高中生物實驗操作流程手冊實驗一：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)一、實驗?zāi)康耐ㄟ^特定試劑與生物組織中有機物的顯色反應(yīng)，初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪和蛋白質(zhì)的方法。二、實驗原理還原糖（如葡萄糖、果糖）與斐林試劑在水浴加熱條件下生成磚紅色沉淀（Cu?O）；脂肪可被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色（或蘇丹Ⅳ染液染成紅色）；蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生紫色絡(luò)合反應(yīng)（堿性環(huán)境下，Cu2?與肽鍵結(jié)合）。三、實驗材料與用具材料：蘋果勻漿（還原糖檢測）、花生種子（脂肪檢測）、豆?jié){（蛋白質(zhì)檢測）；試劑：斐林試劑（甲液：0.1g/mLNaOH，乙液：0.05g/mLCuSO?）、蘇丹Ⅲ染液、雙縮脲試劑（A液：0.1g/mLNaOH，B液：0.01g/mLCuSO?）；用具：試管、滴管、量筒、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、刀片、毛筆、吸水紙等。四、實驗操作流程（一）還原糖的檢測1.取潔凈試管，加入2mL蘋果勻漿；2.注入1mL斐林試劑（甲液與乙液等量混合后立即使用）；3.試管放入50~65℃溫水浴中，加熱約2min，觀察顏色變化。（二）脂肪的檢測（切片法）1.切片：取花生子葉，用刀片切取最薄的薄片（毛筆蘸取最薄的一片），置于載玻片中央；2.染色：滴加2~3滴蘇丹Ⅲ染液，染色3min；3.洗去浮色：用50%酒精溶液洗去浮色（避免染液干擾觀察）；4.制片：滴1滴蒸餾水，蓋蓋玻片，吸去多余液體；5.觀察：低倍鏡找到脂肪顆粒，換高倍鏡觀察。（三）蛋白質(zhì)的檢測1.取潔凈試管，加入2mL豆?jié){；2.滴加1mL雙縮脲試劑A液，搖勻（營造堿性環(huán)境）；3.滴加4滴雙縮脲試劑B液，搖勻，觀察顏色變化。五、結(jié)果與分析還原糖檢測：試管內(nèi)出現(xiàn)磚紅色沉淀，說明含還原糖；脂肪檢測：顯微鏡下可見橘黃色（或紅色）的脂肪顆粒；蛋白質(zhì)檢測：溶液變?yōu)樽仙?，說明含蛋白質(zhì)。六、注意事項1.斐林試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，甲、乙液混合后易沉淀，放置過久影響效果；2.花生切片需盡量薄，否則細(xì)胞重疊，難以觀察脂肪顆粒；3.雙縮脲試劑A液與B液不可混合后使用，需先加A液。實驗二：觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布一、實驗?zāi)康耐ㄟ^甲基綠-吡羅紅染色，觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布位置。二、實驗原理甲基綠對DNA親和力強，使其呈綠色；吡羅紅對RNA親和力強，使其呈紅色。混合染色劑可同時顯示兩者分布。三、實驗材料與用具材料：人的口腔上皮細(xì)胞（或洋蔥鱗片葉內(nèi)表皮細(xì)胞）；試劑：0.9%NaCl溶液（維持細(xì)胞形態(tài)）、8%鹽酸（改變膜通透性，使DNA與蛋白質(zhì)分離）、甲基綠-吡羅紅混合染色劑；用具：載玻片、蓋玻片、顯微鏡、消毒牙簽、燒杯、酒精燈、吸水紙等。四、實驗操作流程（一）制片1.載玻片上滴一滴0.9%NaCl溶液；2.消毒牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞，涂抹于NaCl溶液中，蓋蓋玻片。（二）水解載玻片放入8%鹽酸的小燒杯中，30℃水浴保溫5min（鹽酸改變膜通透性，使DNA與蛋白質(zhì)分離）。（三）沖洗蒸餾水緩水流沖洗載玻片10s（避免細(xì)胞被沖走）。（四）染色吸去水分，滴加2滴甲基綠-吡羅紅混合染色劑，染色5min。（五）觀察低倍鏡找到染色均勻、色澤淺的細(xì)胞，換高倍鏡觀察：細(xì)胞核呈綠色（DNA主要分布區(qū)），細(xì)胞質(zhì)呈紅色（RNA主要分布區(qū)）。五、注意事項1.口腔上皮細(xì)胞制片時，避免牙簽刮破黏膜；2.水解時間不宜過長，否則細(xì)胞被鹽酸破壞；3.染色劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，混合后避光保存（吡羅紅易氧化）。實驗三：觀察植物細(xì)胞的有絲分裂一、實驗?zāi)康挠^察洋蔥根尖分生區(qū)細(xì)胞的有絲分裂過程，識別分裂間期和分裂期的不同時期。二、實驗原理高等植物根尖分生區(qū)細(xì)胞能進(jìn)行有絲分裂，通過解離→漂洗→染色→制片，可使細(xì)胞分散開，便于觀察染色體的形態(tài)和分布。龍膽紫（或醋酸洋紅）可將染色體染成深色。三、實驗材料與用具材料：洋蔥（或大蒜）根尖；試劑：15%鹽酸+95%酒精（解離液，1:1混合）、0.01g/mL龍膽紫溶液（或醋酸洋紅液）；用具：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、滴管、解離缸、培養(yǎng)皿等。四、實驗操作流程（一）解離剪取洋蔥根尖2~3mm（分生區(qū)，乳白色、正方形、排列緊密），放入解離液中解離3~5min（使組織細(xì)胞相互分離）。（二）漂洗鑷子取出根尖，放入清水的培養(yǎng)皿中漂洗約10min（洗去解離液，防止解離過度，便于染色）。（三）染色根尖放入龍膽紫溶液的培養(yǎng)皿中，染色3~5min（使染色體著色）。（四）制片1.載玻片滴一滴清水，染色后的根尖放在載玻片上，鑷子尖把根尖弄碎；2.蓋蓋玻片，再加一片載玻片，拇指輕輕按壓（使細(xì)胞分散開，避免重疊）。（五）觀察1.低倍鏡觀察：找到分生區(qū)細(xì)胞（細(xì)胞呈正方形，排列緊密，有的細(xì)胞正在分裂）；2.高倍鏡觀察：識別分裂間期（細(xì)胞核大、染色質(zhì)疏松）和分裂期的前期、中期、后期、末期（染色體形態(tài)清晰）。五、注意事項1.解離時間需控制：過短則細(xì)胞未分散，過長則細(xì)胞被破壞；2.漂洗要充分，否則解離液殘留會影響染色效果；3.壓片時力度適中，避免壓碎蓋玻片，同時確保細(xì)胞充分分散。實驗四：探究溫度對酶活性的影響一、實驗?zāi)康耐ㄟ^淀粉酶催化淀粉水解的實驗，探究溫度對酶活性的影響。二、實驗原理淀粉酶可催化淀粉水解為麥芽糖，淀粉遇碘變藍(lán)，麥芽糖遇碘不變藍(lán)。通過檢測不同溫度下淀粉的剩余量，可判斷酶活性的變化（溫度過高或過低會影響酶的空間結(jié)構(gòu)，從而影響活性）。三、實驗材料與用具材料：新鮮淀粉酶溶液（或市售α-淀粉酶）、可溶性淀粉溶液；試劑：碘液；用具：試管、量筒、滴管、水浴鍋（或大燒杯）、溫度計、秒表等。四、實驗操作流程（一）設(shè)置溫度梯度取3支試管，編號1、2、3，各加2mL可溶性淀粉溶液；另取3支試管，編號A、B、C，各加1mL新鮮淀粉酶溶液。（二）溫度處理試管1和A放入0℃（冰浴）環(huán)境；試管2和B放入37℃（淀粉酶最適溫度）水浴；試管3和C放入100℃（沸水?。┉h(huán)境；保溫5min（使酶和底物分別達(dá)到預(yù)設(shè)溫度）。（三）混合反應(yīng)A中淀粉酶倒入試管1，B倒入試管2，C倒入試管3，振蕩后，原溫度下保溫10min。（四）檢測結(jié)果向3支試管各滴加2滴碘液，觀察顏色變化：試管1（低溫）：溶液變藍(lán)（淀粉未被充分水解，酶活性受抑制）；試管2（適溫）：溶液不變藍(lán)（淀粉被完全水解，酶活性高）；試管3（高溫）：溶液變藍(lán)（酶變性失活，淀粉未水解）。五、注意事項1.實驗需嚴(yán)格控制單一變量：淀粉和淀粉酶的量、保溫時間等需保持一致；2.酶和底物需分別預(yù)熱到預(yù)設(shè)溫度后再混合，避免溫度變化影響結(jié)果；3.碘液檢測時，需待反應(yīng)充分后再滴加，且滴加量不宜過多（避免影響顏色觀察）。實驗五：探究酵母菌細(xì)胞呼吸的方式一、實驗?zāi)康耐ㄟ^對比酵母菌在有氧和無氧條件下的呼吸產(chǎn)物，探究細(xì)胞呼吸的方式。二、實驗原理酵母菌是兼性厭氧菌，有氧時進(jìn)行有氧呼吸，產(chǎn)生CO?和H?O；無氧時進(jìn)行無氧呼吸，產(chǎn)生CO?和酒精。CO?可使澄清石灰水變渾濁，或使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃（變黃時間越短，CO?產(chǎn)生量越多）；酒精可使酸性重鉻酸鉀溶液由橙色變?yōu)榛揖G色。三、實驗材料與用具材料：新鮮酵母菌培養(yǎng)液；試劑：澄清石灰水（或溴麝香草酚藍(lán)溶液）、酸性重鉻酸鉀溶液（濃硫酸與重鉻酸鉀按體積比1:3混合）；用具：錐形瓶、橡皮塞、玻璃導(dǎo)管、試管、量筒、滴管等。四、實驗操作流程（一）裝置搭建（有氧組）1.錐形瓶甲加10mL酵母菌培養(yǎng)液和20mL葡萄糖溶液；2.連接導(dǎo)管，向甲中持續(xù)通入無菌空氣（保證有氧環(huán)境），導(dǎo)管另一端通入盛有澄清石灰水的試管乙中。（二）裝置搭建（無氧組）1.錐形瓶丙加10mL酵母菌培養(yǎng)液和20mL葡萄糖溶液，密封瓶口；2.導(dǎo)管一端插入培養(yǎng)液上方空間，另一端通入盛有澄清石灰水的試管丁中（導(dǎo)管不可插入液面下，避免液體倒吸）。（三）實驗觀察1.觀察石灰水渾濁程度：有氧組（乙）渾濁速度快、程度高（CO?產(chǎn)生多）；無氧組（?。啙崴俣嚷⒊潭鹊?；2.檢測酒精：實驗結(jié)束后，取甲、丙中培養(yǎng)液各2mL，分別加入酸性重鉻酸鉀溶液：甲（有氧組）：溶液仍為橙色（無酒精產(chǎn)生）；丙（無氧組）：溶液變?yōu)榛揖G色（有酒精產(chǎn)生）。五、注意事項1.通入的空氣需先滅菌（可用NaOH溶液除去CO?，避免干擾）；2.無氧組裝置需密封良好，且反應(yīng)