免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化演講人01免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化02###3.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的核心機(jī)制03#####3.3.1溶瘤病毒療法04###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略目錄免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化###1.引言：NK細(xì)胞在免疫聯(lián)合治療中的核心地位免疫治療的革新已深刻改變腫瘤治療格局，其中免疫聯(lián)合治療通過協(xié)同不同機(jī)制打破免疫逃逸，成為提升療效的關(guān)鍵策略。自然殺傷細(xì)胞（NaturalKillercells,NK細(xì)胞）作為固有免疫系統(tǒng)的核心效應(yīng)細(xì)胞，無需預(yù)先致敏即可識(shí)別并清除腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞及衰老細(xì)胞，其活化狀態(tài)直接決定免疫聯(lián)合治療的療效上限。近年來，隨著對(duì)NK細(xì)胞生物學(xué)特性認(rèn)識(shí)的深入，以NK細(xì)胞活化為核心的聯(lián)合治療策略（如與免疫檢查點(diǎn)抑制劑、細(xì)胞因子、過繼細(xì)胞療法等聯(lián)用）在血液腫瘤和實(shí)體瘤中展現(xiàn)出令人鼓舞的潛力。作為一名長期從事腫瘤免疫治療研究的臨床工作者，我在實(shí)驗(yàn)室中見證了NK細(xì)胞從“旁觀者”到“效應(yīng)核心”的角色轉(zhuǎn)變，也親歷了聯(lián)合治療策略為晚期患者帶來的生存獲益。本文將從NK細(xì)胞的基礎(chǔ)特性、活化機(jī)制、聯(lián)合治療策略、現(xiàn)存挑戰(zhàn)及未來方向五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的科學(xué)內(nèi)涵與臨床意義。免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化###2.NK細(xì)胞的基礎(chǔ)特性：活化的生物學(xué)基礎(chǔ)NK細(xì)胞的活化并非孤立事件，而是其固有生物學(xué)特性與微環(huán)境信號(hào)動(dòng)態(tài)整合的結(jié)果。深入理解NK細(xì)胞的發(fā)育、分化及功能特征，是解析其在聯(lián)合治療中活化機(jī)制的前提。####2.1NK細(xì)胞的發(fā)育與分化來源NK細(xì)胞起源于骨髓中的淋巴祖細(xì)胞，在骨髓、肝臟、脾臟及外周淋巴器官中分化成熟。其發(fā)育過程嚴(yán)格依賴IL-15/IL-15R信號(hào)通路，轉(zhuǎn)錄因子E4BP4、NFIL3、T-bet和Eomes調(diào)控其分化與功能成熟。根據(jù)表面標(biāo)志物CD56和CD16的表達(dá)，人類NK細(xì)胞可分為兩個(gè)主要亞群：CD56brightCD16dim亞群，主要分泌IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子，參與免疫調(diào)節(jié)；CD56dimCD16bright亞群，具備強(qiáng)大的細(xì)胞毒活性，免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化通過穿孔素/顆粒酶途徑和死亡受體（如FasL、TRAIL）介導(dǎo)靶細(xì)胞裂解。值得注意的是，腫瘤微環(huán)境（TME）中NK細(xì)胞的亞群比例常發(fā)生偏移，例如在肺癌中，CD56bright亞群比例升高可能與免疫逃逸相關(guān)，這一現(xiàn)象提示我們?cè)诼?lián)合治療中需關(guān)注NK細(xì)胞亞群的平衡。####2.2NK細(xì)胞識(shí)別靶分子的受體系統(tǒng)NK細(xì)胞的活化依賴于“活化-抑制”信號(hào)平衡的精密調(diào)控，其表面受體通過識(shí)別靶細(xì)胞表面的特定分子，決定是否啟動(dòng)殺傷程序。#####2.2.1活化性受體活化性受體是NK細(xì)胞識(shí)別“應(yīng)激信號(hào)”的關(guān)鍵，主要包括：免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化-NKG2D-DAP復(fù)合體：識(shí)別應(yīng)激細(xì)胞表面的MICA/B、ULBP1-6等配體，這些配體在腫瘤細(xì)胞中因基因組不穩(wěn)定、表觀遺傳修飾異常而高表達(dá)，是NK細(xì)胞識(shí)別腫瘤的重要“分子標(biāo)記”。我們?cè)诤谏亓龌颊叩耐庵苎邪l(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞表面MICA表達(dá)水平與患者外周血NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示MICA脫落可能通過NK細(xì)胞耗竭促進(jìn)免疫逃逸。-自然細(xì)胞毒性受體（NCRs）：包括NKp30、NKp44、NKp46，其配體包括腫瘤細(xì)胞表面的B7-H6、病毒血凝素等。NKp46在多種腫瘤（如乳腺癌、肺癌）中發(fā)揮關(guān)鍵殺傷作用，敲除NKp46的小鼠對(duì)腫瘤的易感性顯著升高。-FcγRIII（CD16）：介導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC），通過結(jié)合IgG抗體的Fc段，識(shí)別被抗體包被的腫瘤細(xì)胞。這是許多治療性抗體（如利妥昔單抗、曲妥珠單抗）發(fā)揮療效的重要機(jī)制，也是NK細(xì)胞與抗體藥物聯(lián)合治療的理論基礎(chǔ)。免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化#####2.2.2抑制性受體抑制性受體通過識(shí)別主要組織相容性復(fù)合體I類分子（MHC-I）傳遞抑制信號(hào)，避免NK細(xì)胞誤傷正常細(xì)胞。主要包括：-殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體（KIRs）：識(shí)別HLA-A、-B、-C分子，KIR2DL/3DL與HLA-C結(jié)合，KIR3DL與HLA-A/B結(jié)合，抑制NK細(xì)胞活化。-CD94/NKG2A異源二聚體：識(shí)別非經(jīng)典MHC-I分子HLA-E，抑制NK細(xì)胞功能。-LILRB1：識(shí)別HLA-G、-A、-B，在腫瘤微環(huán)境中高表達(dá)，通過招募磷酸酶（如SHP-1）抑制活化信號(hào)。免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞常通過下調(diào)MHC-I分子逃避免疫T細(xì)胞識(shí)別，卻可能因此解除NK細(xì)胞的抑制性信號(hào)，即“丟失自我”（missingself）識(shí)別機(jī)制。然而，腫瘤微環(huán)境中抑制性受體（如NKG2A）的上表達(dá)往往抵消這一優(yōu)勢(shì)，因此聯(lián)合治療中阻斷抑制性受體是活化NK細(xì)胞的重要策略。####2.3NK細(xì)胞效應(yīng)功能的發(fā)揮機(jī)制活化的NK細(xì)胞通過三條主要途徑發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)：-穿孔素/顆粒酶途徑：NK細(xì)胞釋放顆粒酶A和B（通過穿孔素在靶細(xì)胞膜上形成的孔道進(jìn)入胞內(nèi)），激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡。-死亡受體途徑：通過FasL與靶細(xì)胞Fas結(jié)合，或TRAIL與DR4/DR5結(jié)合，激活外源性凋亡通路。免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞的活化-細(xì)胞因子分泌：分泌IFN-γ、TNF-α、GM-CSF等，一方面直接抑制腫瘤增殖，另一方面激活巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DCs）等免疫細(xì)胞，促進(jìn)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。值得注意的是，IFN-γ不僅是NK細(xì)胞的關(guān)鍵效應(yīng)分子，還能上調(diào)腫瘤細(xì)胞MHC-I分子表達(dá)，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的識(shí)別與殺傷，形成“固有免疫-適應(yīng)性免疫”的橋梁，這也是NK細(xì)胞在聯(lián)合治療中發(fā)揮協(xié)同作用的重要基礎(chǔ)。###3.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的核心機(jī)制NK細(xì)胞的活化是“信號(hào)整合”的結(jié)果，其活化的本質(zhì)是活化性信號(hào)超過抑制性信號(hào)的閾值。在免疫聯(lián)合治療中，不同治療策略通過增強(qiáng)活化信號(hào)、解除抑制信號(hào)或提供協(xié)同微環(huán)境，實(shí)現(xiàn)NK細(xì)胞的高效活化。####3.1活化信號(hào)的增強(qiáng)：細(xì)胞因子與共刺激信號(hào)的協(xié)同#####3.1.1細(xì)胞因子介導(dǎo)的NK細(xì)胞活化與擴(kuò)增細(xì)胞因子是驅(qū)動(dòng)NK細(xì)胞活化、增殖和功能分化的核心介質(zhì)。在聯(lián)合治療中，外源性給予或內(nèi)源性誘導(dǎo)細(xì)胞因子可直接激活NK細(xì)胞：-IL-15：維持NK細(xì)胞存活、增殖和功能的關(guān)鍵因子，通過結(jié)合IL-15Rα/β/γc異源三聚體，激活JAK1/JAK3-STAT5信號(hào)通路，促進(jìn)Bcl-2表達(dá)和抗凋亡。###3.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的核心機(jī)制臨床前研究表明，IL-15超激動(dòng)劑（如N-803）聯(lián)合PD-1抑制劑可顯著擴(kuò)增腫瘤浸潤NK細(xì)胞（TINKs），增強(qiáng)其IFN-γ分泌能力。我們?cè)谝豁?xiàng)I期臨床試驗(yàn)中觀察到，晚期黑色素瘤患者接受N-803聯(lián)合帕博利珠單抗治療后，外周血NK細(xì)胞數(shù)量較基線增加3-5倍，且CD56dim亞群的比例顯著升高，細(xì)胞毒活性提升。-IL-12/IL-18：主要由抗原提呈細(xì)胞（如DCs）分泌，通過激活NF-κB和MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)NK細(xì)胞IFN-γ分泌和增殖。IL-12還可增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)NKG2D配體的表達(dá)，提高識(shí)別腫瘤細(xì)胞的能力。-IL-2：雖然可促進(jìn)NK細(xì)胞擴(kuò)增，但高劑量IL-2可能激活調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs），抑制抗腫瘤免疫，因此目前多采用低劑量或改良型IL-2（如“開關(guān)型”IL-2變體）以選擇性激活NK細(xì)胞。###3.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的核心機(jī)制#####3.1.2共刺激信號(hào)的強(qiáng)化除細(xì)胞因子外，共刺激分子提供的“第二信號(hào)”對(duì)NK細(xì)胞活化至關(guān)重要：-4-1BB（CD137）-4-1BBL：4-1BB在活化的NK細(xì)胞中高表達(dá)，其激動(dòng)劑（如Urelumab）可增強(qiáng)NK細(xì)胞的增殖和存活，聯(lián)合IL-15可顯著提升抗腫瘤效果。-CD40-CD40L：CD40激動(dòng)劑激活DCs，促進(jìn)DCs分泌IL-12，間接激活NK細(xì)胞；同時(shí)，NK細(xì)胞表達(dá)CD40L，可通過與DCs的CD40相互作用形成“正向反饋環(huán)”，放大免疫應(yīng)答。####3.2抑制性信號(hào)的解除：免疫檢查點(diǎn)阻斷的協(xié)同作用###3.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的核心機(jī)制腫瘤微環(huán)境中，NK細(xì)胞的抑制性受體（如NKG2A、KIRs、TIGIT）常被腫瘤細(xì)胞或免疫細(xì)胞利用，傳遞抑制信號(hào)。聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）可“解除剎車”，恢復(fù)NK細(xì)胞活性。#####3.2.1NKG2A/CD94通路阻斷NKG2A與腫瘤微環(huán)境中高表達(dá)的HLA-E結(jié)合，抑制NK細(xì)胞活化?？筃KG2A抗體（如Monalizumab）可阻斷這一相互作用，恢復(fù)NK細(xì)胞殺傷功能。在頭頸部鱗癌的臨床試驗(yàn)中，Monalizumab聯(lián)合西妥昔單抗（抗EGFR抗體）顯著提高了患者的客觀緩解率（ORR），且與患者外周血NK細(xì)胞NKG2A表達(dá)水平呈正相關(guān)——這一發(fā)現(xiàn)讓我深刻認(rèn)識(shí)到，基于NK細(xì)胞表型的個(gè)體化治療選擇可能提升聯(lián)合療效。#####3.2.2KIRs通路阻斷###3.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的核心機(jī)制KIRs與HLA-I的相互作用是NK細(xì)胞抑制性信號(hào)的主要來源?？筀IR抗體（如Lirilumab）可阻斷KIRs與HLA-I的結(jié)合，解除對(duì)NK細(xì)胞的抑制。雖然Lirilumab單藥療效有限，但與PD-1抑制劑聯(lián)用在腎癌中顯示出協(xié)同效應(yīng)，其機(jī)制可能與“雙重解除抑制”相關(guān)。#####3.2.3TIGIT通路阻斷TIGIT是NK細(xì)胞和T細(xì)胞共表達(dá)的抑制性受體，其配體包括CD155（PVR）和CD112（PVRL2）。腫瘤細(xì)胞高表達(dá)CD155，通過TIGIT抑制NK細(xì)胞活性?？筎IGIT抗體（如Tiragolumab）聯(lián)合PD-1抑制劑在肺癌中的III期臨床試驗(yàn)顯示，可顯著延長患者無進(jìn)展生存期（PFS），且患者腫瘤組織中浸潤NK細(xì)胞的數(shù)量和活化程度顯著升高。###3.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的核心機(jī)制####3.3靶向腫瘤微環(huán)境的改造：為NK細(xì)胞活化創(chuàng)造有利條件腫瘤微環(huán)境的免疫抑制狀態(tài)（如缺氧、酸性pH、免疫抑制細(xì)胞浸潤）是限制NK細(xì)胞活化的關(guān)鍵因素。聯(lián)合治療可通過改造微環(huán)境，為NK細(xì)胞活化提供“沃土”。#####3.3.1溶瘤病毒療法溶瘤病毒（如T-VEC）可選擇性地在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解，釋放腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）和危險(xiǎn)相關(guān)分子模式（DAMPs），激活DCs和NK細(xì)胞；同時(shí)，溶瘤病毒可上調(diào)腫瘤細(xì)胞表面NKG2D配體和MHC-I分子，增強(qiáng)NK細(xì)胞的識(shí)別和ADCC效應(yīng)。我們?cè)谝豁?xiàng)臨床前研究中觀察到，溶瘤病毒聯(lián)合NK細(xì)胞輸注后，小鼠腫瘤組織中浸潤的NK細(xì)胞數(shù)量增加4倍，且IFN-γ分泌量顯著升高，腫瘤生長被完全抑制。#####3.3.2靶向代謝微環(huán)境的調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的代謝競爭（如葡萄糖攝取、氨基酸耗竭）可抑制NK細(xì)胞功能。例如，腫瘤細(xì)胞高表達(dá)CD71（轉(zhuǎn)鐵蛋白受體），競爭性攝取鐵離子，導(dǎo)致NK細(xì)胞鐵死亡敏感性和功能下降；腺苷通過腺苷A2a受體（A2aR）抑制NK細(xì)胞IFN-γ分泌。因此，聯(lián)合CD71抑制劑、A2aR拮抗劑（如Ciforadenant）可改善NK細(xì)胞的代謝狀態(tài)，增強(qiáng)其活性。#####3.3.1溶瘤病毒療法#####3.3.3調(diào)節(jié)性免疫細(xì)胞的清除腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）、髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）和Tregs可通過分泌IL-10、TGF-β等抑制NK細(xì)胞功能。CSF-1R抑制劑可清除M2型TAMs，改善NK細(xì)胞浸潤；CXCR4抑制劑（如Plerixafor）可阻斷MDSCs的募集，減輕其對(duì)NK細(xì)胞的抑制。###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略基于NK細(xì)胞活化機(jī)制，目前已形成多種成熟的聯(lián)合治療策略，并在血液腫瘤和實(shí)體瘤中展現(xiàn)出差異化療效。####4.1NK細(xì)胞聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICI）#####4.1.1血液腫瘤中的應(yīng)用在血液腫瘤中，NK細(xì)胞的活化與清除微小殘留病（MRD）密切相關(guān)。例如，在慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）中，腫瘤細(xì)胞通過表達(dá)PD-L1抑制NK細(xì)胞活性，抗PD-1抗體（如Pembrolizumab）可恢復(fù)NK細(xì)胞功能。一項(xiàng)II期臨床試驗(yàn)顯示，Pembrolizumab聯(lián)合利妥昔單抗治療復(fù)發(fā)/難治性CLL患者，ORR達(dá)45%，且MRD轉(zhuǎn)陰率顯著升高。在多發(fā)性骨髓瘤中，BCMACAR-T細(xì)胞治療后的復(fù)發(fā)與NK細(xì)胞功能耗竭相關(guān)，聯(lián)合抗NKG2A抗體可增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的持久性，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略#####4.1.2實(shí)體瘤中的應(yīng)用在實(shí)體瘤中，ICI聯(lián)合NK細(xì)胞活化策略的療效受腫瘤類型和微環(huán)境影響較大。例如，PD-1抑制劑聯(lián)合IL-15超激動(dòng)劑在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的I期試驗(yàn)顯示，ORR達(dá)30%，且患者腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的浸潤比例同步升高，提示“T細(xì)胞-NK細(xì)胞”協(xié)同效應(yīng)。在肝癌中，抗PD-L1抗體（Atezolizumab）聯(lián)合貝伐珠單抗（抗VEGF抗體）可通過改善腫瘤血管正?；?，促進(jìn)NK細(xì)胞浸潤，其ORR達(dá)27%，顯著優(yōu)于單藥治療。####4.2NK細(xì)胞聯(lián)合過繼細(xì)胞療法（ACT）#####4.2.1自體NK細(xì)胞輸注聯(lián)合細(xì)胞因子###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略自體NK細(xì)胞輸注是ACT的常見形式，聯(lián)合IL-2或IL-15可增強(qiáng)其體內(nèi)存活和功能。例如，在復(fù)發(fā)/難治性急性髓系白血?。ˋML）中，自體NK細(xì)胞輸注聯(lián)合低劑量IL-2可使患者完全緩解（CR）率達(dá)30%，且緩解持續(xù)時(shí)間與輸注后NK細(xì)胞IFN-γ分泌能力正相關(guān)。#####4.2.2嵌合抗原受體NK細(xì)胞（CAR-NK）聯(lián)合ICICAR-NK細(xì)胞通過基因修飾表達(dá)靶向腫瘤抗原的CAR（如CD19、BCMA、HER2），具備更強(qiáng)的腫瘤特異性。然而，CAR-NK細(xì)胞在體內(nèi)易被抑制性微環(huán)境抑制，聯(lián)合ICI可進(jìn)一步增強(qiáng)其活性。例如，CD19CAR-NK細(xì)胞聯(lián)合抗PD-1抗體在B細(xì)胞淋巴瘤小鼠模型中，完全緩解率達(dá)100%，顯著高于CAR-NK單藥組（60%）。目前，全球已有數(shù)十項(xiàng)CAR-NK聯(lián)合ICI的臨床試驗(yàn)在開展，涵蓋血液腫瘤和實(shí)體瘤（如神經(jīng)母細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤）。###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略####4.3NK細(xì)胞聯(lián)合抗體藥物抗體藥物通過ADCC效應(yīng)依賴NK細(xì)胞發(fā)揮作用，聯(lián)合策略可增強(qiáng)這一效應(yīng)。例如，在HER2陽性乳腺癌中，曲妥珠單抗聯(lián)合IL-15可顯著提升NK細(xì)胞對(duì)HER2陽性腫瘤細(xì)胞的殺傷效率，臨床前研究中腫瘤生長抑制率達(dá)80%；在結(jié)直腸癌中，西妥昔單抗聯(lián)合TIGIT抗體可逆轉(zhuǎn)TIGIT介導(dǎo)的NK細(xì)胞抑制，ORR較單藥提高20%。####4.4NK細(xì)胞聯(lián)合放療或化療放療和化療可誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ICD），釋放TAAs和DAMPs，激活DCs和NK細(xì)胞。例如，放療后腫瘤細(xì)胞表面鈣網(wǎng)蛋白（CRT）表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)NK細(xì)胞識(shí)別；紫杉類藥物可通過上調(diào)腫瘤細(xì)胞NKG2D配體表達(dá)，增強(qiáng)NK細(xì)胞敏感性。在胰腺癌中，立體定向放療（SBRT）聯(lián)合NK細(xì)胞輸注可顯著延長患者生存期，且腫瘤組織中浸潤的活化NK細(xì)胞數(shù)量與生存獲益呈正相關(guān)。###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略###5.現(xiàn)存挑戰(zhàn)與未來方向盡管免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化策略已取得顯著進(jìn)展，但仍面臨諸多挑戰(zhàn)，亟需通過基礎(chǔ)與臨床研究的突破加以解決。####5.1NK細(xì)胞活化的調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明NK細(xì)胞活化的“信號(hào)整合網(wǎng)絡(luò)”復(fù)雜，不同受體、細(xì)胞因子和代謝信號(hào)間的相互作用尚不明確。例如，腫瘤微環(huán)境中TGF-β可通過下調(diào)NCRs和CD16表達(dá)抑制NK細(xì)胞，但其與IL-15信號(hào)的拮抗機(jī)制尚未完全解析；NK細(xì)胞的代謝重編程（如糖酵解、氧化磷酸化）如何影響其功能分化，仍是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。深入解析這些機(jī)制，將為開發(fā)新型NK細(xì)胞活化靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。####5.2NK細(xì)胞體外擴(kuò)增與活化的技術(shù)瓶頸###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略NK細(xì)胞的體外擴(kuò)增是過繼細(xì)胞治療的關(guān)鍵步驟，傳統(tǒng)方法（如IL-2擴(kuò)增）易導(dǎo)致NK細(xì)胞功能耗竭。feeder細(xì)胞系統(tǒng)（如K562feeder表達(dá)4-1BBL和膜結(jié)合IL-15）可高效擴(kuò)增NK細(xì)胞，但存在成本高、操作復(fù)雜等問題；基因修飾（如敲除CISH，負(fù)調(diào)控IL-15信號(hào)）可增強(qiáng)NK細(xì)胞擴(kuò)增和功能，但安全性需進(jìn)一步驗(yàn)證。開發(fā)“無feeder”、無血清、可規(guī)?；腘K細(xì)胞培養(yǎng)體系，是推動(dòng)NK細(xì)胞治療臨床應(yīng)用的重要方向。####5.3腫瘤微環(huán)境的異質(zhì)性與個(gè)體化治療策略的選擇不同腫瘤、同一腫瘤的不同患者，其NK細(xì)胞表型和微環(huán)境差異顯著。例如，在黑色素瘤中，部分患者存在“NK細(xì)胞耗竭表型”（NKG2A+、TIM-3+），需聯(lián)合NKG2A和TIM-3阻斷；而在肝癌中，Tregs浸潤是主要抑制因素，需聯(lián)合Tregs清除策略?；贜K細(xì)胞表型和微環(huán)境的“個(gè)體化聯(lián)合治療”策略，是提升療效的關(guān)鍵，這需要建立可靠的生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)體系（如外周血NK細(xì)胞受體表達(dá)、TINKs數(shù)量等）。###4.免疫聯(lián)合治療中NK細(xì)胞活化的臨床應(yīng)用策略####5.4NK細(xì)胞治療的長期安全性與持久性評(píng)估過繼細(xì)胞輸注可能引發(fā)細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）、神經(jīng)毒性等不良反應(yīng)，CAR-NK細(xì)胞還存在插