ICS65.020.20

B05

DB1408

山西省運(yùn)城市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1408/T048—2023

蘋(píng)果脫毒組培苗繁育技術(shù)規(guī)程

2023-07-15發(fā)布2023-08-15實(shí)施

運(yùn)城市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB1408/T048—2023

目次

前言.....................................................................................................................................................................II

1范圍...................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件...............................................................................................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義.......................................................................................................................................................1

3.1脫毒...........................................................................................................................................................1

3.2葉原基.......................................................................................................................................................1

3.3莖尖...........................................................................................................................................................1

3.4莖尖分生組織...........................................................................................................................................1

3.5離體培養(yǎng)...................................................................................................................................................1

3.6外植體.......................................................................................................................................................2

3.7無(wú)菌苗.......................................................................................................................................................2

4脫毒材料的選取...............................................................................................................................................2

4.1植株初選...................................................................................................................................................2

4.2材料選擇...................................................................................................................................................2

5脫毒與培養(yǎng).......................................................................................................................................................2

5.1外植體消毒...............................................................................................................................................2

5.2離體培養(yǎng)無(wú)菌苗.......................................................................................................................................2

5.3莖尖剝離與接種.......................................................................................................................................3

5.4莖尖培養(yǎng)...................................................................................................................................................3

6病毒檢測(cè)...........................................................................................................................................................3

7組培苗擴(kuò)繁.......................................................................................................................................................3

7.1培養(yǎng)基制備...............................................................................................................................................3

7.2滅菌...........................................................................................................................................................3

7.3擴(kuò)繁...........................................................................................................................................................4

7.4瓶苗培養(yǎng)...................................................................................................................................................4

7.5生根培養(yǎng)...................................................................................................................................................4

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)

定起草。

本文件由運(yùn)城市果業(yè)發(fā)展中心提出、組織實(shí)施和監(jiān)督檢查。

運(yùn)城市市場(chǎng)監(jiān)督管理局對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的組織實(shí)施情況進(jìn)行監(jiān)督檢查。

本文件由運(yùn)城市果業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本文件起草單位：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)棉花研究所、運(yùn)城市果業(yè)發(fā)展中心、太原市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心、

臨猗縣果業(yè)發(fā)展中心。

本文件主要起草人：張健、王璐、潘琪、梁哲軍、袁嘉瑋、田時(shí)敏、李花、孫建春、景香平、暢元

生。

II

DB1408/T048—2023

蘋(píng)果脫毒組培苗繁育技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了脫毒材料的選取、脫毒與培養(yǎng)、病毒檢測(cè)及組培苗擴(kuò)繁等技術(shù)要求。

本文件適用于蘋(píng)果苗木的脫毒和脫毒苗的組培快繁。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T2281蘋(píng)果病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

脫毒

應(yīng)用莖尖分生組織培養(yǎng)技術(shù)，脫去潛隱性病毒，種類包括：蘋(píng)果莖溝病毒（ASGV）、蘋(píng)果莖痘病毒

(ASPV)和蘋(píng)果褪綠葉斑病毒(ACLSV)。

3.2

葉原基

在莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)的基部形成的突起。

3.3

莖尖

芽頂端部分（0.1mm～1.0mm），包括分生組織及芽原基和正在生長(zhǎng)發(fā)育的葉原基。

3.4

莖尖分生組織

莖部位具有持續(xù)或周期性分裂能力的細(xì)胞群。

3.5

離體培養(yǎng)

從植物體分離出符合需要的器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控制條件下進(jìn)

行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株。

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3.6

外植體

從生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的植株上取下作離體培養(yǎng)材料的器官或組織的片段。

3.7

無(wú)菌苗

在無(wú)菌條件下，將蘋(píng)果枝條莖段按照外植體消毒流程進(jìn)行嚴(yán)格消毒后，接種在MS培養(yǎng)基上，在人工

控制條件下培養(yǎng)獲得無(wú)菌完整植株。

4脫毒材料的選取

4.1植株初選

蘋(píng)果生育期內(nèi)，于現(xiàn)蕾至開(kāi)花期選擇生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、具有該品種典型性狀的健壯植株，做好標(biāo)記。

4.2材料選擇

在初選植株中，選取帶2～3個(gè)腋芽的嫩莖。

5脫毒與培養(yǎng)

5.1外植體消毒

5.1.1取材

待春梢生長(zhǎng)到10cm～20cm時(shí)，在連續(xù)5個(gè)以上晴天的上午在大田中剪取帶2～3個(gè)腋芽的嫩莖，剪

取前做好工具消毒。

5.1.2清洗

將外植體置于稀釋200倍的洗潔精溶液中浸泡15min，并用清水沖洗干凈。

5.1.3消毒

在超凈工作臺(tái)上，將外植體浸于75%酒精中30s，期間不斷震蕩；置于0.1%HgCl2溶液中浸泡5min；

再用無(wú)菌水沖洗5～7次，并用無(wú)菌濾紙吸干表面水分。

5.2離體培養(yǎng)無(wú)菌苗

5.2.1接種

在超凈工作臺(tái)上，對(duì)消毒后的外植體進(jìn)行剪切，在無(wú)菌濾紙上將表面水分吸干，切除下端1cm部分，

接種在MS培養(yǎng)基上。

5.2.2培養(yǎng)方法

在培養(yǎng)容器上注明品種名稱和接種時(shí)間，放入培養(yǎng)間培養(yǎng)21d～25d，待其膨大基部分化出5～7個(gè)

新梢，切成單獨(dú)小苗，轉(zhuǎn)接于同樣的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成苗。同樣方法擴(kuò)繁2個(gè)周期，待苗達(dá)到一定數(shù)量

后，從無(wú)菌苗上剝離莖尖。

2

DB1408/T048—2023

5.2.3培養(yǎng)條件

溫度（26±2）℃，采用人工光源，光照強(qiáng)度2000Lux～3000Lux，光照時(shí)數(shù)12h/d。

5.3莖尖剝離與接種

莖尖剝離與接種在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行。在解剖鏡的載物臺(tái)上放一張滅菌濾紙，將剪取的無(wú)菌苗莖尖

置于濾紙上。在40X雙目解剖鏡下，剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長(zhǎng)點(diǎn)。用無(wú)菌解剖針切取0.25mm帶

1～2個(gè)葉原基的莖尖，立即接種于MS培養(yǎng)基上，每瓶培養(yǎng)基接種1個(gè)莖尖。接種后封口，暗培養(yǎng)20d轉(zhuǎn)

光照培養(yǎng)，在容器上注明編號(hào)、品種名稱、接種時(shí)間。

5.4莖尖培養(yǎng)

5.4.1暗培養(yǎng)

接種好的莖尖放入培養(yǎng)間進(jìn)行暗培養(yǎng)，溫度（26±2）℃。

5.4.2光培養(yǎng)

暗培養(yǎng)20d后選取變大轉(zhuǎn)綠的莖尖進(jìn)行光培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同5.2.3。

5.4.3成苗

培養(yǎng)30d選擇莖尖分化出帶有2～3片葉的嫩梢，轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)成苗

6病毒檢測(cè)

病毒檢測(cè)方法執(zhí)行NY/T2281的規(guī)定，通過(guò)檢測(cè)確認(rèn)是否脫除了本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的所檢病毒，篩選出不

帶有病毒的植株。

7組培苗擴(kuò)繁

7.1培養(yǎng)基制備

7.1.1培養(yǎng)基配制

選擇用MS培養(yǎng)基，根據(jù)培養(yǎng)品種不同添加吲哚乙酸0.1mg/L～0.3mg/L，6-芐基嘌呤0.4mg/L～0.8

mg/L。

7.1.2培養(yǎng)基分裝

選擇250ml培養(yǎng)瓶，將配制好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶中，每瓶加入50ml的培養(yǎng)基，用帶透氣膜的蓋

子封口。

7.2滅菌

7.2.1培養(yǎng)基滅菌

培養(yǎng)基分裝好后置于高壓蒸汽滅菌鍋，在壓力為1.1kg/cm2、溫度為121℃條件下滅菌25min，取

出后在潔凈的室內(nèi)放置5d～7d待用。

3

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