2025年液相色譜儀日常維護培訓(xùn)考核試卷附答案一、單項選擇題（每題2分，共30分）1.液相色譜儀中，負責(zé)將流動相穩(wěn)定輸送至系統(tǒng)的核心部件是（）。A.檢測器B.色譜柱C.高壓輸液泵D.進樣器2.以下哪種情況不會導(dǎo)致高壓輸液泵壓力波動過大？（）A.流動相脫氣不徹底B.單向閥密封墊老化C.色譜柱填料均勻D.溶劑過濾頭堵塞3.手動進樣器使用后，需用（）沖洗定量環(huán)，防止樣品殘留。A.純水B.流動相中的強溶劑C.高濃度鹽溶液D.甲醇-水（1:1）4.C18色譜柱長期不使用時，應(yīng)保存在（）中。A.100%甲醇B.0.1mol/L磷酸鹽緩沖液C.純水D.乙腈-水（20:80）5.紫外檢測器日常使用中，若基線出現(xiàn)規(guī)則鋸齒狀波動，最可能的原因是（）。A.流通池污染B.燈能量不足C.流動相脫氣不良D.柱溫波動6.流動相配置時，若使用緩沖鹽溶液，實驗結(jié)束后需先用（）沖洗系統(tǒng)，再用有機相保存。A.甲醇B.乙腈C.10%甲醇水溶液D.0.1mol/L鹽酸7.以下關(guān)于色譜柱使用的說法，錯誤的是（）。A.新柱使用前需用流動相低流速平衡B.避免突然升高流速導(dǎo)致柱壓劇增C.檢測完生物樣品后直接用純水沖洗D.柱壓超過說明書上限時應(yīng)停機排查8.示差折光檢測器（RID）對（）敏感，需嚴格控制使用條件。A.溫度B.波長C.流速D.進樣量9.溶劑過濾頭堵塞會導(dǎo)致泵壓力（）。A.持續(xù)升高B.無壓力C.波動大D.先降后升10.自動進樣器針座漏液的常見原因是（）。A.進樣體積過大B.針密封墊老化C.流動相pH過高D.柱溫箱溫度過高11.以下哪種溶劑組合不適合作為反相色譜流動相？（）A.甲醇-水B.乙腈-0.1%磷酸水C.四氫呋喃-水D.正己烷-水12.檢測波長設(shè)置為210nm時，應(yīng)避免使用（）作為流動相，因其在該波長下有強吸收。A.甲醇B.乙腈C.四氫呋喃D.水13.柱溫箱溫度波動超過±1℃時，最可能影響（）。A.保留時間重復(fù)性B.檢測器靈敏度C.泵流速精度D.進樣體積準確性14.更換色譜柱時，正確的操作是（）。A.直接擰下舊柱，快速連接新柱B.先關(guān)閉泵，待壓力降至0后拆卸C.連接時無需考慮流動相方向D.用大力矩扳手確保接口密封15.若系統(tǒng)壓力突然從15MPa升至30MPa，首先應(yīng)（）。A.提高流速沖洗B.關(guān)閉泵，檢查堵塞位置C.更換色譜柱D.增大檢測器靈敏度二、填空題（每空1分，共20分）1.液相色譜儀的基本組成包括高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、（）、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。2.高壓輸液泵按工作原理可分為（）和（），其中（）泵流量精度更高。3.流動相脫氣的常用方法有（）、（）、（）和在線脫氣機脫氣。4.色譜柱污染后，可采用（）沖洗法，即使用（）的溶劑梯度沖洗，去除強保留污染物。5.紫外檢測器的燈源通常為（）燈（檢測波長200-400nm）和（）燈（檢測波長400-800nm）。6.手動進樣器的“LOAD”狀態(tài)用于（），“INJECT”狀態(tài)用于（）。7.溶劑瓶中的過濾頭材質(zhì)通常為（），若污染可用（）浸泡超聲清洗。8.長期使用緩沖鹽流動相時，系統(tǒng)易出現(xiàn)的問題包括（）和（），因此需加強沖洗。9.示差折光檢測器不能用于（）梯度洗脫，因其對（）變化敏感。10.色譜柱的理論塔板數(shù)下降，可能的原因是（）或（）。三、判斷題（每題1分，共10分）1.流動相配制后可長期保存，使用前無需重新過濾。（）2.泵頭密封圈磨損會導(dǎo)致流速不準確，但不會影響壓力。（）3.色譜柱使用時，流動相的pH應(yīng)控制在其允許范圍內(nèi)（如C18柱通常為2-8）。（）4.檢測器流通池污染時，可用強溶劑（如丙酮）直接高壓沖洗。（）5.關(guān)機前需用純有機相（如甲醇）沖洗系統(tǒng)30分鐘以上，防止緩沖鹽結(jié)晶。（）6.自動進樣器的清洗溶劑應(yīng)選擇與流動相混溶的溶劑，避免殘留析出。（）7.柱溫升高會導(dǎo)致保留時間延長，分離度增加。（）8.溶劑過濾頭堵塞會導(dǎo)致泵吸液不暢，壓力降低甚至無壓力。（）9.紫外檢測器的燈壽命有限，頻繁開關(guān)不會影響其使用壽命。（）10.檢測生物樣品時，需先進行前處理（如離心、過濾），避免大分子污染色譜柱。（）四、簡答題（每題6分，共30分）1.簡述高壓輸液泵壓力異常（過高或過低）的排查步驟。2.色譜柱出現(xiàn)“柱壓升高、峰形拖尾”現(xiàn)象，可能的原因及處理方法有哪些？3.紫外檢測器基線漂移的常見原因及解決措施。4.流動相脫氣不徹底會對實驗產(chǎn)生哪些影響？列舉3種脫氣方法并說明原理。5.簡述液相色譜儀關(guān)機前的標準維護流程。五、實操題（每題10分，共30分）1.請寫出更換液相色譜柱的詳細操作步驟（包括前后處理）。2.手動進樣器使用過程中，若發(fā)現(xiàn)進樣后峰面積重復(fù)性差，可能的原因及解決方法是什么？請列出至少3項。3.實驗中發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力突然升高（如從20MPa升至40MPa），請設(shè)計應(yīng)急處理流程。答案一、單項選擇題1.C2.C3.B4.A5.C6.C7.C8.A9.B10.B11.D12.C13.A14.B15.B二、填空題1.分離系統(tǒng)（色譜柱系統(tǒng)）2.往復(fù)式柱塞泵；氣動放大泵；往復(fù)式柱塞3.超聲脫氣；加熱脫氣；真空脫氣4.反向；極性由強到弱（或梯度）5.氘；鎢鹵6.進樣針填充樣品；樣品注入系統(tǒng)7.燒結(jié)不銹鋼；30%硝酸（或稀硝酸）8.鹽結(jié)晶堵塞；色譜柱填料溶解9.流動相；折射率10.填料流失；柱頭污染三、判斷題1.×2.×3.√4.×5.√6.√7.×8.√9.×10.√四、簡答題1.排查步驟：①檢查溶劑瓶是否有流動相，過濾頭是否堵塞（若堵塞，用稀硝酸超聲清洗）；②確認泵頭是否有氣泡（通過排液閥排液排氣）；③檢查單向閥（拆卸后用純甲醇超聲清洗，若損壞則更換）；④查看色譜柱是否堵塞（更換保護柱或反沖色譜柱，必要時更換新柱）；⑤檢查管路是否有堵塞（分段拆卸管路，用甲醇沖洗測試壓力）；⑥確認泵密封圈是否磨損（更換密封圈）。2.可能原因及處理：①柱頭污染（反沖色譜柱，用強溶劑梯度沖洗；若嚴重，挖取污染填料并補充同型填料）；②流動相pH超出柱耐受范圍（調(diào)整流動相pH至柱允許范圍，如C18柱2-8）；③樣品中存在強保留物質(zhì)（加強樣品前處理，如過濾、萃?。?；④色譜柱老化（更換新柱）；⑤流速過高或溫度過低（降低流速或升高柱溫至推薦范圍）。3.常見原因及解決：①流動相脫氣不徹底（重新脫氣，檢查在線脫氣機是否正常）；②柱溫波動（穩(wěn)定柱溫箱溫度，避免環(huán)境溫度變化過大）；③檢測器燈能量不足（更換氘燈，或預(yù)熱燈30分鐘以上）；④流通池污染（用甲醇-水（50:50）低流速沖洗，嚴重時拆卸流通池用異丙醇超聲清洗）；⑤流動相組成變化（確保流動相比例準確，梯度洗脫時平衡時間足夠）。4.影響：①泵壓力波動，流速不穩(wěn)；②檢測器基線噪聲增大，出現(xiàn)鬼峰；③色譜柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響分離效果。脫氣方法及原理：①超聲脫氣（利用超聲波振動使溶劑中的氣體逸出）；②真空脫氣（通過抽真空降低溶劑表面壓力，促進氣體揮發(fā)）；③在線脫氣機脫氣（利用惰性氣體（如氦氣）吹掃或膜分離技術(shù)，持續(xù)脫除流動相中的氣體）。5.關(guān)機維護流程：①若使用緩沖鹽流動相，先以1ml/min流速用10%甲醇水溶液沖洗系統(tǒng)30分鐘（沖洗色譜柱、管路及檢測器）；②切換為純甲醇（或乙腈）沖洗30分鐘，置換系統(tǒng)中的水相，防止鹽結(jié)晶和微生物生長；③關(guān)閉泵，待壓力降至0后關(guān)閉柱溫箱，設(shè)置檢測器波長為400nm（保護氘燈）；④關(guān)閉主機電源，填寫設(shè)備使用記錄；⑤清理實驗臺面，solvent瓶倒空并清洗，防止溶劑殘留揮發(fā)。五、實操題1.更換色譜柱步驟：①關(guān)閉泵，待系統(tǒng)壓力降至0；②拆卸色譜柱入口端管路（用扳手緩慢松開接口，避免溶劑噴濺）；③拆卸出口端管路，取下舊色譜柱；④檢查新色譜柱的方向（標記“IN”為入口），用專用扳手連接入口端（手擰至緊后，扳手輕擰1/4圈）；⑤連接出口端管路（同樣輕擰固定）；⑥開啟泵，以0.1ml/min低流速沖洗10分鐘，逐步升高流速至1ml/min，觀察壓力是否正常（新柱壓力應(yīng)與舊柱初始壓力接近）；⑦用流動相平衡30分鐘以上，進樣測試柱效（如用萘/甲醇溶液測試理論塔板數(shù)）。2.峰面積重復(fù)性差的可能原因及解決：①進樣針堵塞（用甲醇超聲清洗進樣針，或更換新針）；②定量環(huán)體積選擇不當（樣品體積應(yīng)至少為定量環(huán)體積的3倍，避免進樣量不足）；③進樣器密封墊磨損（更換進樣閥密封墊）；④進樣操作不規(guī)范（確保進樣針完全插入，避免氣泡吸入）；⑤流動相流速不穩(wěn)（檢查泵壓力是否穩(wěn)定，排除氣泡或單向閥故障）。3.壓力突然升高應(yīng)急處理流程：①立即關(guān)閉泵，停止實驗；②分段排查堵塞位置：先斷開色譜柱出口，連接兩通，觀察壓力是否下降（若壓