心肌三項(xiàng)（cTnI、CK-MB、MYO）檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）心肌三項(xiàng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）文件編號(hào)：LAB-SOP-CARD-001版本號(hào)：V1.0生效日期：__________適用范圍：本規(guī)程適用于臨床實(shí)驗(yàn)室采用免疫層析法/化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行血清、血漿樣本中心肌肌鈣蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌紅蛋白（MYO）的定性/定量檢測(cè)，用于急性冠脈綜合征（ACS）、心肌梗死（MI）等疾病的輔助診斷與病情監(jiān)測(cè)。一、檢測(cè)原理1.心肌肌鈣蛋白I（cTnI）采用雙抗體夾心免疫法：樣本中cTnI與試劑中包被的特異性單克隆抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，通過(guò)檢測(cè)酶促反應(yīng)信號(hào)（如化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度、吸光度），與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。特異性：僅與心肌細(xì)胞特有的cTnI結(jié)合，骨骼肌損傷不干擾檢測(cè)（交叉反應(yīng)率＜1%）。2.肌酸激酶同工酶（CK-MB）采用免疫抑制法/夾心酶聯(lián)免疫法：免疫抑制法：試劑中抗體抑制CK-MM、CK-BB活性，僅檢測(cè)CK-MB的酶活性；夾心免疫法：通過(guò)抗CK-M亞基和抗CK-B亞基抗體特異性捕獲CK-MB，結(jié)合酶標(biāo)記物檢測(cè)信號(hào)。3.肌紅蛋白（MYO）免疫比濁法/化學(xué)發(fā)光法：樣本中MYO與試劑中特異性抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，導(dǎo)致反應(yīng)液濁度變化或產(chǎn)生發(fā)光信號(hào)，信號(hào)強(qiáng)度與MYO濃度成正比。特點(diǎn)：MYO是心肌損傷早期標(biāo)志物，發(fā)病后1-3小時(shí)即可升高。二、樣本要求1.樣本類型血清：靜脈采血后37℃靜置30分鐘，3000r/min離心10分鐘分離，避免溶血；血漿：采用EDTA-K2、肝素鋰抗凝管采血，采血后1小時(shí)內(nèi)離心分離，禁止使用枸櫞酸鈉抗凝。2.樣本保存與運(yùn)輸新鮮樣本：采集后2-8℃保存，24小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)；長(zhǎng)期保存：-20℃冷凍保存（可保存1個(gè)月），避免反復(fù)凍融（≤3次）；運(yùn)輸條件：2-8℃冷藏運(yùn)輸，避免劇烈震蕩和高溫環(huán)境。3.樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸樣本（影響檢測(cè)信號(hào)）；樣本量不足（低于試劑要求最低用量，通?！?0μL）；樣本容器破損、標(biāo)簽?zāi)：蛐畔⒉蝗?；保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或反復(fù)凍融導(dǎo)致樣本變質(zhì)。三、試劑與儀器準(zhǔn)備1.試劑要求試劑選擇：使用經(jīng)NMPA批準(zhǔn)的配套試劑盒，需在有效期內(nèi)，儲(chǔ)存條件符合試劑說(shuō)明書(shū)（通常2-8℃避光保存，禁止冷凍）；試劑組成：包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、檢測(cè)試劑（包被板/反應(yīng)液、酶標(biāo)抗體、底物液等），按說(shuō)明書(shū)復(fù)溶或平衡至室溫（通常20-25℃，平衡30分鐘）。2.儀器準(zhǔn)備儀器類型：全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀、半自動(dòng)酶標(biāo)儀、免疫層析讀數(shù)儀等，需經(jīng)校準(zhǔn)且在檢定有效期內(nèi)；儀器操作：開(kāi)機(jī)前檢查儀器狀態(tài)（電源、耗材、廢液桶）；按儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行預(yù)熱（通常15-30分鐘）；加載試劑和樣本，確保試劑通道、樣本位與檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)應(yīng)。3.校準(zhǔn)與質(zhì)控校準(zhǔn)：新試劑啟用、儀器維修后、檢測(cè)結(jié)果異常時(shí)需進(jìn)行校準(zhǔn)，使用試劑盒配套校準(zhǔn)品，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2≥0.995）；質(zhì)控：每次檢測(cè)需同步運(yùn)行高、中、低三個(gè)濃度質(zhì)控品，質(zhì)控結(jié)果需在允許范圍內(nèi)（通?！?SD），記錄質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)并繪制質(zhì)控圖，失控時(shí)需查找原因（如試劑失效、儀器誤差）并糾正后重新檢測(cè)。四、操作步驟（以化學(xué)發(fā)光法為例）1.樣本處理取出冷凍樣本，室溫解凍后輕輕顛倒混勻，3000r/min離心5分鐘去除沉淀；按試劑說(shuō)明書(shū)要求稀釋樣本（如需），稀釋液使用試劑盒配套產(chǎn)品，避免交叉污染。2.檢測(cè)操作取反應(yīng)杯，加入校準(zhǔn)品/質(zhì)控品/樣本各50μL；加入檢測(cè)試劑（酶標(biāo)抗體）50μL，振蕩混勻（300r/min，1分鐘），37℃孵育15分鐘；洗滌反應(yīng)杯3次（使用洗滌液，每次浸泡30秒，棄盡廢液）；加入底物液100μL，振蕩混勻，37℃避光孵育10分鐘；加入終止液（如為酶促反應(yīng)），或直接放入儀器檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度；儀器自動(dòng)讀取信號(hào)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中cTnI、CK-MB、MYO濃度。3.操作注意事項(xiàng)所有操作需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，佩戴手套、口罩，避免樣本接觸皮膚和黏膜；試劑加樣需準(zhǔn)確，避免氣泡產(chǎn)生，加樣順序嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)；孵育溫度和時(shí)間需精準(zhǔn)控制，避免影響反應(yīng)效率；洗滌步驟需徹底，避免殘留抗體導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，反應(yīng)杯按醫(yī)療廢棄物處理，儀器進(jìn)行清潔維護(hù)（如擦拭臺(tái)面、沖洗管路）。五、結(jié)果判讀與報(bào)告1.參考區(qū)間（成人）檢測(cè)項(xiàng)目參考區(qū)間（定量）定性判斷標(biāo)準(zhǔn)cTnI＜0.04ng/mL（不同試劑略有差異）陰性：＜臨界值；陽(yáng)性：≥臨界值CK-MB＜5ng/mL（質(zhì)量法）；＜25U/L（活性法）陰性：＜臨界值；陽(yáng)性：≥臨界值MYO男性：20-80ng/mL；女性：10-70ng/mL陰性：＜臨界值；陽(yáng)性：≥臨界值注：臨界值（Cut-off值）按試劑說(shuō)明書(shū)設(shè)定，通常cTnI≥0.04ng/mL提示心肌損傷，需結(jié)合臨床癥狀判斷。2.結(jié)果解讀（1）急性心肌梗死（AMI）診斷流程檢測(cè)時(shí)間（發(fā)病后）MYOCK-MBcTnI臨床意義0-3小時(shí)升高（早期標(biāo)志物）正常/輕度升高正常/輕度升高排除AMI（MYO陰性可初步排除）6-12小時(shí)達(dá)峰值明顯升高明顯升高確診AMI（cTnI特異性最高）24-48小時(shí)逐漸下降達(dá)峰值后下降持續(xù)升高（4-7天）監(jiān)測(cè)病情變化，判斷再梗死（再次升高）（2）結(jié)果異常分析cTnI升高+CK-MB升高+MYO升高：高度提示AMI，需結(jié)合心電圖、臨床癥狀確診；cTnI升高+CK-MB正常+MYO正常：可能為非ST段抬高型心梗（NSTEMI）、心肌炎、心力衰竭等，需進(jìn)一步檢查；MYO升高+CK-MB正常+cTnI正常：可能為骨骼肌損傷、腎功能不全、肺栓塞等，需排除非心肌因素。3.報(bào)告發(fā)放報(bào)告內(nèi)容：患者信息（姓名、性別、年齡、病歷號(hào)）、樣本信息（采集時(shí)間、樣本類型）、檢測(cè)項(xiàng)目、結(jié)果數(shù)值、參考區(qū)間、臨界值、檢測(cè)時(shí)間、報(bào)告人、審核人；報(bào)告審核：需由具備資質(zhì)的檢驗(yàn)醫(yī)師審核，確認(rèn)結(jié)果無(wú)誤、無(wú)干擾因素后發(fā)放；危急值報(bào)告：cTnI≥0.5ng/mL（或試劑設(shè)定的危急值）時(shí)，需立即通知臨床醫(yī)生（30分鐘內(nèi)），并記錄通知時(shí)間和接收人。六、質(zhì)量控制與安全管理1.質(zhì)量控制要點(diǎn)人員要求：操作人員需經(jīng)培訓(xùn)合格后上崗，熟悉試劑和儀器原理，嚴(yán)格遵循SOP操作；環(huán)境控制：實(shí)驗(yàn)室溫度18-25℃，濕度40%-60%，避免強(qiáng)光、粉塵和電磁干擾；交叉污染控制：使用一次性耗材（反應(yīng)杯、吸頭），不同項(xiàng)目、不同樣本分開(kāi)處理，吸頭更換后再進(jìn)行下一次加樣；結(jié)果復(fù)核：對(duì)異常結(jié)果（如超出參考區(qū)間3倍以上、與臨床癥狀不符）需重新檢測(cè)，必要時(shí)更換試劑或儀器驗(yàn)證。2.安全管理生物安全：樣本、試劑均為潛在生物危害物質(zhì)，操作時(shí)穿戴個(gè)人防護(hù)用品（PPE），實(shí)驗(yàn)廢棄物按醫(yī)療廢棄物分類處理（高壓滅菌后丟棄）；化學(xué)安全：底物液、終止液等化學(xué)試劑避免接觸皮膚和眼睛，如發(fā)生泄漏，用吸水紙吸附后按規(guī)定消毒處理；儀器安全：嚴(yán)格按儀器操作規(guī)程操作，避免違規(guī)操作導(dǎo)致儀器損壞或人員受傷，定期進(jìn)行儀器維護(hù)保養(yǎng)并記錄。七、廢棄物處理與儀器維護(hù)1.廢棄物處理生物廢棄物：使用后的反應(yīng)杯、吸頭、樣本殘留液等，放入黃色醫(yī)療廢棄物袋，高壓滅菌（121℃，30分鐘）后交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理；化學(xué)廢棄物：底物液、終止液等化學(xué)試劑廢液，收集于專用容器，按化學(xué)廢棄物分類處理（如酸性廢液與堿性廢液分開(kāi)收集），禁止直接排放；固體廢棄物：試劑包裝盒、說(shuō)明書(shū)等，按生活垃圾處理，可回收材料分類回收。2.儀器維護(hù)日常維護(hù)：每次檢測(cè)結(jié)束后，清潔儀器加樣針、反應(yīng)槽，沖洗管路，更換廢液桶；定期維護(hù)：每周清潔儀器光學(xué)系統(tǒng)、校準(zhǔn)機(jī)械臂；每月檢查儀器管路是否堵塞，更換耗材（如濾膜）；每年聯(lián)系廠家進(jìn)行全面校準(zhǔn)和維護(hù)；維護(hù)記錄：詳細(xì)記錄