取消修訂《中國藥典》1121抑菌效力檢查法：2020年版VS2025年版對比表標題2020年版2025年版抑菌劑是指抑制微生物生長的化學物質(zhì)。抑菌效力檢查法系用于測定無菌抑菌劑是指抑制微生物生長的化學物質(zhì)。抑菌效力檢查法系用于測定無菌及非無菌制劑的抑菌活性，用于指導藥品研發(fā)階段制劑中抑菌劑種類和濃度的確定。如果藥物本身不具有充分的抗菌效力，那么應根據(jù)制劑特性(如水分活度，酸堿度或pH值等)添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常貯藏或使用過程中由于微生物污染和繁殖，使藥物變質(zhì)而對使用者造成危害,尤其是多劑量包裝的制劑。在藥品生產(chǎn)過程中，抑菌劑不能用于替代藥品生產(chǎn)的GMP管理，不能作為非無菌制劑降低微生物污染的唯一途徑，也不能作為控制多劑量包裝制劑滅菌前的生物負載的手段。所有抑菌劑都具有一定的毒性，制劑中抑菌劑的量應為最低有效量。同時，為保證用藥安全，成品制劑中的抑菌劑有效濃度應低于對人體有害的濃度。抑菌劑的抑菌效力在貯存過程中有可能因藥物的成分或包裝容器等因素影響而變化,因此,應驗證成品制劑的抑菌效力在效期內(nèi)不因貯藏條件而降低。本試驗方法和抑菌效力判斷標準用于包裝未啟開的成品制劑。及非無菌制劑的抑菌活性，用于指導藥品研發(fā)階段制劑中抑菌劑種類和濃度的確定。如果藥物本身不具有充分的抗菌效力，那么應根據(jù)制劑特性(如水溶性制劑)添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常貯藏或使用過程中由于微生物污染和繁殖，使藥物變質(zhì)而對使用者造成危害,尤其是多劑量包裝的制劑。前言在藥品生產(chǎn)過程中，抑菌劑不能用于替代藥品生產(chǎn)的GMP管理，不能作為非無菌制劑降低微生物污染的唯一途徑，也不能作為控制多劑量包裝制劑滅菌前的生物負載的手段。所有抑菌劑都具有一定的毒性，制劑中抑菌劑的量應為最低有效量。同時，為保證用藥安全，成品制劑中的抑菌劑有效濃度應低于對人體有害的濃度。抑菌劑的抑菌效力在貯存過程中有可能因藥物的成分或包裝容器等因素影響而變化,因此,應驗證成品制劑的抑菌效力在效期內(nèi)不因貯藏條件而降低。本試驗方法和抑菌劑抑菌效力判斷標準用于包裝未啟開的成品制劑。培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基照無菌檢查法(通則1101)制備。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基照無菌檢查法(通則1101)制備。培養(yǎng)基的適用性檢查抑菌效力測定用培養(yǎng)基包括商品化的預制培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應進行培養(yǎng)基的適用性檢查。每批抑菌效力測定用的商品化的預制培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應符合培養(yǎng)基適用性檢查的要求。菌種試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代),并采用適宜的菌種保藏技術進行保存,以保證試驗菌株的生物學特性。培養(yǎng)基適用性檢查的菌種及新鮮培養(yǎng)物的制備見表1。試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代),并采用適宜的菌種保藏技術進行保存,以保證試驗菌株的生物學特性。培養(yǎng)基適用性檢查的菌種及新鮮培養(yǎng)物的制備見表1。表1培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗、抑菌效力測定用的試驗菌及新鮮培養(yǎng)物制備試驗菌株金黃色葡萄球試驗培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：30~35℃培養(yǎng)時間：18~24小時試驗培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：30~35℃培養(yǎng)時間：18~24小時菌(Staphylococcusaureus)[CCMCC(B)26003]銅綠假單胞菌試驗培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：30~35℃培養(yǎng)時間：18~24小時試驗培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：30~35℃培養(yǎng)時間：18~24小時(Pseudomonas[ССМСС(в)10104]大腸埃希菌試驗培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：30~35℃培養(yǎng)時間：18~24小時試驗培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：30~35℃培養(yǎng)時間：18~24小時(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]白色念珠菌試驗培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：20~25℃培養(yǎng)時間：48小時試驗培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：20~25℃培養(yǎng)時間：48小時(Candidaalbicans)001]黑曲霉試驗培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：20~25℃培養(yǎng)時間：6~10天或直到獲得豐富的孢子試驗培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：20~25℃培養(yǎng)時間：5~7天或直到獲得足量的孢子(Aspergillusniger)003]注*大腸埃希菌僅用于口服制劑的抑菌效力測定。*大腸埃希菌僅用于口服制劑的抑菌效力測定。菌液制備取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入適量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內(nèi)使用；若保存在2～8℃，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉的孢子懸液可保存在2~8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液。取黑曲霉培養(yǎng)物加入適量含0.05%(g/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%(g/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%(g/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%(g/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內(nèi)使用；若保存在2～8℃，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉的孢子懸液可保存在2~8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。適用性檢查分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌的菌液至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平板，混勻，凝固，置30~35℃培養(yǎng)不超過3天，計數(shù)；分別接種不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平板，混勻，凝固，置20~25℃培養(yǎng)不超過5天，計數(shù)；同時，用對應的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌的菌液至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平板，混勻，凝固，置30~35℃培養(yǎng)不超過3天，計數(shù)；分別接種不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平板，混勻，凝固，置20~25℃培養(yǎng)不超過5天，計數(shù)；同時，用對應的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。結果判定若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)的50%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)的比值應在0.5~2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。抑菌效力測定菌種抑菌效力測定用菌種見表1，若需要，制劑中常見的污染微生物也可作為試驗菌株，例如含高濃度糖的口服制劑還應選用魯氏酵母為試驗菌株。抑菌效力測定用菌種見表1，若需要，制劑中常見的污染微生物也可作為試驗菌株，例如含高濃度糖的口服制劑還應選用魯氏酵母為試驗菌株。菌液制備試驗菌新鮮培養(yǎng)物制備見表1，銅綠假單胞菌菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌若為瓊脂培菌養(yǎng)物，加入適量的0.9%無菌氯化鈉溶液將瓊脂表面的培養(yǎng)物洗脫，并將菌懸液移至無菌試管內(nèi)，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋并制成每1ml含菌數(shù)約為10cfu的菌懸液；若為液體培養(yǎng)物，離心收集菌體，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋并制成每1ml含菌數(shù)約為10cfu的菌懸液。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入適量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，加入適量的含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)10cfu的孢子懸液。測定1ml菌懸液中所含的菌數(shù)。菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內(nèi)使用；若保存在2~8℃，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉的孢子懸液可保存在2～8℃，在7天內(nèi)使用。試驗菌新鮮培養(yǎng)物制備見表1，銅綠假單胞菌菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌若為瓊脂培菌養(yǎng)物，加入適量的0.9%無菌氯化鈉溶液將瓊脂表面的培養(yǎng)物洗脫，并將菌懸液移至無菌試管內(nèi)，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋并制成每1ml含菌數(shù)約為10cfu的菌懸液；若為液體培養(yǎng)物，離心收集菌體，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋并制成每1ml含菌數(shù)約為10cfu的菌懸液。取黑曲霉培養(yǎng)物加入適量含0.05%)聚山梨酯80的0.9無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，加入適量的含0.05%(g/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)10cfu的孢子懸液。測定1ml菌懸液中所含的菌數(shù)。必要時，試驗菌的接種量和接種濃度可通過濁度法評估,再通過平板計數(shù)法確認。菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內(nèi)使用；若保存在2~8℃，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉的孢子懸液可保存在2～8℃，在7天內(nèi)使用。供試品接種抑菌效力可能受試驗用容器特征的影響，如容器的材質(zhì)、形狀、體積及封口的方式等。因此，只要供試品每個包裝容器的裝量足夠試驗用，同時容器便于按無菌操作技術接入試驗菌液、混合及取樣等，一般應將試驗菌直接接種于供試品原包裝容器中進行試驗。若因供試品的性狀或每個容器裝量等因素需將供試品轉(zhuǎn)移至無菌容器時，該容器的材質(zhì)不得影響供試品的特性（如吸附作用），特別應注意不得影響供試品的pH值，pH值對抑菌劑的活性影響很大。取包裝完整的供試品至少4份，直接接種試驗菌，或取適量供試品分別轉(zhuǎn)移至4個適宜的無菌容器中，若試驗菌株數(shù)超過4株，應增加相應的供試品份數(shù)，每一容器接種一種試驗菌，1g或1ml供試品中接菌量為10~10cfu，接種菌液的體積不得超過供試品體積的1%，充分混合，使供試品中的試驗菌均勻分布，然后置20~25℃避光貯存。抑菌效力可能受試驗用容器特征的影響，如容器的材質(zhì)、形狀、體積及封口的方式等。因此，只要供試品每個包裝容器的裝量足夠試驗用，同時容器便于按無菌操作技術接入試驗菌液、混合及取樣等，一般應將試驗菌直接接種于供試品原包裝容器中進行試驗。若因供試品的性狀或每個容器裝量等因素需將供試品轉(zhuǎn)移至無菌容器時，該容器的材質(zhì)不得影響供試品的特性（如吸附作用），特別應注意不得影響供試品的pH值，pH值對抑菌劑的活性影響很大。取包裝完整的供試品至少4份，直接接種試驗菌，或取適量供試品分別轉(zhuǎn)移至4個適宜的無菌容器中，若試驗菌株數(shù)超過4株，應增加相應的供試品份數(shù)，每一容器接種一種試驗菌，1g或1ml供試品中接菌量為10~10cfu，接種菌液的體積不得超過供試品體積的1%，充分混合，使供試品中的試驗菌均勻分布，然后置20~25℃避光貯存。存活菌數(shù)測定根據(jù)產(chǎn)品類型，按表2-1、表2-2、表2-3規(guī)定的間隔時間，分別從上述每個容器中取供試品1ml(g)，測定每份供試品中所含的菌數(shù)，測定細菌用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，測定真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。存活菌數(shù)測定方法及方法適用性試驗照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢法查:微生物計數(shù)法(通則1105)進行,方法適用性試驗用菌株見表1法適用性試驗試驗菌的回收率不得低于50%。根據(jù)存活菌數(shù)測定結果,計算1ml(g)供試品各試驗菌所加的菌數(shù)及各間隔時間的菌數(shù)，并換算成lg值。根據(jù)產(chǎn)品類型，按表2-1、表2-2、表2-3規(guī)定的間隔時間，分別從上述每個容器中取適量供試品，一般為1ml(g)，測定每份供試品中所含的菌數(shù)，測定細菌用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，測定真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。存活菌數(shù)測定方法及方法適用性試驗照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢法查:微生物計數(shù)法(通則1105)進行,每株試驗菌包括平皿法和薄膜過濾法)應進行平行測定,以算術平均值作為計數(shù)結果。方法適用性試驗用菌株見表1,菌液制備同培養(yǎng)基適用性檢查,方法適用性試驗試驗菌的回收比值應在0.5~2范圍內(nèi)。如果藥物的抑菌性較強，無適宜的中和劑或其他消除供試品抑菌活性的方法，采用較高稀釋（如10或10)可滿足存活菌數(shù)測定方法適用性的要求，采用此方法進行抑菌效力測定時，可以依據(jù)對數(shù)減少值的可接受標準，接種較高含量的試驗菌（如1g或1ml供試品中接菌量為10~10cfu)。根據(jù)存活菌數(shù)測定結果,計算1ml(g)供試品各試驗菌