ICS65.020.20

CCSB16

2301

黑龍江省哈爾濱市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB2301/T200—2024

大豆疫霉種群動態(tài)監(jiān)測技術(shù)規(guī)程

2024-12-30發(fā)布2025-02-05實施

哈爾濱市市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB2301/T200—2024

目次

前言........................................................................................................................................................................II

1范圍...................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件..............................................................................................................................................1

3術(shù)語和定義......................................................................................................................................................1

4田間樣本采集..................................................................................................................................................1

4.1取樣地點...................................................................................................................................................1

4.2取樣時期...................................................................................................................................................1

4.3取樣方法...................................................................................................................................................1

4.4樣本記錄...................................................................................................................................................1

5室內(nèi)檢測..........................................................................................................................................................2

5.1大豆疫霉分離及鑒定...............................................................................................................................2

5.2菌株的純化...............................................................................................................................................2

5.3菌株的保存...............................................................................................................................................2

6生理小種鑒定..................................................................................................................................................2

6.1大豆植株的培養(yǎng).......................................................................................................................................2

6.2接種...........................................................................................................................................................2

6.3病情調(diào)查...................................................................................................................................................2

6.4生理小種確定...........................................................................................................................................2

7種群動態(tài)監(jiān)測..................................................................................................................................................2

7.1監(jiān)測內(nèi)容...................................................................................................................................................3

7.2監(jiān)測時間...................................................................................................................................................3

7.3數(shù)據(jù)分析與匯總.......................................................................................................................................3

7.4監(jiān)測結(jié)果...................................................................................................................................................3

8滅活...................................................................................................................................................................3

9檔案管理..........................................................................................................................................................3

I

DB2301/T200—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：哈爾濱市農(nóng)業(yè)科學(xué)院。

本文件主要起草人：陳秋明、田甜、于松濤、王杰、李慧、張金鳳、李亮、鄭凱、丁爽、劉志洋、

張卓群、曹廣祿、張琰。

II

DB2301/T200—2024

大豆疫霉種群動態(tài)監(jiān)測技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了大豆疫霉種群動態(tài)監(jiān)測的田間樣本采集、室內(nèi)檢測、生理小種鑒定、種群動態(tài)監(jiān)測、

滅活和檔案管理。

本文件適用于大豆疫霉生理小種的種群動態(tài)監(jiān)測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T2114—2012大豆疫霉病菌檢疫檢測與鑒定方法

DB2301/T151大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4田間樣本采集

4.1取樣地點

在大豆主栽區(qū)生產(chǎn)田和品種試驗田的長期定位點調(diào)查和采集大豆疫霉根腐病病樣（病株和病土）。

4.2取樣時期

取樣時期為每年的6月～8月。

4.3取樣方法

4.3.1病株取樣

采集定位點具有典型病癥的大豆疫霉根腐病病株，每個地塊取樣5株～10株，用滅菌牛皮紙袋帶回

實驗室。

4.3.2病土取樣

每個定位點隨機取樣10份，每份取根際土為200g，混勻后帶回實驗室，自然陰干。

4.4樣本記錄

1

DB2301/T200—2024

每個樣本需記錄樣本數(shù)量、樣本來源、品種名稱、取樣部位、采集日期和采集人信息。

5室內(nèi)檢測

5.1大豆疫霉分離及鑒定

大豆疫霉分離及鑒定應(yīng)按NY/T2114中的7.1和7.3的規(guī)定執(zhí)行。

5.2菌株的純化

篩選出的目標(biāo)菌落轉(zhuǎn)移至V8培養(yǎng)基上純化4次～6次，轉(zhuǎn)移至V8培養(yǎng)基試管斜面上注明菌株編號、

培養(yǎng)日期。

5.3菌株的保存

待菌絲長滿斜面后至于8℃恒溫箱中保存用于后續(xù)生理小種檢測，菌株需每隔6個月～8個月繼代

活化一次。

6生理小種鑒定

6.1大豆植株的培養(yǎng)

將8個鑒別寄主和感病品種分別挑選15粒飽滿種子播種于以無菌蛭石的培養(yǎng)缽中，出苗前溫度控制

在25℃～29℃，出苗后溫度控制在18℃～25℃。出苗后間苗至10株/缽，每個處理重復(fù)3次。

6.2接種

大豆苗長至真葉期，將25℃黑暗培養(yǎng)8d含有大豆疫霉菌菌絲的培養(yǎng)基，用滅菌解剖刀切成3mm×3

mm的方塊菌碟，應(yīng)用下胚軸傷口接種法進(jìn)行接種。

6.3病情調(diào)查

6.3.1調(diào)查時間

接種后5d～7d對大豆苗下胚軸進(jìn)行病情調(diào)查。

6.3.2致病性測定

大豆植株病斑反應(yīng)型分為3種，≥70%植株死亡記為感病(S)、≤30%植株死亡記為抗病(R)、30%～

70%植株死亡記為中間類型(IRT)，試驗重復(fù)3次。

6.3.3有效性判別

當(dāng)設(shè)置的感病對照材料鑒定為感病，該批次鑒定視為有效。

6.4生理小種確定

調(diào)查各菌株與8個鑒別寄主互作反應(yīng)結(jié)果，列出感病互作中Rps基因，即為該菌株致病型。生理小

種的確定應(yīng)按DB2301/T151—2024中附錄C執(zhí)行。

7種群動態(tài)監(jiān)測