ICS65.080

CCSB10

DB23

黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB23/T3187—2022

花卉肥用原料納豆芽孢桿菌菌粉制備技術(shù)

規(guī)程

2022-05-09發(fā)布2022-06-08實(shí)施

黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB23/T3187—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)

定起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由黑龍江省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出。

本文件起草單位：哈爾濱瑞康源生物科技有限公司、黑龍江省綠色食品科學(xué)研究院。

本文件主要起草人：王英男、楊冬、劉丹怡、王英鵬、吳春梅、劉麗、王克紅。

I

DB23/T3187—2022

花卉肥用原料納豆芽孢桿菌菌粉制備技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了花卉肥用原料納豆芽孢桿菌菌粉制備的術(shù)語和定義、基本要求、原料和設(shè)備、制備流

程與方法、保存方法和技術(shù)檔案。

本文件適用于花卉肥用原料納豆芽孢桿菌菌粉制備。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB20287農(nóng)用微生物菌劑

NY/T883農(nóng)用微生物菌劑生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1114微生物肥料實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基技術(shù)條件

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

納豆芽孢桿菌

納豆芽孢桿菌(Bacillussubtilisnatto)是食品納豆中分離出來的菌種，是枯草芽孢桿菌的一個(gè)

亞種，屬于一類革蘭氏陽性、好氧型、內(nèi)生抗逆芽孢的桿狀細(xì)菌。

3.2

納豆芽孢桿菌菌粉

納豆芽孢桿菌菌粉指納豆芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后再加工制成的含有納豆芽孢桿菌菌體和納豆芽孢

桿菌發(fā)酵產(chǎn)物的粉末狀固形物。

4基本要求

菌種、培養(yǎng)基、發(fā)酵環(huán)境、條件等應(yīng)符合NY/T883的規(guī)定。

5原料和設(shè)備

5.1原料

5.1.1菌種

納豆芽孢桿菌菌種來源應(yīng)符合GB20287的規(guī)定。

1

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5.1.2培養(yǎng)基原料

牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、NaCl、糖蜜、納豆粉、破壁酵母、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、

水、瓊脂。

5.1.3輔助原料

二氧化硅、保護(hù)劑、賦形劑。

5.2儀器與設(shè)備

超凈工作臺(tái)、電熱恒溫培養(yǎng)箱、恒溫震蕩器、分析天平、pH測(cè)定儀、噴霧干燥機(jī)。

6制備流程與方法

6.1制備流程

菌種培養(yǎng)→種子液制備→放大發(fā)酵→發(fā)酵培養(yǎng)→放大發(fā)酵→收集菌泥→發(fā)酵液的濃縮干燥。

6.2制備方法

6.2.1菌種培養(yǎng)

6.2.1.1培養(yǎng)基制備

菌種培養(yǎng)培養(yǎng)基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L,NaCl5g/L,酵母膏5g/L，葡萄糖5g/L，瓊脂粉

18g/L，pH7.0，培養(yǎng)基制備方法按照NY/T1114的規(guī)定執(zhí)行。

6.2.1.2菌種培養(yǎng)方法

菌種培養(yǎng)方法應(yīng)符合下列規(guī)則。

a)冷凍干燥管的納豆芽孢桿菌菌種應(yīng)在無菌環(huán)境下操作：

1)冷凍干燥管表面用70%酒精擦拭后，在火焰上加熱外管尖端，滴數(shù)滴無菌水于加熱處，使

外管破裂，再以硬棒等敲破尖端；

2)取出隔熱纖維紙和內(nèi)管，以無菌鑷子取出內(nèi)管之棉塞，用無菌吸管吸取無菌液體培養(yǎng)基

0.3mL～0.5mL滴入管內(nèi)并輕微震蕩（可用該吸管協(xié)助），直至菌體凍干粉混勻懸浮。

b)-20°C～-80°C低溫保存的甘油管應(yīng)進(jìn)行如下操作：

1)從低溫保存條件取出的納豆芽孢桿菌甘油管置于37°C水浴槽中的管架上，不斷輕微搖動(dòng)

（液面不可高至管塞），直至結(jié)冰完全溶解；

2)上述完全混勻后的菌懸液接種于上述固體斜面培養(yǎng)基上，于37°C恒溫靜置培養(yǎng)24h。

c)4°C保存的納豆芽孢桿菌菌體或者菌液可直接轉(zhuǎn)接培養(yǎng)。

6.2.2種子液制備

6.2.2.1種子培養(yǎng)基制備

種子培養(yǎng)基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L,葡萄糖10g/L，酵母膏5g/L，NaCl5g/L,pH7.0。

6.2.2.2種子培養(yǎng)

活化后的菌體接種于種子培養(yǎng)基中，37℃恒溫震蕩（200r/min）培養(yǎng)24h，得到種子液。

2

DB23/T3187—2022

6.2.3放大發(fā)酵

6.2.3.1發(fā)酵培養(yǎng)基制備

發(fā)酵培養(yǎng)基：糖蜜3g/L～5g/L，納豆粉25g/L～35g/L，破壁酵母2g/L～4g/L，磷酸氫二鈉1g/L～

1.5g/L，磷酸二氫鈉1g/L～1.5g/L，pH調(diào)至7.0～7.5，瓊脂20g/L～32g/L。

6.2.3.2發(fā)酵培養(yǎng)

得到的液體種子均勻噴在發(fā)酵固體平板培養(yǎng)基表面，然后放置于恒溫發(fā)酵室內(nèi)37?℃,24?h,封閉發(fā)

酵培養(yǎng)。

6.2.4收集菌泥

固體平板培養(yǎng)基取出發(fā)酵室，然后用滅菌后的薄片，將所述固體平板培養(yǎng)基上的菌泥刮下來，收集，

得到菌泥。

6.2.5發(fā)酵液的濃縮干燥

將所述菌泥與水按質(zhì)量比1:0.5～3混合，得到菌液，再將所述菌液按質(zhì)量比菌液：二氧化硅＝1:1～

15添加二氧化硅，進(jìn)行吸附干燥，過篩，將篩上物進(jìn)行粉碎后再次過篩，得到菌粉；或?qū)⑺鼍嗯c保

護(hù)劑按照質(zhì)量比1:0.5～2混合后，形成混合液，按所述混合液質(zhì)量的9％～11％添加賦形劑，再利用噴

霧干燥劑對(duì)混合液進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥進(jìn)口溫度為120?℃，出