ICS65.020.20

CCSB31

1402

大同市地方標準

DB1402/T9—2023

黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)技術(shù)規(guī)程

2023-8-21發(fā)布2023-11-21實施

大同市市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB1402/T9—2023

目次

前言..................................................................................II

1范圍................................................................................1

2規(guī)范性引用文件......................................................................1

3術(shù)語和定義..........................................................................1

4試驗材料............................................................................1

4.1材料............................................................................1

4.2試劑............................................................................1

4.3儀器設(shè)備........................................................................2

5操作流程............................................................................2

5.1外植體的處理....................................................................2

5.2培養(yǎng)基配置......................................................................2

5.3滅菌............................................................................2

5.4接種............................................................................2

5.5轉(zhuǎn)接............................................................................2

5.6生根培養(yǎng)........................................................................2

6生產(chǎn)檔案............................................................................2

I

DB1402/T9—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。

本文件由大同市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出、組織實施和監(jiān)督檢查。

本文件由大同市農(nóng)業(yè)標準化技術(shù)委員會（DTS/TC01）歸口。

本文件起草單位：山西農(nóng)業(yè)大學高寒區(qū)作物研究所。

本文件主要起草人：李小玉、邢寶龍、沈日敏、盧瑤、岳新麗、王慧、馬濤、孟璐、張知、王力、

馮婧。

II

DB1402/T9—2023

黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)的術(shù)語和定義、試驗材料、操作流程及生產(chǎn)檔案。

本文件適用于黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

LY/T1882-2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

NY/T1606-2008馬鈴薯種薯生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程

NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

LY/T1882-2010、NY/T2306-2013等界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。為便于使用，以下

重復列出了LY/T1882-2010、NY/T2306-2013中的某些術(shù)語和定義。

3.1

黃花菜

黃花菜（HemerocalliscitrinaBar.）學名萱草，又名金針菜，屬阿福花科萱草屬宿根草本植物。

3.2

植物組織培養(yǎng)

在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質(zhì)體，在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，

使其再生新植株的過程和技術(shù)。

[來源：LY/T1882-2010，3.2]

3.3

幼葉培養(yǎng)

以植物葉片為外植體，通過植物組織培養(yǎng)的方式獲得完整植株的一種生物技術(shù)。

[來源：NY/T2306-2013，3.4]

4試驗材料

4.1材料

應(yīng)以黃花菜幼葉為外植體。

4.2試劑

MS、1/2MS培養(yǎng)基（不含瓊脂和糖）、生長素類的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、

吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、細胞分裂素類6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）、3%蔗糖、粉末瓊脂（5

1

DB1402/T9—2023

g/L）、氫氧化鈉（NaOH）。

4.3儀器設(shè)備

萬分之一分析電子天平、立式壓力蒸汽滅菌鍋、移液槍、精度0.1g的天平、超凈工作臺。

5操作流程

5.1外植體的處理

5.1.1外植體剝離

將剛發(fā)芽的黃花菜幼苗剪去老根，根冠表皮切除，剝離葉片直至露出黃綠色嫩葉，用洗潔精清洗，

紗布包裹在流水下沖洗12h。經(jīng)上述處理后，將幼葉放進超凈工作臺，待用。

5.1.2幼葉的消毒

在超凈工作臺上，先用75%的酒精對幼葉處理30s；再用0.1%的升汞溶液對幼葉滅菌8min，無菌

水浸洗5次，每次1min～2min；消毒后用濾紙將幼葉表面的水分吸干，然后放到培養(yǎng)基上進行誘導愈

傷培養(yǎng)。

5.2培養(yǎng)基配置

以MS（誘導培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)）作基本培養(yǎng)基附加不同激素組合：

a)誘導幼葉愈傷組織最適培養(yǎng)基：MS+2,4-D（2.0mg/L）+6-BA（0.1mg/L）；

b)幼葉愈傷組織分化培養(yǎng)基：MS+6-BA（2.0mg/L）+IBA（0.5mg/L）；

c)生根培養(yǎng)基：MS+NAA（0.5mg/L）。

5.3滅菌

將分裝好的培養(yǎng)基放入滅菌鍋內(nèi)消毒。消毒過程應(yīng)按滅菌鍋的使用技術(shù)規(guī)程操作，滅菌氣壓采用

0.1MPa，溫度采用121℃，消毒時間20min。

5.4接種

在超凈工作臺中完成接種，接種于誘導幼葉愈傷組織中，葉片需背面朝上放置。每瓶接種4個幼葉

外植體，接種后置于培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)7d～10d，培養(yǎng)溫度為22℃～26℃，光照強度為2000lx～2500

lx。

5.5轉(zhuǎn)接

誘導培養(yǎng)25d～30d后，轉(zhuǎn)接到幼葉愈傷組織分