR的表達(dá)水平與患者的預(yù)后和內(nèi)分泌治療反應(yīng)有關(guān)；Ki67抗原的表達(dá)水平可反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性，與預(yù)后不良相關(guān)。分子標(biāo)志物檢測：檢測某些分子標(biāo)志物，如循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）的含量和基因突變情況，可用于評估腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)測患者的預(yù)后。4.腫瘤的治療監(jiān)測治療效果評估：通過檢測腫瘤標(biāo)志物的變化、腫瘤細(xì)胞的基因突