病理科病理切片預(yù)處理規(guī)范演講人：日期:目錄CONTENTS標(biāo)本接收與登記1組織標(biāo)本處理2脫水與透明化3浸蠟與包埋4切片制作5染色與封片6標(biāo)本接收與登記Part.01完整性檢查核對(duì)標(biāo)本容器是否密封完好，標(biāo)簽信息與申請(qǐng)單是否一致，確保無(wú)滲漏或破損。標(biāo)本類(lèi)型確認(rèn)固定狀態(tài)評(píng)估時(shí)效性驗(yàn)證標(biāo)本驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)臨床需求驗(yàn)證標(biāo)本類(lèi)型（如組織、細(xì)胞學(xué)或液體標(biāo)本），并評(píng)估其是否符合檢測(cè)要求。檢查標(biāo)本是否充分浸泡在足量固定液中，避免自溶或腐敗影響后續(xù)制片質(zhì)量。確保標(biāo)本在采集后規(guī)定時(shí)間內(nèi)送達(dá)，避免因延遲處理導(dǎo)致組織降解或抗原丟失。雙編號(hào)系統(tǒng)采用病理號(hào)+標(biāo)本號(hào)的雙重標(biāo)識(shí)規(guī)則，避免混淆或重復(fù)，確保全程可追溯。電子化錄入條碼化標(biāo)簽異常處理流程學(xué)生社團(tuán)活動(dòng)總結(jié)內(nèi)頁(yè)標(biāo)題使用防水防脫落的條碼標(biāo)簽，包含患者姓名、標(biāo)本部位及采集日期等關(guān)鍵信息。通過(guò)LIS系統(tǒng)自動(dòng)生成唯一識(shí)別碼，并與HIS系統(tǒng)對(duì)接實(shí)現(xiàn)信息同步更新。對(duì)標(biāo)識(shí)模糊或缺失的標(biāo)本啟動(dòng)復(fù)核程序，需臨床科室重新確認(rèn)并補(bǔ)錄信息。電子簽名確認(rèn)交接雙方需在LIS系統(tǒng)中完成電子簽名，記錄接收時(shí)間、標(biāo)本狀態(tài)及異常備注。問(wèn)題標(biāo)本登記多環(huán)節(jié)核對(duì)在登記、分揀、預(yù)處理等環(huán)節(jié)執(zhí)行“三查七對(duì)”，確保患者信息與標(biāo)本一一對(duì)應(yīng)。自動(dòng)化預(yù)警信息交接記錄建立專(zhuān)項(xiàng)登記簿記錄信息不全、標(biāo)識(shí)錯(cuò)誤或質(zhì)量不合格標(biāo)本，并追蹤整改結(jié)果。設(shè)置標(biāo)本超時(shí)未處理提醒功能，通過(guò)系統(tǒng)推送警示信息至相關(guān)責(zé)任人。組織標(biāo)本處理Part.02避免使用非標(biāo)準(zhǔn)固定劑乙醇類(lèi)固定劑會(huì)導(dǎo)致組織過(guò)度收縮，含重金屬固定液可能干擾后續(xù)免疫組化檢測(cè)結(jié)果，需嚴(yán)格遵循病理技術(shù)指南。中性緩沖福爾馬林為首選其pH值穩(wěn)定在7.2-7.4之間，能有效保存蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與核酸完整性，適用于絕大多數(shù)常規(guī)病理檢查需求。特殊組織需專(zhuān)用固定液如電鏡標(biāo)本需采用戊二醛固定液，骨髓活檢推薦使用B5固定液以保持細(xì)胞形態(tài)，脂肪組織建議使用甲醛鈣溶液防止脂質(zhì)溶解。固定液選擇標(biāo)準(zhǔn)固定時(shí)間與溫度控制常規(guī)標(biāo)本固定參數(shù)組織塊厚度≤5mm時(shí)需完全浸沒(méi)于10倍體積固定液中，維持環(huán)境溫度20-25℃條件下處理6-48小時(shí)，確保滲透深度達(dá)到組織核心。對(duì)于直徑超過(guò)3cm的器官標(biāo)本，需進(jìn)行冠狀面剖開(kāi)并延長(zhǎng)固定時(shí)間至72小時(shí)以上，必要時(shí)采用灌注固定技術(shù)保證內(nèi)部組織固定質(zhì)量。嚴(yán)禁將固定標(biāo)本置于0℃以下環(huán)境，低溫會(huì)導(dǎo)致冰晶損傷細(xì)胞結(jié)構(gòu)；高于30℃環(huán)境會(huì)加速固定液揮發(fā)，需使用密閉容器并配備溫度監(jiān)控系統(tǒng)。大體積標(biāo)本處理規(guī)范溫度敏感性控制標(biāo)本修整規(guī)范解剖學(xué)定位標(biāo)記要求所有切除標(biāo)本必須保留至少1處解剖學(xué)標(biāo)志（如漿膜面、切緣等），使用不同顏色染料標(biāo)記方位，復(fù)雜器官需繪制三維示意圖存檔。特殊處理注意事項(xiàng)鈣化組織需先進(jìn)行脫鈣處理，骨組織采用甲酸-甲醛復(fù)合脫鈣液；含氣臟器應(yīng)進(jìn)行負(fù)壓抽吸處理，確保后續(xù)石蠟包埋質(zhì)量。標(biāo)準(zhǔn)化取材厚度診斷性取材組織塊厚度嚴(yán)格控制在2-3mm范圍，腫瘤標(biāo)本需包含病灶中心、邊緣及正常組織過(guò)渡區(qū)，每塊組織面積不大于2.5cm×2.0cm。脫水與透明化Part.03梯度酒精脫水流程采用逐步遞增的酒精濃度（如從30%開(kāi)始），避免組織因快速脫水導(dǎo)致收縮變形，需確保每級(jí)酒精完全滲透至組織內(nèi)部。低濃度酒精起始處理依次使用50%、70%、90%酒精進(jìn)行中間脫水，每級(jí)處理需保證組織水分被充分置換，同時(shí)監(jiān)測(cè)組織硬度變化以防過(guò)度硬化。中高濃度酒精過(guò)渡最后以100%無(wú)水酒精徹底清除殘余水分，需重復(fù)兩次以確保脫水徹底，避免后續(xù)透明化階段出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。無(wú)水酒精終末脫水透明劑使用規(guī)范透明劑首選高純度二甲苯，其折射率與石蠟接近，能有效置換酒精并使組織透明化，使用前需過(guò)濾去除雜質(zhì)。將組織依次浸入50%二甲苯混合液、純二甲苯中，每階段需觀察組織透明度變化，避免透明時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致組織脆化。透明劑需在通風(fēng)櫥中操作，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)佩戴防化手套及護(hù)目鏡，廢液需分類(lèi)收集并交由專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)處理。二甲苯優(yōu)選原則分階段透明化操作安全防護(hù)措施組織類(lèi)型差異化處理實(shí)驗(yàn)室需維持恒溫（22±2℃）和濕度<40%，高溫高濕環(huán)境需同步調(diào)整脫水透明化時(shí)間參數(shù)。環(huán)境溫濕度調(diào)控實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與記錄采用數(shù)字化流程跟蹤系統(tǒng)記錄各步驟實(shí)際耗時(shí)，對(duì)異常情況（如組織發(fā)白）立即中斷流程并檢查試劑有效性。致密組織（如肌肉）需延長(zhǎng)每級(jí)脫水時(shí)間至普通組織的1.5倍，而疏松組織（如肺臟）應(yīng)縮短時(shí)間防止結(jié)構(gòu)松散。時(shí)間參數(shù)控制浸蠟與包埋Part.04

熔蠟溫度控制熔蠟溫度應(yīng)嚴(yán)格控制在56-58℃范圍內(nèi)，避免溫度過(guò)高導(dǎo)致組織收縮或蠟質(zhì)氧化，影響后續(xù)切片質(zhì)量。

浸蠟溫度梯度組織浸蠟需采用梯度溫度法，起始溫度不超過(guò)60℃，逐步升溫至62-65℃，確保石蠟充分滲透組織間隙。

恒溫維持要求浸蠟過(guò)程中需使用恒溫裝置維持溫度波動(dòng)不超過(guò)±1℃，防止溫度驟變?cè)斐山M織脆化或蠟結(jié)晶異常。石蠟溫度控制標(biāo)準(zhǔn)模具預(yù)熱處理包埋前需將金屬模具預(yù)熱至50-55℃，防止冷模導(dǎo)致石蠟快速凝固產(chǎn)生氣泡或分層現(xiàn)象。組織擺放精度組織樣本應(yīng)精確擺放在模具中心位置，距邊緣至少3mm，確保包埋后四面石蠟厚度均勻。冷卻速率控制包埋后需以2-3℃/分鐘的速率緩慢冷卻至室溫，快速冷卻易導(dǎo)致蠟塊內(nèi)部應(yīng)力集中產(chǎn)生裂紋。包埋模具操作規(guī)范組織定向要求最大切面原則微小標(biāo)本定位分層組織處理扁平器官（如皮膚、腸壁）需垂直包埋以獲取最大切面，管狀結(jié)構(gòu)（如血管）應(yīng)橫截面包埋顯示全層結(jié)構(gòu)。多層組織結(jié)構(gòu)（如胃壁）需標(biāo)記漿膜面方向，包埋時(shí)保持各層次平行于切片平面便于病理觀察?；顧z等微小標(biāo)本需使用染色定位劑標(biāo)記關(guān)鍵區(qū)域，包埋時(shí)確保目標(biāo)區(qū)域位于蠟塊表面下0.5mm處。切片制作Part.05針對(duì)需要特殊染色（如銀染、免疫組化）的樣本，厚度可調(diào)整至2-3微米以提高染色效果。特殊染色切片要求術(shù)中快速冰凍切片需保持8-15微米厚度，兼顧診斷速度和結(jié)構(gòu)完整性。冰凍切片標(biāo)準(zhǔn)01020304通常控制在3-5微米范圍內(nèi)，確保細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)且不易斷裂。常規(guī)組織切片厚度神經(jīng)纖維等精細(xì)結(jié)構(gòu)建議采用1-2微米超薄切片以避免重疊干擾觀察。神經(jīng)組織切片規(guī)范切片厚度標(biāo)準(zhǔn)防皺褶處理技巧水浴展片溫度控制將切片漂浮于40-45℃溫水浴中，利用表面張力自然展平皺褶。玻片撈取角度優(yōu)化以30度角緩慢傾斜撈取載玻片，減少水流沖擊導(dǎo)致的折疊。濾紙吸水平衡技術(shù)用濾紙從切片邊緣向中心漸進(jìn)吸水，避免局部干燥收縮產(chǎn)生皺褶。二甲苯透明處理對(duì)頑固性皺褶可采用短暫二甲苯蒸汽熏蒸軟化組織后再展片。多聚賴(lài)氨酸涂層處理使用0.1%多聚賴(lài)氨酸溶液對(duì)載玻片進(jìn)行涂層，增強(qiáng)組織粘附力。靜電消除步驟通過(guò)離子風(fēng)機(jī)處理載玻片，防止靜電吸附灰塵影響切片質(zhì)量。烘干溫度梯度控制采用60℃→37℃階梯式降溫烘干法避免玻片表面產(chǎn)生熱應(yīng)力裂紋。防脫片劑選擇標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)先選用硅烷化處理或陽(yáng)離子聚合物涂層等現(xiàn)代防脫片技術(shù)。載玻片預(yù)處理染色與封片Part.06常規(guī)HE染色步驟采用梯度酒精逐級(jí)脫水，隨后使用二甲苯透明處理，確保組織內(nèi)水分完全置換為透明劑，為后續(xù)浸蠟步驟奠定基礎(chǔ)。組織脫水與透明化將透明化后的組織置于熔融石蠟中浸透，冷卻后形成包埋塊，使用切片機(jī)切取4-5微米厚度的連續(xù)切片，裱貼于載玻片上。石蠟包埋與切片制備切片經(jīng)脫蠟后，依次浸入蘇木精染液（核染色）、分化液、返藍(lán)液，再以伊紅染液（胞質(zhì)染色）復(fù)染，最后梯度酒精脫水并透明化。蘇木精-伊紅染色封片劑選擇標(biāo)準(zhǔn)光學(xué)性能要求封片劑需具備高折射率（1.52-1.54）和低自發(fā)熒光特性，確保顯微鏡下組織結(jié)構(gòu)和染色對(duì)比度清晰可辨。操作適應(yīng)性封片劑應(yīng)具有適中黏度和固化速度，既能避免氣泡殘留，又可適應(yīng)自動(dòng)化封片設(shè)備的工藝參數(shù)。優(yōu)先選用中性樹(shù)脂類(lèi)封片劑，避免長(zhǎng)期存放后出現(xiàn)黃變、結(jié)晶或與染色劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致褪色?；瘜W(xué)穩(wěn)定