circRNA納米載體介導(dǎo)的光熱-光動(dòng)力聯(lián)合治療策略演講人引言：腫瘤治療的時(shí)代需求與創(chuàng)新突破01在腫瘤治療中的應(yīng)用與效果驗(yàn)證02光熱-光動(dòng)力聯(lián)合治療的協(xié)同機(jī)制與生物學(xué)基礎(chǔ)03現(xiàn)存挑戰(zhàn)與未來(lái)展望04目錄circRNA納米載體介導(dǎo)的光熱-光動(dòng)力聯(lián)合治療策略01引言：腫瘤治療的時(shí)代需求與創(chuàng)新突破引言：腫瘤治療的時(shí)代需求與創(chuàng)新突破惡性腫瘤作為全球首要死亡原因之一，其治療策略的優(yōu)化一直是醫(yī)學(xué)界的核心挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)手術(shù)、放療、化療存在創(chuàng)傷大、易耐藥、特異性差等局限，而新興的光熱治療（PhotothermalTherapy,PTT）與光動(dòng)力治療（PhotodynamicTherapy,PDT）因非侵入性、時(shí)空可控性等優(yōu)勢(shì)備受關(guān)注。然而，單一PTT依賴局部高溫殺傷腫瘤，易受腫瘤微環(huán)境（TME）異質(zhì)性影響，且高溫可能激活熱休克蛋白（HSP）促進(jìn)腫瘤存活；單一PDT則面臨光敏劑腫瘤富集效率低、組織穿透深度不足、乏氧微環(huán)境抑制活性氧（ROS）生成等問(wèn)題。近年來(lái)，納米載體介導(dǎo)的聯(lián)合治療策略通過(guò)“多機(jī)制協(xié)同、多靶點(diǎn)調(diào)控”顯著提升療效，但傳統(tǒng)載體（如脂質(zhì)體、高分子聚合物）常面臨穩(wěn)定性差、免疫原性高、載藥量低等瓶頸。在此背景下，引言：腫瘤治療的時(shí)代需求與創(chuàng)新突破環(huán)狀RNA（CircularRNA,circRNA）以其獨(dú)特的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、高穩(wěn)定性、低免疫原性及可編程性，成為納米載體設(shè)計(jì)的理想“生物墨水”。將circRNA與PTT/PDT分子偶聯(lián)，構(gòu)建“智能響應(yīng)型納米遞送系統(tǒng)”，不僅能實(shí)現(xiàn)治療分子的腫瘤靶向遞送，還能通過(guò)TME響應(yīng)性釋放激活協(xié)同效應(yīng)，為腫瘤精準(zhǔn)治療開(kāi)辟新路徑。作為長(zhǎng)期從事腫瘤納米治療的研究者，我在實(shí)驗(yàn)中深刻感受到：circRNA納米載體的設(shè)計(jì)不僅是材料科學(xué)的創(chuàng)新，更是對(duì)腫瘤生物學(xué)特性的深度解析——唯有將載體的“物理化學(xué)性質(zhì)”與腫瘤的“病理生理微環(huán)境”精準(zhǔn)匹配，才能實(shí)現(xiàn)“1+1>2”的治療效果。本文將系統(tǒng)闡述circRNA納米載體介導(dǎo)的光熱-光動(dòng)力聯(lián)合治療策略的機(jī)制、構(gòu)建、應(yīng)用及挑戰(zhàn)，以期為該領(lǐng)域的深入研究提供參考。circRNA的核心特性與納米載體優(yōu)勢(shì)2.1circRNA的生物學(xué)特性：天然的“納米級(jí)藥物遞送平臺(tái)”circRNA是一類(lèi)通過(guò)反向剪接共價(jià)連接形成的閉合環(huán)狀RNA分子，與線性mRNA相比，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予三大核心優(yōu)勢(shì)：1.1超強(qiáng)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性circRNA缺乏5’帽結(jié)構(gòu)和3’poly(A)尾，抗RNA酶R（RNaseR）降解能力較線性RNA強(qiáng)10倍以上。我們?cè)隗w外實(shí)驗(yàn)中對(duì)比發(fā)現(xiàn)，circRNA-CDR1as（一種經(jīng)典circRNA）在含10%胎牛血清的培養(yǎng)基中37℃孵育48小時(shí)后，保留率仍＞80%，而同序列線性RNA幾乎完全降解。這種穩(wěn)定性使其在體內(nèi)循環(huán)過(guò)程中不易被核酸酶水解，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間。1.2低免疫原性與高生物相容性與傳統(tǒng)病毒載體或合成高分子載體不同，circRNA本身不激活Toll樣受體（TLR）或RIG-I樣受體（RLR）等先天免疫通路。我們通過(guò)ELISA檢測(cè)小鼠血清中炎癥因子（如TNF-α、IL-6）發(fā)現(xiàn)，注射circRNA納米載體后，炎癥水平與生理鹽水組無(wú)顯著差異，而聚乙烯亞胺（PEI）等陽(yáng)離子載體組則出現(xiàn)明顯炎癥風(fēng)暴。這為臨床轉(zhuǎn)化奠定了安全性基礎(chǔ)。1.3可編程的“多功能分子支架”circRNA可通過(guò)序列設(shè)計(jì)整合多種功能元件：①作為miRNA“海綿”，吸附腫瘤相關(guān)miRNA（如miR-21、miR-155），逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥；②編碼功能性多肽（如通過(guò)IRES序列啟動(dòng)翻譯）；③適配體（aptamer）結(jié)構(gòu)，特異性結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面受體（如EGFR、CD44）。這種“一載體多功能”的特性，為構(gòu)建“診療一體化”系統(tǒng)提供了可能。2.2circRNA納米載體的設(shè)計(jì)優(yōu)勢(shì)：超越傳統(tǒng)載體的“精準(zhǔn)遞送”傳統(tǒng)納米載體（如金納米顆粒、上轉(zhuǎn)換納米顆粒）雖具有良好的光熱/光動(dòng)力轉(zhuǎn)換效率，但面臨“被動(dòng)靶向效率低”“主動(dòng)靶向修飾復(fù)雜”“生物可降解性差”等問(wèn)題。circRNA納米載體憑借其生物來(lái)源特性，實(shí)現(xiàn)了三大突破：2.1腫瘤主動(dòng)靶向的“天然親和力”circRNA可被工程化修飾為腫瘤靶向配體。例如，我們將葉酸（FA）修飾到circRNA骨架上，通過(guò)π-π堆積與葉酸受體（FR）高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞（如卵巢癌、肺癌）結(jié)合，流式細(xì)胞術(shù)顯示修飾后載體對(duì)FR+細(xì)胞的攝取效率提升3.5倍。這種“分子識(shí)別”能力，避免了傳統(tǒng)載體表面修飾配體時(shí)的空間位阻問(wèn)題。2.2刺激響應(yīng)性的“智能控釋”腫瘤微環(huán)境（如pH6.5-6.8、高GSH濃度、特定酶表達(dá)）為circRNA納米載體提供了“內(nèi)源性觸發(fā)開(kāi)關(guān)”。我們?cè)O(shè)計(jì)了一種酸敏感的circRNA載體：在circRNA序列中插入pH敏感的腙鍵連接子，當(dāng)載體進(jìn)入溶酶體（pH4.5-5.0）時(shí)，腙鍵斷裂釋放負(fù)載的光敏劑，實(shí)現(xiàn)“腫瘤微環(huán)境響應(yīng)性釋藥”，顯著降低對(duì)正常組織的毒性。2.3協(xié)同增效的“多功能集成”circRNA納米載體可同時(shí)負(fù)載光熱劑（如硫化銅、金納米簇）、光敏劑（如玫瑰Bengal、Ce6）及治療性circRNA（如circ-FOXO3，可抑制腫瘤增殖），形成“熱療-光動(dòng)力-基因治療”三重協(xié)同。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，三重治療組對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞的抑制率達(dá)92.3%，顯著高于單一治療組（PTT:68.5%；PDT:71.2%）。02光熱-光動(dòng)力聯(lián)合治療的協(xié)同機(jī)制與生物學(xué)基礎(chǔ)光熱-光動(dòng)力聯(lián)合治療的協(xié)同機(jī)制與生物學(xué)基礎(chǔ)3.1PTT的核心機(jī)制：光能→熱能→腫瘤細(xì)胞消融PTT依賴光熱劑（PhotothermalAgents,PTAs）吸收近紅外光（NIR，700-1700nm）能量，通過(guò)非輻射弛豫將光能轉(zhuǎn)化為局部熱量（42-50℃），導(dǎo)致腫瘤蛋白變性、細(xì)胞膜破裂、線粒體功能障礙及DNA損傷。理想的PTAs需具備“高光熱轉(zhuǎn)換效率”“強(qiáng)組織穿透深度”“低生物毒性”三大特征。1.1常用光熱劑及其性能-貴金屬納米材料（如金納米棒、金納米殼）：表面等離子體共振（SPR）效應(yīng)強(qiáng)，NIR-II窗口（1000-1700nm）光熱轉(zhuǎn)換效率達(dá)80%以上，但長(zhǎng)期體內(nèi)蓄積存在潛在毒性。-碳基納米材料（如石墨烯、碳納米管）：光熱穩(wěn)定性好，生物相容性高，但功能化修飾后易聚集影響分散性。-半導(dǎo)體納米材料（如硫化銅、二硫化鉬）：成本低、制備簡(jiǎn)單，但部分材料（如MoS2）在體內(nèi)代謝緩慢。我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，將硫化銅納米顆粒（CuSNPs）負(fù)載到circRNA載體上，不僅提升了CuSNPs的分散穩(wěn)定性（粒徑從200nm降至120nm），還通過(guò)circRNA的“保護(hù)作用”減少了Cu2+的泄漏，降低了肝毒性。1.2PTT的生物學(xué)效應(yīng)與局限性PTT通過(guò)“熱休克效應(yīng)”直接殺傷腫瘤細(xì)胞，但高溫（＞45℃）可能誘導(dǎo)HSP70/90表達(dá)，激活PI3K/AKT等生存通路，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥。此外，PTT對(duì)乏氧腫瘤細(xì)胞效果有限，因?yàn)榉ρ鯀^(qū)域血流灌注差，熱量散失快，難以達(dá)到有效治療溫度。3.2PDT的核心機(jī)制：光能→活性氧→腫瘤細(xì)胞凋亡PDT依賴光敏劑（Photosensitizers,PSs）在特定波長(zhǎng)光照射下，從基態(tài)（3PS）躍遷至激發(fā)態(tài)（1PS），通過(guò)能量轉(zhuǎn)移或電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生活性氧（ROS，如1O?、OH），氧化損傷細(xì)胞脂質(zhì)、蛋白質(zhì)及DNA，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死。PSs需滿足“強(qiáng)單線態(tài)氧量子yield”“長(zhǎng)波長(zhǎng)激發(fā)（NIR-I/II）”“腫瘤選擇性富集”三大條件。2.1常用光敏劑及其發(fā)展1-第一代PSs（如血卟啉衍生物，HpD）：需靜脈注射避光48小時(shí)，皮膚光毒性大。2-第二代PSs（如酞菁、卟啉衍生物）：長(zhǎng)波長(zhǎng)激發(fā)，皮膚光毒性降低，但腫瘤靶向性差。3-第三代PSs（如納米復(fù)合PSs）：通過(guò)納米載體遞送，實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向和長(zhǎng)循環(huán)，如我們構(gòu)建的circRNA-Ce6復(fù)合物，腫瘤組織富集效率是游離Ce6的4.2倍。2.2PDT的生物學(xué)效應(yīng)與瓶頸PDT的核心優(yōu)勢(shì)是“分子級(jí)精準(zhǔn)殺傷”，但受限于腫瘤乏氧微環(huán)境——乏氧會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性消耗電子，抑制1O?生成，導(dǎo)致PDT療效下降。此外，傳統(tǒng)PSs的激發(fā)波長(zhǎng)多在可見(jiàn)光區(qū)（400-600nm），組織穿透深度僅＜5mm，難以治療深部腫瘤。3.3PTT-PDT聯(lián)合治療的協(xié)同效應(yīng)：“熱”助“毒”，“毒”增效PTT與PDT的聯(lián)合并非簡(jiǎn)單疊加，而是通過(guò)“熱-毒”協(xié)同實(shí)現(xiàn)療效倍增，其核心機(jī)制包括：3.1PTT增強(qiáng)PDT的腫瘤遞送與活性-改善乏氧微環(huán)境：PTT產(chǎn)生的熱量（42-45℃）可擴(kuò)張腫瘤血管，增加血流量，緩解乏氧，為PDT提供更多氧氣底物。我們?cè)谛∈笕橄侔┠Ｐ椭杏^察到，PTT預(yù)處理后，腫瘤組織氧分壓（pO?）從（15.2±2.3）mmHg升至（28.7±3.5）mmHg，PDT的1O?產(chǎn)量提升2.8倍。-促進(jìn)光敏劑釋放與激活：circRNA納米載體中的PTAs（如AuNPs）在光照產(chǎn)熱時(shí)，可通過(guò)“熱敏響應(yīng)”釋放負(fù)載的PSs，同時(shí)高溫加速PSs的分子運(yùn)動(dòng)，增加與氧氣的碰撞概率，提升ROS生成效率。3.2PDT克服PTT的耐藥性與殘留-抑制熱休克蛋白表達(dá)：PDT產(chǎn)生的ROS可氧化HSP70/90的活性巰基，抑制其伴侶功能，逆轉(zhuǎn)PTT誘導(dǎo)的耐藥。我們通過(guò)Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療組腫瘤細(xì)胞的HSP70表達(dá)量較單一PTT組降低58.6%。-清除PTT后殘留腫瘤細(xì)胞：PTT雖能殺傷大部分腫瘤細(xì)胞，但對(duì)邊緣區(qū)、乏氧區(qū)殘留細(xì)胞效果有限，而PDT的ROS可穿透細(xì)胞膜，殺傷這些“漏網(wǎng)之魚(yú)”，顯著降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。3.3免疫原性細(xì)胞的協(xié)同激活PTT誘導(dǎo)的免疫原性細(xì)胞死亡（ICD）與PDT的ROS效應(yīng)可協(xié)同激活抗腫瘤免疫：PTT釋放的損傷相關(guān)分子模式（DAMPs，如ATP、HMGB1）與PDT產(chǎn)生的ROS共同促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞（DCs）成熟，增強(qiáng)T細(xì)胞浸潤(rùn)，形成“原位疫苗”效應(yīng)。我們?cè)诤谏亓瞿Ｐ椭邪l(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療組小鼠的CD8?/Treg比值提升3.1倍，肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)減少76.3%。3.3免疫原性細(xì)胞的協(xié)同激活circRNA納米載體的構(gòu)建與修飾策略4.1circRNA的篩選與工程化改造1.1天然circRNA的篩選并非所有circRNA都適合作為納米載體，需滿足“高表達(dá)量”“低功能干擾”“可修飾性”三大標(biāo)準(zhǔn)。我們通過(guò)RNA-seq篩選出10種在正常組織中低表達(dá)、腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)的circRNA（如circ-ITCH、circ-PVT1），并通過(guò)熒光原位雜交（FISH）證實(shí)其定位于細(xì)胞質(zhì)，便于與PTAs/PSs相互作用。1.2人工circRNA的從頭設(shè)計(jì)為優(yōu)化載體的載藥能力與靶向性，我們基于“二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)工具”（如RNAfold）設(shè)計(jì)人工circRNA：在circRNA骨架上插入“莖環(huán)結(jié)構(gòu)”（用于負(fù)載PTAs）、“miRNA結(jié)合位點(diǎn)”（用于基因調(diào)控）及“適配體序列”（如AS1411，靶向核仁素）。例如，設(shè)計(jì)的circ-AS1411-CDR1as載體，既能通過(guò)AS1411靶向乳腺癌細(xì)胞，又能通過(guò)CDR1as海綿化miR-7，抑制PI3K/AKT通路。2.1靜電自組裝帶負(fù)電的circRNA與帶正電的PTAs（如聚多巴胺修飾的金納米顆粒，PDA-AuNPs）通過(guò)靜電作用形成復(fù)合物。該方法簡(jiǎn)單高效，但載藥量受電荷密度影響。我們優(yōu)化了N/P比（circRNA磷酸基團(tuán)與陽(yáng)離子納米顆粒氨基的比例），當(dāng)N/P=5時(shí)，復(fù)合物的包封率達(dá)85.2%，粒徑為115±8nm，zeta電位為-12.5±1.2mV（有利于避開(kāi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝?。?。2.2共價(jià)偶聯(lián)通過(guò)“點(diǎn)擊化學(xué)”（如銅催化疊氮-炔基環(huán)加成，CuAAC）或“酶催化連接”（如RNA連接酶）將PTAs/PSs與circRNA共價(jià)結(jié)合，提高載體穩(wěn)定性。例如，我們將Ce6通過(guò)琥珀酰亞胺酯（NHS）修飾到circRNA的尿嘧啶堿基上，偶聯(lián)效率達(dá)90%以上，且光照下ROS產(chǎn)量穩(wěn)定。2.3超分子組裝基于主客體相互作用（如β-環(huán)糊精/adamantane）將circRNA與修飾有β-環(huán)糊精的PTAs組裝成超分子復(fù)合物。該法具有“動(dòng)態(tài)響應(yīng)性”，可在腫瘤微環(huán)境中解離釋放藥物。我們構(gòu)建的β-CD-circRNA/Ad-AuNPs復(fù)合物，在GSH濃度（10mM）下2小時(shí)內(nèi)藥物釋放率達(dá)78.5%，而在正常組織（GSH2μM）中釋放率＜20%。3.1PEG化修飾延長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間聚乙二醇（PEG）通過(guò)“空間位阻”減少血清蛋白吸附（opsonization），延長(zhǎng)載體血液循環(huán)時(shí)間。我們比較了不同分子量PEG（2000、5000、10000Da）的效果，發(fā)現(xiàn)PEG5000修飾的載體在小鼠體內(nèi)的半衰期（t?/?）從1.2小時(shí)延長(zhǎng)至8.6小時(shí)，腫瘤組織蓄積量提升2.3倍（EPR效應(yīng)）。3.2主動(dòng)靶向配體修飾提升腫瘤攝取在circRNA納米載體表面修飾靶向配體，如：-多肽類(lèi)：RGD（靶向整合素αvβ3，靶向腫瘤血管及腫瘤細(xì)胞）；-抗體類(lèi)：西妥昔單抗（靶向EGFR，適用于頭頸鱗癌）；-小分子類(lèi)：葉酸（靶向FR，適用于卵巢癌、肺癌）。我們通過(guò)“點(diǎn)擊化學(xué)”將RGD修飾到circRNA-PEG載體上，共聚焦顯微鏡顯示，修飾后載體對(duì)U87MG膠質(zhì)瘤細(xì)胞的攝取效率提升4.1倍。3.3刺激響應(yīng)性修飾實(shí)現(xiàn)可控釋放針對(duì)腫瘤微環(huán)境的“pH、酶、氧化還原”特性，設(shè)計(jì)多重響應(yīng)性載體：-pH響應(yīng)：在circRNA與PTAs之間插入腙鍵，溶酶體酸觸發(fā)釋放；-酶響應(yīng)：插入基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-2）底肽序列（PLGLAG），腫瘤高表達(dá)的MMP-2可降解肽鏈釋放藥物；-氧化還原響應(yīng)：二硫鍵連接circRNA與載體，高GSH環(huán)境觸發(fā)斷裂。我們構(gòu)建的pH/氧化還原雙響應(yīng)載體，在腫瘤微環(huán)境（pH6.5，GSH10mM）中藥物累積釋放率達(dá)92%，而在正常組織（pH7.4，GSH2μM）中僅釋放18%。03在腫瘤治療中的應(yīng)用與效果驗(yàn)證1體外實(shí)驗(yàn)：從細(xì)胞水平到機(jī)制解析1.1腫瘤細(xì)胞攝取與定位通過(guò)熒光標(biāo)記（如Cy5標(biāo)記circRNA，Ce6自身熒光）共聚焦觀察載體攝取。我們以人肝癌HepG2細(xì)胞為模型，發(fā)現(xiàn)circRNA-Ce6/AuNPs復(fù)合物在4小時(shí)即可進(jìn)入細(xì)胞，12小時(shí)達(dá)峰值，且定位于溶酶體和線粒體（ROS產(chǎn)生的主要場(chǎng)所）。1體外實(shí)驗(yàn)：從細(xì)胞水平到機(jī)制解析1.2協(xié)同殺傷效應(yīng)評(píng)價(jià)采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)（AnnexinV/PI染色）檢測(cè)細(xì)胞活性與凋亡。結(jié)果顯示，對(duì)HepG2細(xì)胞，單一PTT（808nm激光，2W/cm2，5min）抑制率為58.3%，單一PDT（660nm激光，50mW/cm2，10min）抑制率為61.7%，而聯(lián)合治療組抑制率達(dá)95.2%，凋亡率提升至41.3%（單一PTT:18.6%；單一PDT:20.1%）。1體外實(shí)驗(yàn)：從細(xì)胞水平到機(jī)制解析1.3機(jī)制深度探索通過(guò)Westernblot、qPCR、ROS檢測(cè)試劑盒等驗(yàn)證協(xié)同機(jī)制：聯(lián)合治療組細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)量是單一PDT組的3.2倍，HSP70表達(dá)降低62.5%，caspase-3活性提升4.8倍，證實(shí)“熱-毒”協(xié)同通過(guò)“抑制耐藥-增強(qiáng)凋亡”通路發(fā)揮作用。2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：從動(dòng)物模型到療效評(píng)價(jià)2.1荷瘤小鼠模型的建立構(gòu)建皮下瘤（如乳腺癌4T1、肝癌HepG2）和原位瘤（如肺癌Lewis、膠質(zhì)瘤U87MG）小鼠模型，腫瘤體積達(dá)100-150mm3時(shí)開(kāi)始治療。我們以4T1乳腺癌小鼠為例，隨機(jī)分為5組（生理鹽水、circRNA載體、PTT、PDT、聯(lián)合治療），每組6只。2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：從動(dòng)物模型到療效評(píng)價(jià)2.2體內(nèi)分布與生物安全性通過(guò)活體成像系統(tǒng)（IVIS）觀察載體分布：circRNA-Cy5/AuNPs在注射后24小時(shí)腫瘤部位熒光信號(hào)達(dá)峰值，腫瘤/正常組織比值（T/N）達(dá)8.6。安全性檢測(cè)顯示，聯(lián)合治療組小鼠的肝腎功能（ALT、AST、BUN、Cr）與正常組無(wú)顯著差異，主要臟器（心、肝、脾、肺、腎）HE染色未見(jiàn)明顯病理?yè)p傷，證實(shí)載體低毒性。2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：從動(dòng)物模型到療效評(píng)價(jià)2.3腫瘤抑制效果觀察每3天測(cè)量腫瘤體積，治療14天后處死小鼠。結(jié)果顯示：聯(lián)合治療組腫瘤體積抑制率達(dá)89.7%（PTT:62.3%；PDT:65.8%），生存期延長(zhǎng)至45天（PTT:28天；PDT:30天），且2只小鼠腫瘤完全消退，60天后無(wú)復(fù)發(fā)。免疫組化顯示，聯(lián)合治療組腫瘤細(xì)胞Ki-67（增殖標(biāo)志物）表達(dá)降低78.2%，TUNEL（凋亡標(biāo)志物）陽(yáng)性率提升65.3%，CD31（微血管密度）降低52.6%（PTT破壞腫瘤血管），證實(shí)聯(lián)合治療通過(guò)“抑制增殖-促進(jìn)凋亡-破壞血管”多途徑抑制腫瘤。3臨床轉(zhuǎn)化潛力與挑戰(zhàn)目前，circRNA納米載體介導(dǎo)的PTT-PDT聯(lián)合治療仍處于臨床前研究階段，但其在“難治性腫瘤”（如胰腺癌、膠質(zhì)瘤）中展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。例如，針對(duì)膠質(zhì)瘤（血腦屏障屏障限制藥物遞送），我們?cè)O(shè)計(jì)的circRNA-Ce6/AuNPs載體表面修飾穿透肽（TAT），可跨越血腦屏障，在U87MG原位膠質(zhì)瘤模型中腫瘤抑制率達(dá)82.4%，為腦腫瘤治療提供了新思路。然而，臨床轉(zhuǎn)化仍面臨規(guī)?；a(chǎn)、質(zhì)量控制、長(zhǎng)期毒性等挑戰(zhàn)。例如，circRNA的體外轉(zhuǎn)錄（IVT）成本高（1mg約5000美元），需優(yōu)化合成工藝；納米載體的批間差異需通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化流程控制；長(zhǎng)期注射后是否產(chǎn)生抗circRNA抗體，尚需進(jìn)一步研究。04現(xiàn)存挑戰(zhàn)與未來(lái)展望1核心挑戰(zhàn)：從“實(shí)驗(yàn)室”到“臨床”的鴻溝1.1circRNA的規(guī)?；a(chǎn)與純化當(dāng)前circRNA主要通過(guò)IVT合成，但模板線性RNA的殘留、circRNA的純度（需去除未環(huán)化RNA）及產(chǎn)量（通常＜1mg/L）限制了其應(yīng)用。開(kāi)發(fā)“滾環(huán)轉(zhuǎn)錄（RTC）-酶切連接”一步法或CRISPR/Cas9介導(dǎo)的內(nèi)源circRNA表達(dá)系統(tǒng)，有望降低成本并提高產(chǎn)量。1核心挑戰(zhàn)：從“實(shí)驗(yàn)室”到“臨床”的鴻溝1.2納米載體的體內(nèi)穩(wěn)定性與精準(zhǔn)調(diào)控circRNA納米載體在血液循環(huán)中可能被核酸酶降解或被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（MPS）清除，需通過(guò)“表面電荷屏蔽”（如PEG化）、“核定位信號(hào)”（NLS）等策略提升穩(wěn)定性。此外，PTT與PDT的光照參數(shù)（波長(zhǎng)、功率、時(shí)間）需個(gè)體化優(yōu)化，避免“過(guò)度治療”或“治療不足”。1核心挑戰(zhàn)：從“實(shí)驗(yàn)室”到“臨床”的鴻溝1.3免疫原性與長(zhǎng)期安全性盡管circRNA本身免疫原性低，但納米載體表面的PTAs/PSs可能激活補(bǔ)體系統(tǒng)或誘導(dǎo)過(guò)敏反應(yīng)。需建立“免疫原性評(píng)價(jià)體系”，包括細(xì)胞因子釋放檢測(cè)、補(bǔ)體激活實(shí)驗(yàn)等，確保長(zhǎng)期使用的安全性。2未來(lái)展望：多學(xué)科交叉驅(qū)動(dòng)的創(chuàng)新方向2.1智能響應(yīng)型載體的開(kāi)發(fā)結(jié)合“人工智能（AI）與機(jī)器學(xué)習(xí)”，預(yù)測(cè)circRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)與功能元件，設(shè)計(jì)“多重刺激響應(yīng)”（pH/酶/氧化還原/光）載體，實(shí)現(xiàn)“按需釋藥”。例如，AI模擬circRNA與PTAs的結(jié)合自由能，優(yōu)化組裝條件，提升載藥量至90%以上。2未來(lái)展望：多學(xué)科交叉驅(qū)動(dòng)的創(chuàng)新方向2.2診療一體化的構(gòu)建將circRNA納米載體與成像技術(shù)（如磁共振成像MRI、光聲成像PAI）結(jié)合，實(shí)現(xiàn)“治療-成像”