ICS65.020.01

CCSB16

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內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T2559—2022

油菜抗黑脛病室內(nèi)鑒定技術(shù)規(guī)程

Technicalcodeofpracticeforindoorresistanceevaluationof

canolaagainstleptosphaeriabiglobosa

2022-05-25發(fā)布2022-06-25實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T2559—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC20）歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院、特泥河農(nóng)牧場(chǎng)有限公司。

本文件主要起草人：宋培玲、李子欽、楊永青、燕孟嬌、皇甫海燕、賈曉清、皇甫九茹、郭晨、趙

麗麗、史志丹。

I

DB15/T2559—2022

油菜抗黑脛病室內(nèi)鑒定技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了油菜黑脛病的室內(nèi)鑒定技術(shù)中孢子懸浮液制備、接種方法、病情調(diào)查及抗病性評(píng)價(jià)和

鑒定的方法。

本文件適用于內(nèi)蒙古油菜生產(chǎn)品種、新育成品-種、區(qū)域試驗(yàn)品種、親本及育種中間材料的黑脛病

抗性鑒定和抗性評(píng)價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

油菜黑脛病phomastemcanker

小球腔菌屬Leptosphaeriabiglobosa侵染引起的油菜病害。

L.biglobosa侵染葉片后，形成具有黃色外緣的典型病斑，病斑內(nèi)含有黑色分生孢子器。患病莖稈，

在莖上部形成灰白色病斑，其上有黑色分生孢子器，病斑具有黑色邊界。

4病原菌

病原菌來(lái)源

病原菌從內(nèi)蒙古油菜地中發(fā)病植株上分離獲得，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子水平鑒定為（L.biglobosa），

中等致病力。

病原菌的培養(yǎng)及孢子懸浮液的制備

將低溫保存的黑脛病菌菌絲體接種在PDA平板上，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中活化培養(yǎng)。培養(yǎng)14d后，

將3ml～5mL無(wú)菌水加在已產(chǎn)孢的L．biglobosa平板內(nèi)，靜置10min，無(wú)菌載玻片輕刮平板表面，使

分生孢子充分釋放并懸浮于無(wú)菌水中，2層無(wú)菌紗布過(guò)濾獲得孢子懸浮液，利用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并將濃

度調(diào)整為1×107個(gè)/mL，備用。

5鑒定品種幼苗培養(yǎng)

將供試材料的種子播種在裝有無(wú)菌土的營(yíng)養(yǎng)缽（13cm×13cm）中，每個(gè)品種播種3缽，每缽播10

粒，置于25℃、16h/8h（光照/黑暗）條件下，待油菜長(zhǎng)出兩片子葉時(shí)，用于接種。

1

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6抗病性鑒定

子葉穿刺接種

7

油菜子葉期，用無(wú)菌針在子葉中央輕刺一下，傷口處接種10μL1×10個(gè)/mL黑脛病菌孢子懸浮

液，同時(shí)以接種等量無(wú)菌水為對(duì)照。接種后，套上內(nèi)部濕潤(rùn)的塑料袋，21℃下黑暗保濕培養(yǎng)48h以

上。

病情調(diào)查

接種10d后，根據(jù)油菜黑脛病子葉接種鑒定病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（表1）對(duì)接種葉片進(jìn)行調(diào)查，并計(jì)算病

情指數(shù)。

表1油菜黑脛病子葉接種鑒定病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

病級(jí)癥狀

0接種點(diǎn)周圍無(wú)癥狀可見(jiàn)

1接種點(diǎn)周圍呈輕微黑色，有黃色暈圈

3接種點(diǎn)周圍出現(xiàn)1.5-3.0mm壞死斑，或有黃色暈圈，有的產(chǎn)生孢子

5接種點(diǎn)周圍出現(xiàn)3.0-6.0mm壞死斑，有的壞死組織有明顯的邊緣

7組織灰綠色萎蔫，3.0-6.0mm壞死斑，有明顯的邊緣，有的形成分生孢子器

9病斑腐爛，葉片枯死，上面有大量的分生孢子器

病情指數(shù)（ID）計(jì)算公式：

………………（1）

式中：

ID——病情指數(shù)；

i——病害級(jí)別，i=0,1,3,.....，n（0——健株級(jí)別；n——最嚴(yán)重病害級(jí)別）；

Xi——第i級(jí)的病株數(shù)（i=0時(shí)，X0為0級(jí)健株數(shù)）；

∑——求和號(hào)，∑表示對(duì)它后面的變量（i×Xi）求和，即從第一個(gè)（i=1）累加到最后一個(gè)（n）；

n

∑Xi一一調(diào)查總株數(shù)（病株和健株）。

i=1

品種抗性水平劃分

依據(jù)病情指數(shù)計(jì)算公式計(jì)算病情指數(shù)，根據(jù)表2進(jìn)行油菜抗黑脛病等級(jí)劃分。

2

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表2油菜黑脛病抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

抗病性病情指數(shù)抗病性病情指數(shù)

高抗(HＲ)DI=0低感(LS)40＜DI≤60

中抗(MＲ)0＜DI≤20中感(MS)60＜DI≤80

低抗(LＲ)20＜DI≤40高感(HS)DI＞80

3

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參考文獻(xiàn)

[1]李欣洲,宋培玲,郝麗芬等.油菜黑脛病菌(Leptosphaeriabiglobosa)侵染條件研究[J].華北

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[2]DelwichePA．Geneticaspectsofblackleg(Leptosphaeriamaculans)resistancein

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[3]SomdaI，RenardM，BrunH．SeedlingandadultplantreactionsofBrassicanapus-