當(dāng)歸不同提取部位對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清雌二醇、孕酮、加壓素含量的影響關(guān)鍵詞：當(dāng)歸原發(fā)性痛經(jīng)雌二醇（E2）孕酮（P）加壓素（AVP）原發(fā)性痛經(jīng)是青年女性中常見的疾病之一，有統(tǒng)計(jì)分析[1]發(fā)現(xiàn)原發(fā)性痛經(jīng)的總發(fā)生率高達(dá)77.94%，嚴(yán)重影響女性生活和工作質(zhì)量。痛經(jīng)通常分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng)兩種，其中原發(fā)性痛經(jīng)（primarydysmenorrhea，PD）是指經(jīng)期前后或行經(jīng)期間出現(xiàn)的下腹痙攣性疼痛、墜脹，并有全身不適，而生殖器官沒有器質(zhì)性病變。病重時可能出現(xiàn)惡心、嘔吐、腰酸、冷汗、手足厥冷、甚至昏厥等癥狀，是年輕女性十分常見的病癥。中藥當(dāng)歸，為傘形科植物當(dāng)歸(Angelica

sinensis

(Oliv.)Diels)的干燥根。當(dāng)歸入肝、心、脾經(jīng)，藥性甘、辛、溫，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸、抗癌、抗老防老、免疫之功效，為臨床使用頻率最高的中藥之一[2-3]。常用于治療女性痛經(jīng)，多應(yīng)用復(fù)方制劑、熱敷貼及穴位貼等,而以單味藥治療痛經(jīng)者少見[4]-[5]。當(dāng)歸的主要成分有兩大類，分別為揮發(fā)油成分和水溶性成分，除此之外，還含有當(dāng)歸多糖、黃酮、19種氨基酸、23種微量元素、維生素A、磷脂、以及維生素B12等[6]。近年來，由于原發(fā)性痛經(jīng)的多發(fā)以及中藥在治療原發(fā)性痛經(jīng)方面有著良好的效果，當(dāng)歸治療原發(fā)性痛經(jīng)的止痛機(jī)制也被廣泛關(guān)注，并且有了一定的成果。但是治療原發(fā)性痛經(jīng)的止痛機(jī)制依舊是一個難題，課題組前期通過離體實(shí)驗(yàn)研究顯示，當(dāng)歸中低極性組分是當(dāng)歸松弛原發(fā)性痛經(jīng)子宮平滑肌的主要部位，本文將進(jìn)一步通過在體實(shí)驗(yàn)，探討當(dāng)歸不同提取部位對原發(fā)性痛經(jīng)的治療作用，并初步探索其止痛機(jī)制，希望能為今后的臨床工作奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)材料1.1動物：80只SPF級、8周齡性成熟未交配的雌性SD大鼠，體重150～250g。1.2試劑（見表1）表1試劑試劑公司名稱批號苯甲酸雌二醇注射液寧波三生生物科技有限公司B191001縮宮素注射液寧波三生生物科技有限公司S191118水合氯醛天津市大茂化學(xué)試劑廠20200102精氨酸布洛芬片海南贊幫制藥有限公司1001450大鼠雌激素（E）ELISA試劑盒江蘇菲亞生物科技有限公司MM-0552R1大鼠加壓素（VSS）ELISA試劑盒江蘇菲亞生物科技有限公司MM-0643R1大鼠孕激素/孕酮（PROG）ELISA試劑盒江蘇菲亞生物科技有限公司MM-0551R11.3儀器（見表2）儀器公司名稱型號酶標(biāo)分析儀南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司HBS-1096A電子秤JJ3000Y普通試管江蘇新康醫(yī)療器械有限公司--一次性使用人體靜脈血樣采集容器瀏陽市三力醫(yī)用科技發(fā)展有限公司EDTAK2電子分析天平賽多利斯科學(xué)儀器有限公司BSA224S鼓風(fēng)干燥箱上海精其儀器有限公司DHG-9070A100-1000μl移液器低溫高速冷凍離心機(jī)北京五洲東方科技發(fā)展有限公司3K151.5藥品的配置布洛芬：取布洛芬片5片（0.4g/片）于研缽中研碎，定容于純凈水至238ml，配制成0.84mg/mL的混懸液作為備用，4℃冷藏；部位1:取當(dāng)歸提取物（部位1）0.567g，加2mL吐溫-80作助溶劑，定容于蒸餾水至200ml，所得溶液濃度為2.835mg/mL，4℃冷藏備用；部位2:取當(dāng)歸提取物（部位2）0.245g，加2mL吐溫-80作助溶劑，定容于蒸餾水至200ml，所得溶液濃度為1.225mg/mL，4℃冷藏備用；部位3:取當(dāng)歸提取物（部位3）0.098g，加2mL吐溫-80作助溶劑，定容于蒸餾水至200ml，所得溶液濃度為0.49mg/mL，4℃冷藏備用；部位4:取當(dāng)歸醇提物（部位4）0.7622g，加1mL吐溫-80作助溶劑，定容于蒸餾水至200ml，所得溶液濃度為3.811mg/mL，4℃冷藏備用；部位5:取當(dāng)歸水提物（部位4）24.23g，定容于蒸餾水至200ml，所得溶液濃度為0.1212g/mL，4℃冷藏備用；實(shí)驗(yàn)方法2.1動物分組、造模及給藥將80只SD大鼠隨機(jī)分為8組，每組10只，即空白組、模型組、布洛芬組、部位1、部位2、部位3、部位4、部位5組。根據(jù)文獻(xiàn)記載方法[7]，采用苯甲酸雌二醇注射液聯(lián)合縮宮素建立大鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型。除正?？瞻捉M外，各組大鼠每天皮下注射苯甲酸雌二醇注射液，連續(xù)注射10天(第1、10天每只大鼠皮下給藥0.25mL，余日均為每只0.1mL)，末次注射后間隔24h，腹腔注射縮宮素2U/只，觀察縮宮素注射后30min內(nèi)各組大鼠扭體反應(yīng)發(fā)生的潛伏期和扭體次數(shù)，計(jì)算扭體抑制率。扭體反應(yīng)以表現(xiàn)為腹部內(nèi)凹、軀干扭曲、腹前壁緊貼籠底、臀部歪扭和后肢伸張為標(biāo)準(zhǔn)。部位1-5組大鼠在注射苯甲酸雌二醇的第5天起每天分別灌胃相應(yīng)藥物1mL/100g；陽性組給予布洛芬1ml/100g；正?？瞻捉M、模型對照組自第5天起灌胃等體積純凈水，各組均連續(xù)灌胃7天，給藥容量均為1mL/100g體重。2.2指標(biāo)觀測與方法2.2.1大體狀況、扭體潛伏期、扭體次數(shù)和及子宮系數(shù)的測定取血后，快速剝離動物新鮮子宮，用電子分析天平精密稱取并紀(jì)錄，計(jì)算子宮系數(shù)。子宮系數(shù)=子宮重量（g）/體重（g）于第11d,給予縮宮素1h后，大鼠行動遲緩、精神萎靡、唇鼻及耳緣發(fā)白、毛色雜亂無光。各組大鼠腹腔注射10％水合氯醛1mL/100g，心臟取血，每只取血兩份均為2mL，一份迅速注入抗凝試管中，低溫(4℃)3000r/min離心10min，分離血漿；另一份注入普通試管，室溫靜置4h，低溫離心3000r/min×10min，分離血清，-20℃保存。按照試劑盒說明，用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）法檢測大鼠血清雌二醇、孕酮、加壓素含量。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SEM）表示，選用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1大體狀況觀察：給藥后，陽性組及部位1、2組大鼠活動逐漸恢復(fù)正常、唇色紅潤、耳緣有血色、毛發(fā)柔順有光澤；其他3組活動依舊遲緩，無明顯變化。抑制扭體反應(yīng)的發(fā)生次數(shù)，且部位1組抑制作用最佳，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)，而部位5組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；各給藥組子宮系數(shù)無明顯差別(P>0.05)。表表3當(dāng)歸不同提取部位對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠扭體潛伏期、扭體次數(shù)的影響(，n=10）組別潛伏期（min）30min扭體次數(shù)子宮系數(shù)×103抑制率(%)正常組--2.15±0.16##-模型組3.24±0.1115.90±1.644.51±1.87**-布洛芬組7.54±0.41##10.2±0.98##4.12±1.13**35.85部位16.52±0.38##6.14±0.74##4.87±1.84**62.26部位24.27±0.14##8.77±0.91##3.40±0.41**44.79部位35.24±0.34##11.54±1.03##4.86±1.32**30.82部位48.36±0.57##13.71±1.41#3.73±0.91**13.84部位53.12±0.1314.25±1.654.94±1.99**11.95注：與正常組比較*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較#P<0.05，##P<0.01表4當(dāng)歸不同提取部位對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清P、AVP、E2的影響(，n=10）組別P（рmol/L）AVP(ng/L)E2（рmol/L)正常組211.99±41.030.98±0.24**24.28±2.09模型組146.83±22.81**1.52±0.15**29.28±3.73**布洛芬組204.54±38.44##1.08±0.14##25.60±3.70#部位1組183.93±33.68#1.21±0.23##24.57±3.35#部位2組174.72±28.95*#1.27±0.23*#26.27±4.40部位3組169.39±23.62*1.28±0.25*#26.53±3.08部位4組150.31±36.94**1.28±0.19*#27.57±3.12*部位5組150.31±23.33**1.31±0.22*#29.46±2.99**注：與正常組比較*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較#P<0.05，##P<0.01討論《藥學(xué)辭典》中說“當(dāng)歸因能調(diào)氣養(yǎng)血，使氣血各有所歸，故名曰當(dāng)歸。”現(xiàn)代藥理學(xué)表明當(dāng)歸實(shí)補(bǔ)血益氣之藥，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛的作用。當(dāng)歸多為君藥或臣藥配伍使用，配以調(diào)和氣血之品，隨證加減用于治療痛經(jīng)，常用當(dāng)歸經(jīng)典方劑有：桃紅四物湯、當(dāng)歸芍藥散、當(dāng)歸四逆湯、四物湯等。有學(xué)者[10]在當(dāng)歸治療痛經(jīng)研究進(jìn)展中提到：當(dāng)歸水溶性提取物的活性成分可以使子宮收縮，血壓下降；其揮發(fā)油能夠抑制在體子宮肌。當(dāng)歸對子宮平滑肌的雙相反應(yīng)，具有調(diào)節(jié)子宮平滑肌收縮，解除痙攣從而達(dá)到調(diào)經(jīng)止痛功效。當(dāng)歸組分對治療原發(fā)性痛經(jīng)有著積極意義，可做為治療原發(fā)性痛經(jīng)的重點(diǎn)藥物來進(jìn)行深入的研究。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，與正常組對比,模型組扭體次數(shù)顯著增多，潛伏期顯著縮短，子宮系數(shù)均明顯增高，血清P含量顯著減小而AVP、E2含量顯著增多，提示原發(fā)性痛經(jīng)模型造模成功。當(dāng)歸不同提取部位對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)度不同，在5種不同提取物中，部位1藥效最強(qiáng)，部位2次之，部位5最弱。當(dāng)歸提取部位1能顯著提高模型大鼠血清P含量，降低AVP及E2含量，提示其治療痛經(jīng)的作用機(jī)制與影響血清中P、AVP及E2的水平有關(guān)。參考文獻(xiàn)：[1]韓瑩,張巖,張春蕾.女大學(xué)生痛經(jīng)病因及證候分布規(guī)律調(diào)查分析[J].中國婦幼健康研究,2016,27(S1):393-394.[2]劉四清.當(dāng)歸治療原發(fā)性痛經(jīng)研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)急癥,2008(02):240-241.[3]王瀟.基于古今文獻(xiàn)的痛經(jīng)用藥規(guī)律研究[D].遼寧中醫(yī)藥大學(xué),2015.[4]胡文莉,刁軍成,張虹.刁軍成運(yùn)用當(dāng)歸四逆湯治療原發(fā)性痛經(jīng)經(jīng)驗(yàn)[J].江西中醫(yī)藥,2014,45(10):22-23.[5]王華.當(dāng)歸熱敷貼與當(dāng)歸穴位貼治療原發(fā)性痛經(jīng)的療效觀察[J].實(shí)用婦科內(nèi)分泌雜志(電子版),2016,3(19):138+140.[6]李素琴,李雪蕓.當(dāng)歸化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].大家健康(學(xué)術(shù)版),2016,10(02):283.[7]嵇波,張露芬,朱江,任曉暄,郭孟瑋,趙雅芳,徐莉莉,宋曉琳.痛經(jīng)模型建立和評價方法的