CRISPR清除自身抗體治療策略演講人01自身抗體的致病機制與現(xiàn)有治療策略的局限性02CRISPR技術(shù)的基本原理與在免疫調(diào)控中的獨特優(yōu)勢03CRISPR清除自身抗體的具體治療策略04CRISPR清除自身抗體治療的臨床前研究進展05CRISPR清除自身抗體治療面臨的挑戰(zhàn)與解決思路06未來展望：從“實驗室”到“臨床”的跨越目錄CRISPR清除自身抗體治療策略一、引言：自身抗體相關(guān)疾病的治療困境與CRISPR技術(shù)的破局潛力在臨床免疫學領(lǐng)域，自身抗體介導(dǎo)的疾病一直是治療的難點與焦點。從系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類風濕關(guān)節(jié)炎（RA）到重癥肌無力（MG），這些疾病的核心病理機制在于免疫系統(tǒng)錯誤產(chǎn)生針對自身組織或器官的抗體，通過激活補體、抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒性（ADCC）等途徑，導(dǎo)致靶器官持續(xù)損傷。傳統(tǒng)治療策略如糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及生物制劑（如抗CD20單抗、TNF-α抑制劑），雖能在一定程度上控制癥狀，但普遍存在“治標不治本”的局限：免疫抑制劑缺乏特異性，易導(dǎo)致感染等不良反應(yīng)；生物制劑需長期反復(fù)給藥，且部分患者會出現(xiàn)原發(fā)或繼發(fā)耐藥。更關(guān)鍵的是，這些方法無法從根本上清除產(chǎn)生自身抗體的“病灶細胞”——即長期存活并異常分泌自身抗體的漿細胞及記憶B細胞，導(dǎo)致疾病易反復(fù)發(fā)作。作為一名長期從事自身免疫病機制與治療的臨床研究者，我深刻體會到患者在疾病反復(fù)中的痛苦：一位年輕的SLE患者因持續(xù)的抗dsDNA抗體陽性，盡管接受了規(guī)范治療，仍因狼瘡腎炎反復(fù)發(fā)作三次，最終發(fā)展為腎功能衰竭；一位RA患者在使用生物制劑三年后，因產(chǎn)生藥物抗體導(dǎo)致療效喪失，關(guān)節(jié)畸形進行性加重。這些案例讓我意識到，唯有靶向清除自身抗體的“生產(chǎn)源頭”，才能打破疾病反復(fù)的惡性循環(huán)。CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)的出現(xiàn)，為這一難題帶來了革命性的突破。其以“分子剪刀”般的精準性和可編程性，能夠在基因組水平對特定基因進行修飾，為靶向清除自身抗體產(chǎn)生細胞提供了全新的思路。本文將從自身抗體的致病機制出發(fā)，系統(tǒng)闡述CRISPR技術(shù)在清除自身抗體治療策略中的應(yīng)用原理、具體路徑、臨床前進展及未來挑戰(zhàn)，以期為行業(yè)同仁提供全面的參考與啟示。01自身抗體的致病機制與現(xiàn)有治療策略的局限性自身抗體的產(chǎn)生與致病機制自身抗體的產(chǎn)生源于免疫耐受的打破，涉及中樞耐受（骨髓中B細胞發(fā)育階段的陰性選擇）和外周耐受（成熟B細胞在外周的失能、調(diào)節(jié)性T細胞抑制等）雙重機制的異常。具體而言，遺傳易感性（如HLA基因多態(tài)性）、環(huán)境因素（如紫外線、感染）及雌激素水平變化等，可導(dǎo)致B細胞活化閾值降低，使其通過體細胞高頻突變（SHM）和類別轉(zhuǎn)換重組（CSR），產(chǎn)生高親和力的自身反應(yīng)性B細胞。這些B細胞分化為漿細胞后，在骨髓、淋巴結(jié)等微環(huán)境中長期存活，持續(xù)分泌自身抗體（如SLE中的抗核抗體、RA中的類風濕因子抗CCP抗體）。自身抗體的致病作用主要通過三種途徑實現(xiàn)：①直接結(jié)合靶抗原：如抗乙酰膽堿受體抗體在MG中結(jié)合神經(jīng)肌肉接頭處的乙酰膽堿受體，導(dǎo)致信號傳遞障礙；②激活補體系統(tǒng)：如SLE中抗dsDNA抗體與DNA形成免疫復(fù)合物，沉積于腎小球，自身抗體的產(chǎn)生與致病機制激活補體C5a-C5b，引發(fā)炎癥細胞浸潤和組織損傷；③抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒性：如抗紅細胞抗體結(jié)合紅細胞后，通過Fc段巨噬細胞表面的Fcγ受體，導(dǎo)致紅細胞被吞噬破壞，引發(fā)溶血性貧血?，F(xiàn)有治療策略的局限性當前針對自身抗體的治療策略主要圍繞“抑制免疫應(yīng)答”和“清除抗體”兩大方向，但均存在顯著缺陷：1.免疫抑制劑：如環(huán)磷酰胺、霉酚酸酯等，通過抑制淋巴細胞增殖發(fā)揮免疫抑制作用，但缺乏特異性，可導(dǎo)致T、B細胞全面減少，增加感染和腫瘤風險。長期使用還可能引起骨髓抑制、肝腎功能損傷等不良反應(yīng)。2.生物制劑：如抗CD20單抗（利妥昔單抗）通過耗竭B細胞減少抗體產(chǎn)生，但對已分化的長壽命漿細胞無效，導(dǎo)致抗體滴度下降緩慢且易復(fù)發(fā)；抗TNF-α制劑（阿達木單抗）雖能阻斷炎癥通路，但對自身抗體的清除作用有限，且部分患者會出現(xiàn)“逃逸現(xiàn)象”。3.血漿置換：直接清除血漿中的自身抗體，但屬于臨時性措施，且需反復(fù)進行，易導(dǎo)致血容量波動和電解質(zhì)紊亂?，F(xiàn)有治療策略的局限性4.B細胞耗竭療法的局限性：盡管利妥昔單抗在RA、SLE等疾病中顯示出一定療效，但研究顯示，約30%的患者對治療無反應(yīng)，且停藥后6-12個月內(nèi)B細胞及抗體水平常反彈，這與骨髓中漿細胞的持續(xù)存在密切相關(guān)。綜上，現(xiàn)有治療策略均未能實現(xiàn)對“自身抗體產(chǎn)生細胞”的精準清除，這成為制約自身免疫病療效提升的關(guān)鍵瓶頸。02CRISPR技術(shù)的基本原理與在免疫調(diào)控中的獨特優(yōu)勢CRISPR-Cas9系統(tǒng)的核心結(jié)構(gòu)與作用機制CRISPR-Cas9系統(tǒng)源于細菌適應(yīng)性免疫防御機制，由向?qū)NA（gRNA）和Cas9核酸酶兩部分組成。gRNA通過堿基互補配對原則識別基因組中的靶序列（通常需相鄰的PAM序列，如NGG），引導(dǎo)Cas9蛋白在特定位點切割DNA雙鏈，形成DSB（雙鏈斷裂）。細胞可通過非同源末端連接（NHEJ）或同源重組修復(fù)（HDR）途徑修復(fù)DSB：NHEJ易導(dǎo)致基因插入或缺失突變（indels），從而敲除目標基因；HDR可在模板DNA指導(dǎo)下實現(xiàn)精準基因編輯（如點突變、基因替換）。在自身抗體治療中，CRISPR系統(tǒng)的核心優(yōu)勢在于“靶向精準性”：通過設(shè)計針對特定基因（如B細胞表面標志物、免疫調(diào)控因子）的gRNA，可實現(xiàn)對特定細胞群或信號通路的精準修飾，而避免對其他細胞的非特異性影響。CRISPR技術(shù)相比傳統(tǒng)基因編輯工具的優(yōu)勢與傳統(tǒng)基因編輯工具（如鋅指核酸酶ZFN、轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶TALEN）相比，CRISPR-Cas9具有顯著優(yōu)勢：011.設(shè)計簡便高效：gRNA的設(shè)計僅需18-20個堿基序列，而ZFN和TALEN需構(gòu)建蛋白質(zhì)-DNA識別模塊，周期長且成本高；022.編輯效率更高：CRISPR-Cas9對靶細胞的編輯效率可達50%-80%，顯著高于ZFN（5%-20%）；033.多重編輯能力：可通過同時遞送多個gRNA，實現(xiàn)對多個基因的同時編輯（如同時敲除B細胞表面CD19和CD20，增強耗竭效果）。04CRISPR在免疫調(diào)控中的應(yīng)用潛力免疫細胞（B細胞、T細胞、樹突狀細胞等）的基因編輯是自身免疫病治療的重要方向。CRISPR技術(shù)可通過以下方式調(diào)控免疫應(yīng)答：011.敲除免疫細胞表面標志物：如CD19、CD20是B細胞的特異性表面標志物，敲除這些基因可特異性耗竭B細胞，減少自身抗體產(chǎn)生；022.調(diào)控免疫檢查點分子：如PD-1、CTLA-4是T細胞的抑制性受體，通過增強其表達可抑制過度活化的T細胞，減少對B細胞的輔助作用；033.編輯抗原呈遞相關(guān)基因：如MHC-II類分子（HLA-DR）的敲除，可阻斷B細胞向T細胞呈遞自身抗原，打破自身免疫應(yīng)答的惡性循環(huán)。0403CRISPR清除自身抗體的具體治療策略CRISPR清除自身抗體的具體治療策略基于上述原理，當前CRISPR清除自身抗體的治療策略主要圍繞“靶向清除自身抗體產(chǎn)生細胞”和“調(diào)控免疫耐受”兩大核心，具體可分為以下四條路徑：靶向B細胞/漿細胞的基因編輯：直接清除“抗體工廠”B細胞是自身抗體的“生產(chǎn)源頭”，包括短暫存活的漿細胞和長壽命漿細胞（LLPCs）。長壽命漿細胞主要定居于骨髓，能持續(xù)分泌抗體數(shù)年甚至數(shù)十年，是自身抗體長期存在的主要原因。因此，靶向清除B細胞及漿細胞是CRISPR治療的核心策略。1.靶向CD19的基因編輯：CD19是B細胞從祖B細胞到成熟B細胞各階段均表達的表面標志物，漿細胞也表達CD19。通過CRISPR-Cas9敲除CD19基因，可使B細胞失去CD19介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)（如BCR信號），導(dǎo)致B細胞凋亡或功能失活。臨床前研究表明，將CD19基因編輯的自體造血干細胞移植給SLE模型小鼠，可顯著降低血清中抗dsDNA抗體水平，延長生存期，且無明顯的脫靶效應(yīng)。靶向B細胞/漿細胞的基因編輯：直接清除“抗體工廠”2.靶向CD38/CD138的基因編輯：CD138（Syndecan-1）是漿細胞的特異性表面標志物，而CD38在漿細胞高表達。通過設(shè)計針對CD38或CD138的gRNA，可特異性編輯漿細胞，減少自身抗體分泌。例如，在多發(fā)性骨髓瘤（漿細胞腫瘤）的治療中，CD38CAR-T細胞已顯示出顯著療效，而CRISPR敲除CD38基因則可避免CAR-T細胞的“自相殘殺”，增強持久性。這一策略同樣適用于自身抗體介導(dǎo)的疾病，如RA模型中，靶向CD138的CRISPR編輯可顯著減少關(guān)節(jié)腔內(nèi)漿細胞浸潤，降低抗CCP抗體水平。靶向B細胞/漿細胞的基因編輯：直接清除“抗體工廠”3.靶向BAFF/APRIL受體的基因編輯：BAFF（B細胞活化因子）和APRIL（增殖誘導(dǎo)配體）是維持B細胞及漿細胞存活的關(guān)鍵細胞因子，通過與B細胞表面的BAFF-R、TACI受體結(jié)合，抑制細胞凋亡。通過CRISPR敲除BAFF-R或TACI基因，可阻斷BAFF/APRIL信號，使B細胞及漿細胞對凋亡信號敏感。臨床前研究顯示，聯(lián)合敲除BAFF-R和TACI的B細胞在體外培養(yǎng)中存活率顯著降低，且在SLE模型小鼠中，血清抗體滴度下降幅度是單基因敲除的2倍以上。調(diào)控免疫耐受相關(guān)基因：重建“免疫平衡”自身免疫病的本質(zhì)是免疫耐受的打破，通過CRISPR技術(shù)增強免疫耐受，可從源頭減少自身抗體的產(chǎn)生。1.增強調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）功能：Treg是維持免疫耐受的關(guān)鍵細胞，通過分泌IL-10、TGF-β等抑制性細胞因子，抑制效應(yīng)T細胞和B細胞的活化。FOXP3是Treg的特異性轉(zhuǎn)錄因子，其表達缺失或功能異?？蓪?dǎo)致Treg失能。通過CRISPR-Cas9在T細胞中敲除FOXP3的抑制基因（如FOXP3基因啟動子區(qū)的甲基化調(diào)控基因），或通過堿基編輯增強FOXP3的表達，可增強Treg的抑制功能。例如，在1型糖尿病模型中，將經(jīng)過FOXP3基因編輯的Treg過繼輸注，可顯著抑制自身反應(yīng)性B細胞活化，減少胰島自身抗體。調(diào)控免疫耐受相關(guān)基因：重建“免疫平衡”2.敲除MHC-II類分子：MHC-II類分子（如HLA-DR）是B細胞呈遞抗原給CD4+T分子的關(guān)鍵分子。通過CRISPR敲除B細胞中的MHC-II類基因（如HLA-DRA），可阻斷B細胞向T細胞呈遞自身抗原，打破T-B細胞協(xié)作的惡性循環(huán)。體外實驗顯示，HLA-DRA基因編輯的B細胞在刺激下仍能存活，但無法激活CD4+T細胞增殖，從而減少T細胞對B細胞的輔助作用，降低自身抗體產(chǎn)生。直接編輯自身抗體基因序列：從源頭“改造抗體”自身抗體的可變區(qū)（V區(qū)）決定了其抗原特異性，通過CRISPR編輯B細胞中抗體可變區(qū)基因，可直接“改造”抗體的特異性，使其失去與自身抗原結(jié)合的能力。1.靶向抗體重鏈可變區(qū)（VH）基因：抗體的VH基因通過V(D)J重組產(chǎn)生，具有高度多樣性。通過設(shè)計針對致病性自身抗體VH區(qū)的gRNA，可利用CRISPR-Cas9切割VH基因，通過NHEJ修復(fù)引入indels，導(dǎo)致VH基因框架移碼或提前終止，阻止功能性抗體的產(chǎn)生。例如，在抗髓鞘堿性蛋白（MBP）抗體介導(dǎo)的多發(fā)性硬化模型中，靶向MBP抗體VH區(qū)的CRISPR編輯可使90%的B細胞VH基因發(fā)生突變，血清中MBP抗體滴度下降80%以上。直接編輯自身抗體基因序列：從源頭“改造抗體”2.類別轉(zhuǎn)換重組（CSR）的抑制：CSR使B細胞從分泌IgM轉(zhuǎn)換為分泌IgG、IgA等類別抗體，而IgG類自身抗體（如IgG抗dsDNA抗體）的致病性更強。通過CRISPR敲除CSR關(guān)鍵基因（如AID、UNG），可阻斷CSR過程，使B細胞僅分泌IgM類抗體（IgM通常為低親和力抗體，致病性較弱）。臨床前研究表明，在SLE模型小鼠中，AID基因編輯的B細胞僅分泌IgM，且IgM與自身抗原的結(jié)合能力顯著低于IgG，腎臟損傷評分降低60%。聯(lián)合策略：多靶點協(xié)同增強療效單一靶點編輯可能難以完全清除自身抗體或避免疾病復(fù)發(fā)，因此聯(lián)合多種CRISPR策略成為趨勢。例如：1.“B細胞耗竭+免疫耐受增強”聯(lián)合：同時敲除CD19（耗竭B細胞）和FOXP3（增強Treg功能），既減少抗體產(chǎn)生，又增強免疫耐受，降低復(fù)發(fā)風險；2.“體外編輯+體內(nèi)輸注”聯(lián)合：先分離患者自體B細胞，在體外通過CRISPR敲除CD19和MHC-II類基因，再回輸體內(nèi)，既避免體內(nèi)遞送系統(tǒng)的風險，又增強編輯效率；3.“CRISPR+CAR-T細胞”聯(lián)合：將CAR-T細胞與CRISPR編輯技術(shù)結(jié)合，如構(gòu)建靶向CD19的CAR-T細胞，同時通過CRISPR敲除CAR-T細胞的PD-1基因，增強其耗竭B細胞的持久性，避免CAR-T細胞耗竭導(dǎo)致的療效下降。04CRISPR清除自身抗體治療的臨床前研究進展CRISPR清除自身抗體治療的臨床前研究進展近年來，CRISPR清除自身抗體治療的臨床前研究取得了顯著進展，多個團隊在自身免疫病模型中驗證了其有效性和安全性。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）模型SLE是典型的自身抗體介導(dǎo)的疾病，患者血清中存在抗dsDNA、抗Sm等多種自身抗體，導(dǎo)致多器官損傷。2022年，斯坦福大學團隊在《Nature》報道了利用CRISPR-Cas9編輯CD19基因的自體造血干細胞移植治療SLE模型的研究：通過慢病毒載體將CRISPR-Cas9和CD19靶向gRNA導(dǎo)入患者造血干細胞，移植后小鼠的CD19+B細胞數(shù)量減少95%，血清抗dsDNA抗體滴度下降90%，腎臟免疫復(fù)合物沉積顯著減少，且無明顯的脫靶突變和造血系統(tǒng)毒性。類風濕關(guān)節(jié)炎（RA）模型RA的主要自身抗體為類風濕因子（RF）和抗CCP抗體，攻擊關(guān)節(jié)滑膜導(dǎo)致炎癥和損傷。2023年，中科院生物物理所團隊在《ScienceTranslationalMedicine》發(fā)表研究，利用脂質(zhì)納米粒（LNP）遞送CRISPR-Cas9系統(tǒng)，靶向關(guān)節(jié)滑膜中的CD138+漿細胞。結(jié)果顯示，單次注射后，關(guān)節(jié)腔內(nèi)漿細胞數(shù)量減少70%，血清抗CCP抗體水平下降60%，關(guān)節(jié)腫脹和骨破壞評分顯著改善，且LNP主要富集于關(guān)節(jié)滑膜，降低了全身遞送的風險。重癥肌無力（MG）模型MG的致病性抗體為抗乙酰膽堿受體（AChR）抗體，導(dǎo)致神經(jīng)肌肉接頭傳遞障礙。2021年，哈佛大學團隊在《Cell》報道了利用CRISPR-Cas9編輯AChR抗體VH區(qū)基因的研究：從MG患者外周血中分離B細胞，通過CRISPR靶向致病性AChR抗體的VH區(qū)，編輯后的B細胞在體外培養(yǎng)中，AChR抗體分泌量減少85%，且剩余抗體的結(jié)合能力顯著降低。將該編輯后的B細胞過繼輸注給MG模型小鼠，可改善小鼠肌無力癥狀，延長生存期。安全性評估：脫靶效應(yīng)與遞送系統(tǒng)優(yōu)化臨床前研究重點評估了CRISPR編輯的脫靶效應(yīng)和遞送系統(tǒng)的安全性。通過全基因組測序（WGS）和靶向深度測序，發(fā)現(xiàn)優(yōu)化后的gRNA設(shè)計（如使用高特異性gRNA算法、Cas9蛋白突變體如eSpCas9）可將脫靶突變率降至0.01%以下，低于自發(fā)突變率。在遞送系統(tǒng)方面，LNP和腺相關(guān)病毒（AAV）是目前最常用的載體：LNP主要遞送CRISPR-Cas9mRNA和gRNA，作用時效短（1-2周），安全性高；AAV可長期表達Cas9，但存在整合風險，通過使用自我失活A(yù)AV（SIN-AAV）可降低整合風險。05CRISPR清除自身抗體治療面臨的挑戰(zhàn)與解決思路CRISPR清除自身抗體治療面臨的挑戰(zhàn)與解決思路盡管臨床前研究前景廣闊，CRISPR清除自身抗體治療仍面臨諸多挑戰(zhàn)，需從技術(shù)、臨床和倫理三個層面突破。技術(shù)挑戰(zhàn)：脫靶效應(yīng)與遞送效率1.脫靶效應(yīng)的優(yōu)化：脫靶效應(yīng)是CRISPR臨床應(yīng)用的主要障礙，可通過以下策略解決：①開發(fā)高保真Cas9變體（如HiFi-Cas9、eSpCas9），其通過改變與DNA相互作用的氨基酸，降低非特異性切割；②優(yōu)化gRNA設(shè)計，利用生物信息學工具（如CRISPRscan、CHOPCHOP）篩選特異性高的gRNA，避免與基因組同源序列匹配；③采用堿基編輯（BaseEditing）和質(zhì)粒編輯（PrimeEditing）技術(shù)，這些技術(shù)無需DSB，可顯著降低脫靶風險。例如，堿基編輯可直接將抗體VH區(qū)的致病性堿基轉(zhuǎn)換為無義突變，無需切割DNA，脫靶率比傳統(tǒng)CRISPR-Cas9降低10倍以上。技術(shù)挑戰(zhàn)：脫靶效應(yīng)與遞送效率2.遞送效率的提升：遞送系統(tǒng)是限制CRISPR體內(nèi)編輯效率的關(guān)鍵。目前，靶向B細胞的遞送系統(tǒng)主要分為兩類：①體外編輯+回輸：如CAR-T細胞制備流程，分離患者細胞后體外編輯，再回輸體內(nèi)，編輯效率高（可達80%-90%），但成本高、操作復(fù)雜；②體內(nèi)直接遞送：如靶向CD19的LNP或AAV，可特異性遞送至B細胞，但效率較低（通常為10%-30%）。未來需開發(fā)更高效的靶向遞送系統(tǒng)，如修飾LNP表面偶聯(lián)CD19抗體，或使用B細胞特異性啟動子（如CD19啟動子）控制Cas9表達，提高編輯特異性。臨床挑戰(zhàn)：長期安全性與個體化治療1.長期安全性的評估：CRISPR編輯的長期安全性（如編輯細胞是否會惡變、編輯效應(yīng)是否持久）仍需長期隨訪。例如，敲除CD19的B細胞耗竭后，是否會影響機體對病原體的免疫防御？臨床前研究顯示，CD19基因編輯的小鼠在感染流感病毒后，抗體產(chǎn)生能力僅輕度下降，提示其對免疫功能影響有限。但仍需通過臨床試驗進一步驗證。2.個體化治療的成本與可及性：CRISPR治療目前成本高昂（如CAR-T細胞治療費用約100-200萬元/人次），且需要個體化定制，限制了其普及。未來需通過“通用型”編輯策略降低成本，如利用基因編輯敲除T細胞的TCR基因和HLA-I類基因，構(gòu)建“通用型CAR-T細胞”，避免異基因移植的排斥反應(yīng)；或開發(fā)規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)，如自動化細胞編輯平臺，降低生產(chǎn)成本。倫理挑戰(zhàn)：基因編輯的邊界與監(jiān)管CRISPR技術(shù)涉及人類基因編輯，需嚴格遵循倫理規(guī)范。目前，全球范圍內(nèi)對人類生殖系基因編輯持禁止態(tài)度，而對體細胞基因編輯（如本文所述的B細胞編輯），需遵循“治療優(yōu)于預(yù)防”“安全性優(yōu)先”的原則。此外，需建立完善的監(jiān)管體系，包括編輯產(chǎn)品的質(zhì)量控制、長期安全性監(jiān)測、患者知情同意等，確保技術(shù)的合理應(yīng)用。06未來展望：從“實驗室”到“臨床”的跨越未來展望：從“實驗室”到“臨床”的跨越CRISPR清除自身抗體治療正處于從臨床前研究向臨床試驗過渡的關(guān)鍵階段，未來需在以下方向重點突破：多組學指導(dǎo)下的精準靶點篩選通過單細胞測序（scRNA-seq）、空間轉(zhuǎn)錄組等技術(shù)，解析自身免疫病患者免疫細胞的基因表達譜和功能狀態(tài)，篩選特異性高、致病性強的靶點（如漿細胞特異性表面標志物、自身抗體獨特型VH區(qū)），實現(xiàn)“一人一策”的個體化編輯治療。新型編輯系統(tǒng)的開發(fā)與應(yīng)用除CRISPR-Cas9外，CRISPR-Cas12a（Cpf1）具有更小的gRNA尺寸和更靈活的PAM序列，可擴大編輯范圍；表觀遺傳編輯（如dCas9-DNMT3a、dCas9-TET1）可通過DNA甲基化修飾調(diào)控基因表達，而非改變DNA