專題09生物技術(shù)與工程

考點(diǎn)五年考情（2021-2025）命題趨勢

考點(diǎn)1發(fā)酵工程2021-2025從近五年重慶市高考試題來

考點(diǎn)2細(xì)胞工程看，常出現(xiàn)的考點(diǎn)是發(fā)酵工程和細(xì)

2021-2025

和胚胎工程胞工程、基因工程，難度適中。三

個(gè)考點(diǎn)均是高頻考點(diǎn)，每年選擇非

選擇都有考察，發(fā)酵工程近三年都

考點(diǎn)3基因工程2021-2025

已選擇題形式出現(xiàn)，基因工程多以

非選擇的形式結(jié)合其他考點(diǎn)考察。

考點(diǎn)01發(fā)酵工程

1．（2025·重慶·高考真題）豆瓣醬是我國地方特色調(diào)味品，生產(chǎn)豆瓣醬時(shí)要將蠶豆瓣制作成豆瓣曲，再添加

調(diào)料進(jìn)一步發(fā)酵，下列說法錯(cuò)誤的是（）

A．沸水浸泡能殺死蠶豆細(xì)胞，減少有機(jī)物消耗

B．面粉可為菌種的快速繁殖和生長提供營養(yǎng)

C．菌種中含有產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶的微生物

D．豆瓣醬的制備主要是利用厭氧微生物發(fā)酵

2．（2024·重慶·高考真題）養(yǎng)殖場糞便是農(nóng)家肥的重要來源，其中某些微生物可使氨氮化合物轉(zhuǎn)化為尿素進(jìn)

而產(chǎn)生NH3，影響畜禽健康。為篩選糞便中能利用氨氮化合物且減少NH3產(chǎn)生的微生物。興趣小組按圖進(jìn)

行實(shí)驗(yàn)獲得目的菌株，正確的是（）

A．①通常在等比稀釋后用平板劃線法獲取單個(gè)菌落

B．②挑取在2種培養(yǎng)基上均能生長的用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)

C．③可通過添加脲酶并檢測活性，篩選得到甲、乙

D．糞便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的減少

3．（2023·重慶·高考真題）垃圾分類有利于變廢為寶，減少環(huán)境污染。如圖為分類后餐廚垃圾資源化處理的

流程設(shè)計(jì)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．壓榨出的油水混合物可再加工，生產(chǎn)出多種產(chǎn)品

B．添加的木屑有利于堆肥體通氣，還可作為某些微生物的碳源

C．X中需要添加合適的菌種，才能產(chǎn)生沼氣

D．為保證堆肥體中微生物的活性，不宜對堆肥體進(jìn)行翻動(dòng)

4．（2022·重慶·高考真題）研究發(fā)現(xiàn)柑橘精油可抑制大腸桿菌的生長。某興趣小組采用水蒸氣蒸餾法和壓榨

法提取了某種橘皮的精油（分別簡稱為HDO和CPO），并研究其抑菌效果的差異。

(1)為便于精油的提取，壓榨前需用浸泡橘皮一段時(shí)間。在兩種方法收集的油水混合物中均加入NaCl，

其作用是；為除去油層中的水分，需加入。

(2)無菌條件下，該小組制備了兩個(gè)大腸桿菌平板，用兩片大小相同的無菌濾紙分別蘸取HDO和CPO貼于

含菌平板上，37℃培養(yǎng)24h，抑菌效果見如圖。有同學(xué)提出該實(shí)驗(yàn)存在明顯不足：①未設(shè)置對照，設(shè)置本實(shí)

驗(yàn)對照的做法是，其作用是；②不足之處還有（答兩點(diǎn)）。

(3)若HDO的抑菌效果低于CPO，從提取方法的角度分析，主要原因是。

5．（2021·重慶·高考真題）人類很早就能制作果酒，并用果酒進(jìn)一步發(fā)酵生產(chǎn)果醋。

(1)人們利用水果及附著在果皮上的菌，在18～25℃、無氧條件下釀造果酒；在利用醋酸菌在條

件下，將酒精轉(zhuǎn)化成醋酸釀得果醋。釀造果醋時(shí)，得到了醋酸產(chǎn)率較高的醋酸菌群，為進(jìn)一步純化獲得優(yōu)

良醋酸菌菌種，采用的接種方法是。

(2)先釀制果酒再生產(chǎn)果醋的優(yōu)勢有（填編號(hào)）。

①先釀制果酒，發(fā)酵液能抑制雜菌的生長，有利于提高果醋的產(chǎn)率

②釀制果酒時(shí)形成的醋酸菌膜，有利于提高果醋的產(chǎn)率

③果酒有利于溶出水果中的風(fēng)味物質(zhì)并保留在果醋中

(3)果酒中的酒精含量對果醋的醋酸產(chǎn)率會(huì)產(chǎn)生一定的影響。某技術(shù)組配制發(fā)酵液研究了初始酒精濃度對醋

酸含量的影響，結(jié)果見圖。

該技術(shù)組使用的發(fā)酵液中，除酒精外還包括的基本營養(yǎng)物質(zhì)有（填寫兩種）。據(jù)圖可知，

醋酸發(fā)酵的最適初始酒精濃度是；酒精濃度為10%時(shí)醋酸含量最低，此時(shí)，若要盡快提高醋酸含量，

可采取的措施有（填寫兩個(gè)方面）。

考點(diǎn)02細(xì)胞工程和胚胎工程

1．（2025·重慶·高考真題）為保護(hù)瀕危哺乳動(dòng)物甲，科研工作者將甲的近親物種乙（種群數(shù)量多）進(jìn)行了如

圖所示的研究，下列敘述正確的是（）

A．克隆動(dòng)物的核基因組來源于甲、乙

B．體外受精需用獲能的精子與MI期的卵母細(xì)胞受精

C．囊胚①的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)可發(fā)育為胎盤、個(gè)體

D．滋養(yǎng)層可影響內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的發(fā)育

2．（2024·重慶·高考真題）自然條件下，甲、乙兩種魚均通過體外受精繁殖后代，甲屬于國家保護(hù)的稀有物

種，乙的種群數(shù)量多且繁殖速度較甲快。我國科學(xué)家通過下圖所示流程進(jìn)行相關(guān)研究，以期用于瀕危魚類

的保護(hù)。下列敘述正確的是（）

A．誘導(dǎo)后的iPGCs具有胚胎干細(xì)胞的特性

B．移植的iPGCs最終產(chǎn)生的配子具有相同的遺傳信息

C．該實(shí)驗(yàn)中，子一代的遺傳物質(zhì)來源于物種甲

D．通過該實(shí)驗(yàn)可以獲得甲的克隆

3．（2023·重慶·高考真題）妊娠與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的功能密切相關(guān)。某研究小組通過如圖所示的實(shí)驗(yàn)流程

獲得了子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，以期用于妊娠相關(guān)疾病的研究。

(1)手術(shù)獲得的皮膚組織需在低溫下運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，低溫對細(xì)胞中各種蛋白質(zhì)的作用為。

(2)過程①中，誘導(dǎo)形成PS細(xì)胞時(shí)，需提高成纖維細(xì)胞中4個(gè)基因的表達(dá)量，可采用技術(shù)將這些基因

導(dǎo)入該細(xì)胞。這4個(gè)基因的主要作用為：M基因促進(jìn)增殖，S基因和C基因控制干細(xì)胞特性，K基因抑制

凋亡和衰老。若成纖維細(xì)胞形成腫瘤細(xì)胞，最有可能的原因是基因過量表達(dá)。

(3)培養(yǎng)iPS細(xì)胞時(shí)，應(yīng)對所處環(huán)境定期消毒以降低細(xì)胞被污染風(fēng)險(xiǎn)。可用紫外線進(jìn)行消毒的是_____（多選）。

A．培養(yǎng)基B．培養(yǎng)瓶C．細(xì)胞培養(yǎng)室D．CO2培養(yǎng)箱

(4)過程②中，iPS細(xì)胞經(jīng)歷的生命歷程為。PCR技術(shù)可用于檢測子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞關(guān)鍵基因的mRNA

水平，mRNA需經(jīng)過才能作為PCR擴(kuò)增的模板。

4．（2022·重慶·高考真題）植物體細(xì)胞通常被誘導(dǎo)為愈傷組織后才能表現(xiàn)全能性。研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織的中

層細(xì)胞是根或芽再生的源頭干細(xì)胞，其在不同條件下，通過基因的特異性表達(dá)調(diào)控生長素、細(xì)胞分裂素的

作用，表現(xiàn)出不同的效應(yīng)（見如表）。已知生長素的生理作用大于細(xì)胞分裂素時(shí)有利于根的再生；反之，有

利于芽的再生。下列推論不合理的是（）

條件基因表達(dá)產(chǎn)物和相互作用效應(yīng)

①WOX5維持未分化狀態(tài)

②WOX5+PLT誘導(dǎo)出根

③WOX5+ARR2，抑制ARR5誘導(dǎo)出芽

A．WOX5失活后，中層細(xì)胞會(huì)喪失干細(xì)胞特性

B．WOX5+PLT可能有利于愈傷組織中生長素的積累

C．ARR5促進(jìn)細(xì)胞分裂素積累或提高細(xì)胞對細(xì)胞分裂素的敏感性

D．體細(xì)胞中生長素和細(xì)胞分裂素的作用可能相互抑制

5．（2021·重慶·高考真題）為了研究PDCD4基因?qū)π∈笞訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

(1)取小鼠子宮時(shí)，為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行處理；子宮取出剪碎后，用處理一定時(shí)

間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞，再分離獲得基質(zhì)細(xì)胞用于培養(yǎng)。

(2)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有（填寫兩種）；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是。

(3)在含PDCD4基因的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的作用是。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)

胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對照組，分別

為。經(jīng)檢測，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對照組，

說明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有（填“抑制”或“促進(jìn)”）作用。

考點(diǎn)03基因工程

1．（2025·重慶·高考真題）絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物生來怕辣，而小型哺乳動(dòng)物樹鼩先天不怕辣，喜食含辣椒素類

物質(zhì)的植物。為探究其原因，我國研究人員進(jìn)行了系列研究。

(1)研究發(fā)現(xiàn)，樹鼩的受體蛋白TR1對辣椒素的敏感性低于其他哺乳動(dòng)物。為研究樹鼩和其他哺乳動(dòng)物TR1

蛋白的差異，可設(shè)計(jì)開展如下實(shí)驗(yàn)：

①；

②將分別進(jìn)行酶切并連接；

③將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌；

④分離表達(dá)的TR1蛋白質(zhì)測定，明確蛋白之間的差異。

(2)樹鼩及一些哺乳動(dòng)物的TR1蛋白存在差異，如圖所示。據(jù)分析，樹鼩對辣椒素的敏感性降低，很可能是

由于TR1第579位氨基酸差異造成的，可證實(shí)該推測的實(shí)驗(yàn)思路是。

(3)樹鼩與其喜食植物的地理分布基本一致，據(jù)此可推測樹鼩對含辣椒素類物質(zhì)植物的適應(yīng)形成的必要條件

是。

2．（2024·重慶·高考真題）大豆是重要的糧油作物，提高大豆產(chǎn)量是我國農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的重要任務(wù)。我國研究人

員發(fā)現(xiàn)，基因S在大豆品種DN（種子較大）中的表達(dá)量高于品種TL（種子較?。?，然后克隆了該基因（兩

品種中基因S序列無差異）及其上游的啟動(dòng)子序列，并開展相關(guān)研究。

(1)基因S啟動(dòng)子的基本組成單位是。

(2)通過基因工程方法,將DN克隆的“啟動(dòng)子D+基因S”序列導(dǎo)入無基因S的優(yōu)質(zhì)大豆品種YZ。根據(jù)題19圖

所示信息（不考慮未標(biāo)明序列）判斷構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，為保證目標(biāo)序列的完整性，不宜使用的限制酶

是；此外，不宜同時(shí)選用酶SpeⅠ和XbaⅠ。原因是。

(3)為驗(yàn)證“啟動(dòng)子D+基因S”是否連接在表達(dá)載體上，可用限制酶對重組表達(dá)載體酶切后進(jìn)行電泳。電泳時(shí)，

對照樣品除指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物外，還應(yīng)有。經(jīng)驗(yàn)證的重組表達(dá)載體需轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，

檢測轉(zhuǎn)入是否成功的技術(shù)是。

(4)用檢測后的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化品種YZ所得再生植株YZ-1的種子變大。同時(shí)將從TL克隆的“啟動(dòng)子T+基因S”

序列成功導(dǎo)入YZ，所得再生植株YZ-2的種子也變大，但小于YZ-1。綜合分析，大豆品種DN較TL種子

大的原因是。

3．（2023·重慶·高考真題）某小組通過PCR（假設(shè)引物長度為8個(gè)堿基短于實(shí)際長度）獲得了含有目的基因

的DNA片段，并用限制酶進(jìn)行酶切（下圖），再用所得片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體。下列敘述錯(cuò)誤的是

（）

A．其中一個(gè)引物序列為5＇TGCGCAGT-3＇

B．步驟①所用的酶是SpeI和CfoI

C．用步驟①的酶對載體進(jìn)行酶切，至少獲得了2個(gè)片段

D．酶切片段和載體連接時(shí)，可使用E．coli連接酶或T4連接酶

4．（2022·重慶·高考真題）改良水稻的株高和產(chǎn)量性狀是實(shí)現(xiàn)袁隆平先生“禾下乘涼夢”的一種可能途徑。研

究人員克隆了可顯著增高和增產(chǎn)的eui基因，并開展了相關(guān)探索。

步驟I：

步驟II：

(1)花藥培養(yǎng)能縮短育種年限，原因是。在步驟I的花藥培養(yǎng)過程中，可產(chǎn)生單倍體愈傷組織，將

其培養(yǎng)于含的培養(yǎng)基上，可促進(jìn)產(chǎn)生二倍體愈傷組織。I中能用于制造人工種子的材料是。

(2)步驟II中，eui基因克隆于cDNA文庫而不是基因組文庫，原因是；在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)使用

的工具酶有。為篩選含重組Ti質(zhì)粒的菌株，需在培養(yǎng)基中添加。獲得的農(nóng)桿菌菌株經(jīng)鑒

定后，應(yīng)侵染I中的，以獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。再生植株是否含有eui基因的鑒定方法是，

移栽后若發(fā)育為更高且豐產(chǎn)的稻株，則可望“禾下乘涼”。

一、單選題

1．（2025·重慶·模擬預(yù)測）物質(zhì)X是一種有害的難以降解的有機(jī)化合物。研究人員用含物質(zhì)X、磷酸鹽、鎂

鹽以及微量元素溶液按照一定比例配制成培養(yǎng)基M,經(jīng)過一系列培養(yǎng)、篩選，成功得到能高效降解物質(zhì)X的

目的菌株，主要步驟如圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是（）

A．培養(yǎng)基M是選擇培養(yǎng)基，物質(zhì)X為目的菌株提供生長所需的氮源和碳源

B．振蕩培養(yǎng)有利于目的菌株充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)

C．在④接種時(shí)，用平板劃線法純化目的菌株的效果比稀釋涂布平板法差

D．在②接種培養(yǎng)后，用瓶中物質(zhì)X含量最低的候選菌作為③選擇接種對象

2．（2025·重慶渝中·三模）啤酒工業(yè)釀造流程主要為：大麥種子發(fā)芽→麥芽糖化→加啤酒花、煮沸→麥汁發(fā)

酵→灌裝保存，其中麥汁發(fā)酵是啤酒釀造的重要過程，可分為接種酵母→充氧→主發(fā)酵→封罐→后發(fā)酵等

步驟。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．用赤霉素溶液浸泡大麥種子可提高生產(chǎn)效率

B．煮沸可以終止麥芽汁糖化并殺滅其中的微生物

C．主發(fā)酵過程中，酵母菌以大麥中的淀粉為主要碳源

D．后發(fā)酵階段，酵母菌細(xì)胞中既有[H]的生成，又有[H]的消耗

3．（2025·重慶九龍坡·二模）野生型大腸桿菌菌株在基本培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基上均可繁殖，而營養(yǎng)缺陷型菌

株只能在完全培養(yǎng)基上繁殖。某實(shí)驗(yàn)室期望用夾層培養(yǎng)法篩選到符合預(yù)期的營養(yǎng)缺陷型菌株，進(jìn)行了如下

具體操作：先在培養(yǎng)皿底部倒一薄層已滅菌的基本培養(yǎng)基，再添加一層內(nèi)含菌液（經(jīng)誘變劑處理）的基本

培養(yǎng)基后，再加一薄層已滅菌的基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，對出現(xiàn)的菌落做好標(biāo)記；然后再加一層完

全培養(yǎng)基，培養(yǎng)一段時(shí)間后會(huì)長出大小不一的菌落。已知大腸桿菌可透過薄層培養(yǎng)基形成菌落，下列說法

正確的是（）

A．營養(yǎng)缺陷型菌株是由野生型染色體變異形成

B．完全培養(yǎng)基應(yīng)在干熱滅菌后立即倒入培養(yǎng)皿

C．該實(shí)驗(yàn)無需設(shè)置未接種的夾層平板作為對照

D．最終應(yīng)選取右圖中較小的菌落作為目標(biāo)菌種

4．（2025·重慶·模擬預(yù)測）我國科學(xué)家利用如下圖所示的液態(tài)厭氧發(fā)酵工藝，實(shí)現(xiàn)了高效產(chǎn)出乙醇和乙醇梭

菌蛋白。下列敘述錯(cuò)．誤．的是（）

A．乙醇梭菌可利用CO、CO?、H?等物質(zhì)生成乙醇

B．乙醇梭菌是自養(yǎng)厭氧型細(xì)菌，發(fā)酵過程應(yīng)設(shè)定合適的溫度和pH，并適度攪拌

C．通過該工藝高效生產(chǎn)清潔能源乙醇，可以降低生態(tài)足跡

D．發(fā)酵完成后，可通過離心、提取、分離、純化等方法從上清液中獲得單細(xì)胞蛋白

5．（2025·重慶·三模）硝化細(xì)菌是一種好氧菌，可有效凈化水體中銨鹽，降低高濃度銨鹽引發(fā)的池塘養(yǎng)殖對

蝦的死亡率。科研人員擬從當(dāng)?shù)貙ξr養(yǎng)殖池塘中篩選出對銨鹽降解率高的硝化細(xì)菌菌株，操作流程如下圖

所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．在配制選擇培養(yǎng)基篩選硝化細(xì)菌時(shí)，不需要添加氮源

B．從對蝦死亡率低的養(yǎng)殖池塘中取樣，能提高篩選的成功率

C．用圖示方法純化菌種時(shí)，不能將最后一次的劃線與第一次的劃線相連

D．應(yīng)選擇銨鹽濃度減少最多的一組候選菌進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)

6．（2025·重慶·三模）線粒體替代療法（MRT）是一種細(xì)胞質(zhì)替換技術(shù)，將目標(biāo)細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到健康去核細(xì)胞

中以預(yù)防細(xì)胞質(zhì)基因遺傳病，主要包括受精卵細(xì)胞核移植（PNT）和卵母細(xì)胞紡錘體—染色體復(fù)合物移植（ST）

兩種方法。已知在卵母細(xì)胞中，紡錘體區(qū)域的線粒體數(shù)量較少，而受精卵中線粒體均勻分布。下列說法正

確的是（）

A．與ST相比，PNT的操作時(shí)間較早，細(xì)胞較為脆弱，因此成功率比ST低

B．與PNT相比，ST能夠更好地避免線粒體DNA的遺傳

C．只有通過PNT獲得的胚胎才可能擁有三個(gè)個(gè)體的遺傳物質(zhì)

D．ST沒有對胚胎進(jìn)行操作，因此ST結(jié)束后不需要對重構(gòu)胚進(jìn)行激活處理

7．（2025·重慶渝中·三模）埃博拉病毒（EBOV）是一種極其危險(xiǎn)且罕見的病毒，其NP蛋白在EBOV的復(fù)

制中具有重要作用，也是檢測EBOV的重要靶蛋白。如圖為研究人員利用NP蛋白制備抗EBOV單克隆抗

體的實(shí)驗(yàn)流程。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．抗EBOV單克隆抗體進(jìn)入人體有引發(fā)過敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)

B．NP蛋白基因若發(fā)生突變，抗EBOV單克隆抗體可能失效

C．篩選1去除未融合的細(xì)胞以及融合的具有同種核的細(xì)胞

D．可將篩選2獲得的細(xì)胞注入小鼠血液中實(shí)現(xiàn)單克隆抗體的大規(guī)模生產(chǎn)

8．（2025·重慶·模擬預(yù)測）為治療會(huì)導(dǎo)致肝功能損壞的酪氨酸血癥，我國科學(xué)家研究出了如圖所示的新型療

法，將基因編輯肝細(xì)胞移植入模型小鼠，小鼠的肝功能得到恢復(fù)，下列有關(guān)說法錯(cuò)誤的是（）

A．分散肝組織可以用機(jī)械方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理

B．培養(yǎng)原代肝細(xì)胞需要放置在密閉培養(yǎng)瓶中以防止雜菌污染

C．構(gòu)建重組腺病毒時(shí)需使用限制酶和DNA連接酶

D．基因編輯自體肝細(xì)胞移植能夠降低免疫排斥反應(yīng)

9．（2025·重慶·三模）圖為利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖菊花的示意圖。相關(guān)敘述正確的是（）

A．只有培養(yǎng)脫毒菊花試管苗才需要對分離的外植體進(jìn)行消毒處理

B．再分化階段提高培養(yǎng)基中生長素和細(xì)胞分裂素的比值，有利于誘導(dǎo)生根

C．再分化過程，愈傷組織細(xì)胞分化時(shí)可能會(huì)發(fā)生基因突變或基因重組

D．剛培育出的試管苗弱小，應(yīng)攜帶培養(yǎng)基煉苗后再移栽至花盆

10．（2025·重慶萬州·模擬預(yù)測）某科研團(tuán)隊(duì)通過細(xì)胞工程技術(shù)成功構(gòu)建了一種人工微型器官——類器官。

類器官是在體外模擬體內(nèi)微環(huán)境，讓干細(xì)胞或祖細(xì)胞自我組織、發(fā)育形成的具有一定結(jié)構(gòu)和功能的三維細(xì)

胞聚集體。下列有關(guān)類器官的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A．類器官可用于藥物篩選和疾病模型的建立

B．類器官的構(gòu)建過程體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性

C．類器官的培養(yǎng)需要添加糖類、氨基酸、血清等

D．不同類型的類器官其細(xì)胞的基因表達(dá)情況存在差異

二、非選擇題

11．（2025·重慶·二模）半紅樹植物是指既能在潮間帶生存，又能在陸地環(huán)境中自然繁殖的兩棲木本植物。

為促進(jìn)生根，提高育苗效率，研究人員開展了半紅樹黃水皮幼苗的培養(yǎng)研究結(jié)果如表。請回答下列問題：

表黃水皮幼苗生長情況

培養(yǎng)基成分實(shí)驗(yàn)結(jié)果

組

別2，平均根長最長根長地徑移栽成活

CaCl·2HOMgSO7H2O基質(zhì)種類

（mg/L）（mg/L）（cm）（cm）（mm）率（%）

稻殼碳混

1110002000合培養(yǎng)基13.4315.523.78100

稻殼碳混

T29001750合培養(yǎng)基9.5913.413.71100

稻殼碳混

T38001500合培養(yǎng)基8.7112.133.62100

稻殼碳混

T411002250合培養(yǎng)基15.1016.214.62100

稻殼碳混

T512002500合培養(yǎng)基16.5521.004.9898

全蛭石培

T610002000養(yǎng)基8.9913.223.7194

含蔗糖的

CK4403707.329.623.020

MS培養(yǎng)基

注：混合培養(yǎng)基由蛭石、稻殼碳和無糖MS培養(yǎng)基按照一定體積比例配制

(1)Ca2+和Mg2+在根尖細(xì)胞中的作用。

(2)T1-T6結(jié)果顯示，蛭石和稻殼碳混合培養(yǎng)基在培育紅樹幼苗生根方面具有獨(dú)特優(yōu)勢，混合培養(yǎng)基的特點(diǎn)

是，對照組幼苗移栽后30天內(nèi)全部死亡，主要原因是

(3)黃水皮植株的根部形成了根瘤結(jié)構(gòu)，其中根瘤菌與黃水皮植株的種間關(guān)系是。將黃水皮與木麻黃

進(jìn)行套種，該群落中的木麻黃生長速度比黃水皮快，據(jù)此（填“能”或“不能”）判斷木麻黃是否屬于優(yōu)

勢種。從群落結(jié)構(gòu)的角度分析，套種形成了復(fù)層混交林，其生物學(xué)意義是。

12．（2024·重慶九龍坡·三模）自然條件下哺乳動(dòng)物不發(fā)生孤雌生殖，云南農(nóng)大科研團(tuán)隊(duì)把豬卵母細(xì)胞進(jìn)行

人為的孤雌激活處理，使其發(fā)育成胚胎，將胚胎移植到代孕母豬體內(nèi)，獲得世界上第一批成活的孤雌生殖

克隆豬。這種克隆豬不同于核移植獲得的克隆豬，現(xiàn)將兩種技術(shù)進(jìn)行比較。

(1)卵母細(xì)胞能夠發(fā)育成早期胚胎得到克隆豬，說明卵母細(xì)胞具有；圖中①②③④是獲得孤雌生殖克隆豬

的流程，那么獲得核移植克隆豬的流程是（填序號(hào)）。

(2)在體細(xì)胞核移植技術(shù)中也會(huì)用到卵母細(xì)胞，使用處理，使良種母豬超數(shù)排卵，收集并選取期的卵

母細(xì)胞，并用微型吸管吸出。

(3)在胚胎移植前，需通過技術(shù)形成多個(gè)胚胎，以進(jìn)一步增加胚胎的數(shù)量。從免疫學(xué)角度分析，早期胚胎

能夠在受體內(nèi)存活的主要生理基礎(chǔ)是。

(4)可以從兩種不同的克隆豬中提取mRNA進(jìn)行研究，通過方法得到多種cDNA，并通過技術(shù)擴(kuò)增產(chǎn)

物。

13．（2024·重慶·模擬預(yù)測）青霉菌產(chǎn)生青霉素需要持續(xù)性提供高氧環(huán)境。考慮到血紅蛋白攜帶氧氣的能力

很強(qiáng)，科學(xué)家們設(shè)想了以下兩種方案來得到含有血紅蛋白的青霉菌。方案一：提取血紅蛋白基因，轉(zhuǎn)入青

霉菌細(xì)胞，血紅蛋白基因表達(dá)從而得到含血紅蛋白的青霉菌；方案二：將含有血紅蛋白的透明顫菌與青霉

菌融合，得到含血紅蛋白的雜種青霉菌。方案二如圖所示：

一些科學(xué)家嘗試采用方案一：

(1)請補(bǔ)充完整具體的操作過程。第一步：篩選并獲??；第二步：將目的基因和質(zhì)粒用限

制酶處理后，再利用將目的基因和質(zhì)粒連接在一起形成基因表達(dá)載體；第三步：將目

的基因?qū)爰?xì)胞；第四步：檢測與鑒定。

(2)通過檢測以下轉(zhuǎn)基因青霉菌的哪些項(xiàng)目可以確定方案一是否成功?。

A．單位時(shí)間內(nèi)青霉素的產(chǎn)量B．是否含有血紅蛋白基因

C．是否含血紅蛋白基因的mRNAD．耗氧速率

E．血紅蛋白含量

另一部分科學(xué)家采用方案二：

(3)現(xiàn)有蛋白酶、溶菌酶、纖維素酶、脂肪酶、淀粉酶可選，處理②應(yīng)選擇。

(4)經(jīng)過處理③后會(huì)得到多種類型的細(xì)胞，請簡述通過處理④篩選出雜種菌株的方

法:。

(5)如果處理③用于融合動(dòng)物細(xì)胞，則特有的方式是。

有同學(xué)提出方案三：

(6)利用青霉菌和透明顫菌作親本進(jìn)行雜交，篩選得到含有血紅蛋白的雜種菌。該方案是否可

行?。原因是。

14．（2025·重慶·三模）科研人員將綠色熒光蛋白（GFP）基因隨機(jī)插入到小麥旗葉的基因組中，發(fā)現(xiàn)小麥

旗葉細(xì)胞除了有熒光信號(hào)外，整個(gè)旗葉也表現(xiàn)出黃化趨勢，推測GFP基因隨機(jī)插入時(shí)破壞了小麥旗葉色素

合成的相關(guān)基因。為了驗(yàn)證這一猜想，科研人員利用YADE（Y形接頭依賴性延伸）法擴(kuò)增出插入位點(diǎn)附近

的DNA片段，進(jìn)行測序、比對后發(fā)現(xiàn)GFP基因插入到了葉綠素合成關(guān)鍵基因的編碼區(qū)。YADE法具體操作

流程如圖所示:

接頭長鏈序列:5′-TAGCAAGGTAGTGC-3′

接頭短鏈序列:5′-AATTGCACTATGCA-3′

EcoRⅠ識(shí)別序列:5′-G↓AATTC-3′

注:若PCR產(chǎn)物中存在非特異性單鏈DNA會(huì)導(dǎo)致測序結(jié)果可信度下降。

(1)步驟①可以向含DNA的濾液中加入后進(jìn)行離心，?。ㄌ?上清液"或"沉淀物"）即可

獲得粗提的旗葉總DNA。

(2)"Y"形接頭的兩條鏈需要先通過（填原理）彼此結(jié)合，再根據(jù)DNA片段的黏性末端，讓

（填"接頭長鏈"或"接頭短鏈"）的對應(yīng)序列結(jié)合在DNA片段上，最后需要DNA連接酶將接頭穩(wěn)定連接在

（填"含GFP的DNA"或"全部DNA"）片段的兩端。

(3)根據(jù)兩次PCR的操作過程，接頭引物P1序列應(yīng)與（填"接頭長鏈"或"接頭短鏈"）的部分序列

一致。從接頭引物發(fā)揮作用的角度分析，兩條接頭鏈不完全互補(bǔ)的好處是。

(4)引物S1是根據(jù)GFP基因序列設(shè)計(jì)的，其作用是擴(kuò)增出。在YADE法中，S1先介導(dǎo)線性擴(kuò)增，

獲得一定數(shù)量的線性DNA（特異性單鏈DNA），再與P?共同介導(dǎo)指數(shù)擴(kuò)增，獲得大量雙鏈DNA，保證了擴(kuò)

增產(chǎn)物的特異性，提高了插入基因定位的可靠性。請根據(jù)S1和P1的作用順序回答YADE法能精準(zhǔn)測出GFP

插入位點(diǎn)的原理。

15．（2025·重慶·模擬預(yù)測）抗菌肽是生物體為了抵抗外來細(xì)菌而迅速誘導(dǎo)產(chǎn)生的一系列具有抗菌或殺菌活

性的多肽類物質(zhì)，在醫(yī)學(xué)上具有重要應(yīng)用價(jià)值。研究人員根據(jù)天然抗菌肽A和抗菌肽D的部分氨基酸序列，

以及酵母菌對密碼子的偏好，人工設(shè)計(jì)并合成了抗菌肽AD基因，然后利用酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)活性更高的抗

菌肽AD，請回答下列問題：

注:K為賴氨酸，A為丙氨酸，M為甲硫氨酸（5’-AUG-3’），起始密碼子為5’-AUG-3’，終止密碼子為

5’-UAA-3’。Leu?為控制亮氨酸合成的基因，Ampr為氨芐青霉素抗性基因，O為復(fù)制原點(diǎn)。

(1)由抗菌肽AD的氨基酸序列可推出多種不同序列的AD基因，原因是。圖中丙氨酸

A的反密碼子為5’--3’。

(2)研究人員在人工合成AD基因后，為了使AD基因與pC穿梭質(zhì)粒正確連接，設(shè)計(jì)了引物P1（由12個(gè)

脫氧核苷酸組成的正向引物，結(jié)合在AD基因的上游）和P2（由18個(gè)脫氧核苷酸組成的反向引物，結(jié)合

在AD基因的下游），通過PCR擴(kuò)增AD基因，然后與pC穿梭質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒。據(jù)圖推測引物P1

的堿基序列為5’--3’。在引物P2中，除了構(gòu)建相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列外，還構(gòu)建了2個(gè)終止

密碼子的編碼序列，以保證翻譯過程的順利進(jìn)行，推測引物P2的堿基序列為：5’--3’

(3)將AD基因重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌后，需用選擇培養(yǎng)基篩選并培養(yǎng)受體菌。從培養(yǎng)基的成分分析，該選擇

培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基的不同之處是。

(4)本研究采用的部分生物技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程，理由是。

16．（2025·重慶·三模）酵母雙雜交技術(shù)是研究活細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)之間相互作用的技術(shù)。酵母菌的轉(zhuǎn)錄激活

因子包括DNA結(jié)合域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD），這兩個(gè)結(jié)構(gòu)單獨(dú)存在時(shí)不能激活轉(zhuǎn)錄。將蛋白X與BD

融合形成“誘餌”，蛋白質(zhì)Y與AD融合稱為“獵物”，蛋白X和Y有相互作用時(shí)，兩結(jié)構(gòu)域能呈現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子

活性，從而激活報(bào)告基因的表達(dá)，原理如圖1所示。研究人員以酵母菌為受體細(xì)胞，運(yùn)用酵母雙雜交技術(shù)

找出了柑橘黃龍病致病菌分泌的SDE19蛋白在柑橘中發(fā)揮作用的靶蛋白。請回答下列問題：

注：Ampr為氨芐青霉素抗性基因，TRP基因、LEU基因分別編碼合成Trp、Leu兩種氨基酸的酶；SalI、

NdeI、EcoRI，BamHI，NotI，HindIII為酶切位點(diǎn)。

(1)研究人員將編碼SDE19蛋白基因連接到含有編碼BD多肽基因的質(zhì)粒pBD中，獲得BD-SDE19融合表

達(dá)載體。通過PCR獲取SDE19蛋白基因時(shí)，需在引物1和引物2的（“3'”或“5'”）端分別添加酶切位

點(diǎn)和。

(2)為尋找SDE19在柑橘中的靶蛋白，需要提取柑橘細(xì)胞的RNA，通過獲得cDNA，再將其插入

（“質(zhì)粒pAD”或“質(zhì)粒pBD”）中，構(gòu)建相應(yīng)表達(dá)載體。

(3)研究人員選用Trp、Leu氨基酸合成缺陷型酵母菌作為受體菌，原因是，若所利用的報(bào)告基因?yàn)闊?/p>

光蛋白基因，則含有SDE19蛋白發(fā)揮作用的靶蛋白的酵母菌菌落會(huì)表現(xiàn)為。

17．（2025·重慶萬州·模擬預(yù)測）科研團(tuán)隊(duì)為了研究番茄抗蟲基因（SIJA2）的功能，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。圖1

為SIJA2基因過表達(dá)番茄（OE）構(gòu)建的過程，圖2為SIJA2基因敲除突變番茄（KO）構(gòu)建的部分過程。

(1)圖1中，為保證過程①獲得的SIJA2基因與載體正確連接形成重組質(zhì)粒，需在SIJA2基因上游添加限制

酶的識(shí)別序列；在過程用鈣離子可以提高SLJA2基因?qū)胧荏w細(xì)胞的幾率。在過程⑤中需通

過調(diào)整（填激素名稱）的比例獲得SIJA2基因過表達(dá)番茄（OE）。

(2)圖2中，要準(zhǔn)確敲除SIJA2基因，需設(shè)計(jì)正確的向?qū)NA（sgRNA），才能準(zhǔn)確引導(dǎo)Cas9蛋白切割S