2025年核酸檢測員證試題及答案一、單項選擇題（共20題，每題2分，共40分）1.新型冠狀病毒核酸檢測常用的靶基因不包括以下哪項？A.ORF1ab基因B.N基因C.S基因D.GAPDH基因答案：D解析：GAPDH基因為內(nèi)參基因，用于驗證樣本核酸提取的有效性，并非新型冠狀病毒特異性靶基因。2.核酸檢測實驗室中，用于樣本處理和核酸提取的區(qū)域是？A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本處理區(qū)（提取區(qū)）C.擴(kuò)增區(qū)D.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)答案：B解析：PCR實驗室通常分為四個獨立區(qū)域：試劑準(zhǔn)備區(qū)（配制反應(yīng)體系）、樣本處理區(qū)（提取核酸）、擴(kuò)增區(qū)（進(jìn)行PCR擴(kuò)增）、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)（檢測擴(kuò)增結(jié)果）。3.核酸提取過程中，若使用磁珠法，關(guān)鍵步驟不包括？A.細(xì)胞裂解B.磁珠與核酸結(jié)合C.磁珠洗滌D.酶切消化答案：D解析：磁珠法提取核酸的核心步驟為細(xì)胞裂解（釋放核酸）、磁珠與核酸特異性結(jié)合（在高鹽低pH條件下）、磁珠洗滌（去除雜質(zhì)）、核酸洗脫（低鹽高pH條件下脫離磁珠）。酶切消化多用于基因工程，非常規(guī)核酸提取步驟。4.實時熒光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定義是？A.擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到設(shè)定閾值時的循環(huán)數(shù)B.擴(kuò)增反應(yīng)的初始模板量C.熒光信號達(dá)到平臺期的時間D.反應(yīng)體系的最大熒光值答案：A解析：Ct值（CycleThreshold）指熒光信號達(dá)到設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，與初始模板量的對數(shù)成反比，是定量分析的核心參數(shù)。5.核酸檢測樣本采集時，咽拭子應(yīng)擦拭的部位是？A.舌尖B.扁桃體隱窩及咽后壁C.軟腭D.牙齦答案：B解析：咽拭子采集需用拭子越過舌根，在兩側(cè)扁桃體隱窩及咽后壁適度用力擦拭，確保采集到呼吸道上皮細(xì)胞。6.新冠病毒核酸檢測樣本的短期保存（48小時內(nèi)）應(yīng)置于？A.25℃室溫B.4℃冰箱C.-20℃冰箱D.-80℃冰箱答案：B解析：《新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術(shù)指南》規(guī)定，樣本采集后應(yīng)盡快送檢；48小時內(nèi)檢測的樣本可4℃保存，長期保存需-20℃或-80℃。7.以下哪種情況會導(dǎo)致qPCR結(jié)果出現(xiàn)假陰性？A.樣本采集量不足B.擴(kuò)增儀溫度校準(zhǔn)偏差（退火溫度過低）C.反應(yīng)體系中引物濃度過高D.熒光探針標(biāo)記錯誤答案：A解析：樣本采集量不足（如咽拭子未接觸到感染部位）會導(dǎo)致核酸模板量過低，可能低于檢測限，出現(xiàn)假陰性；B、C、D選項更可能導(dǎo)致假陽性或擴(kuò)增效率異常。8.核酸檢測實驗室的生物安全等級應(yīng)為？A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-4答案：B解析：新型冠狀病毒屬于第二類病原微生物，其核酸檢測（非活病毒操作）應(yīng)在BSL-2實驗室進(jìn)行；涉及病毒分離培養(yǎng)時需BSL-3。9.核酸提取過程中，使用75%乙醇洗滌磁珠的主要目的是？A.裂解細(xì)胞B.滅活病毒C.去除蛋白質(zhì)、鹽離子等雜質(zhì)D.促進(jìn)核酸與磁珠結(jié)合答案：C解析：75%乙醇洗滌可溶解殘留的蛋白質(zhì)、鹽類等雜質(zhì)，同時保持核酸與磁珠的結(jié)合狀態(tài)（高鹽條件下），最終通過洗脫步驟獲得純凈核酸。10.以下關(guān)于實驗室污染控制的說法，錯誤的是？A.不同區(qū)域的物品嚴(yán)格區(qū)分，不得交叉使用B.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可使用紫外燈消毒C.樣本處理區(qū)應(yīng)配置生物安全柜D.實驗結(jié)束后，工作臺面用1%次氯酸鈉擦拭答案：B解析：擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)（如電泳區(qū)）存在大量PCR產(chǎn)物（DNA片段），紫外燈無法有效降解已擴(kuò)增的DNA（需配合脫氧核糖核酸酶或?qū)ｉT的污染清除試劑）；試劑準(zhǔn)備區(qū)和樣本處理區(qū)可使用紫外燈消毒。11.核酸檢測質(zhì)量控制中，陰性對照的作用是？A.驗證試劑有效性B.檢測是否存在交叉污染C.校準(zhǔn)擴(kuò)增儀溫度D.評估樣本核酸提取效率答案：B解析：陰性對照（無模板的反應(yīng)體系）用于監(jiān)測實驗過程中是否存在環(huán)境或試劑污染（如氣溶膠污染），若陰性對照出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，則提示污染。12.新冠病毒核酸檢測的金標(biāo)準(zhǔn)是？A.抗原檢測B.抗體檢測C.實時熒光定量PCRD.病毒分離培養(yǎng)答案：C解析：實時熒光定量PCR因靈敏度高、特異性強(qiáng)，是目前新冠病毒核酸檢測的金標(biāo)準(zhǔn)；病毒分離培養(yǎng)雖為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但操作復(fù)雜、耗時，不用于常規(guī)檢測。13.核酸提取儀的日常維護(hù)不包括？A.定期校準(zhǔn)加樣針精度B.清潔磁棒組件C.更換擴(kuò)增儀熱蓋D.檢查廢液桶密封性答案：C解析：擴(kuò)增儀屬于擴(kuò)增區(qū)設(shè)備，與核酸提取儀無關(guān)；提取儀維護(hù)需關(guān)注加樣精度、磁棒清潔（避免磁珠殘留）、廢液處理（防止泄漏）等。14.以下哪種樣本類型不適用于新冠病毒核酸檢測？A.鼻咽拭子B.痰液C.血液D.糞便答案：C解析：新冠病毒主要感染呼吸道上皮細(xì)胞，血液中病毒載量極低（僅在重癥患者可能出現(xiàn)病毒血癥），不推薦作為常規(guī)檢測樣本；糞便可用于部分病例的輔助檢測。15.qPCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是？A.提供反應(yīng)所需能量B.作為DNA合成的原料C.穩(wěn)定反應(yīng)體系pHD.結(jié)合模板DNA答案：B解析：dNTP（脫氧核苷酸三磷酸）是DNA鏈延伸的原料，在DNA聚合酶作用下，通過磷酸二酯鍵連接形成新的DNA鏈。16.核酸檢測報告的基本信息不包括？A.檢測方法B.樣本類型C.被檢者血型D.檢測結(jié)果（陽性/陰性）答案：C解析：核酸檢測報告需包含被檢者身份信息（姓名、身份證號）、樣本信息（類型、采集時間）、檢測信息（方法、結(jié)果、檢測時間）、實驗室信息（名稱、蓋章）等；血型非必要信息。17.實驗室發(fā)生樣本泄漏時，正確的處理流程是？A.立即用紙巾擦拭，倒入普通垃圾桶B.用1%次氯酸鈉覆蓋污染區(qū)域，作用30分鐘后清理C.直接用清水沖洗，開啟紫外燈消毒D.撤離實驗室，等待24小時后處理答案：B解析：樣本泄漏（含潛在病毒）時，應(yīng)先用吸濕材料覆蓋（如紗布），再用1%次氯酸鈉（有效氯10000mg/L）浸泡30分鐘，然后清理并對區(qū)域再次消毒；禁止直接擦拭或沖洗。18.以下關(guān)于核酸檢測結(jié)果判讀的說法，正確的是？A.Ct值>40可直接判為陰性B.Ct值<35且雙靶標(biāo)陽性可判為陽性C.單靶標(biāo)陽性無需復(fù)核D.陰性結(jié)果可完全排除感染答案：B解析：根據(jù)《新型冠狀病毒肺炎診療方案》，雙靶標(biāo)（如ORF1ab和N基因）Ct值均<40且擴(kuò)增曲線明顯，可判為陽性；單靶標(biāo)陽性需復(fù)核；Ct值>40但曲線不典型時需結(jié)合臨床綜合判斷；陰性結(jié)果不能完全排除感染（可能因采樣時機(jī)或方法問題）。19.核酸提取過程中，若離心管未蓋緊，最可能導(dǎo)致？A.核酸降解B.樣本交叉污染C.磁珠丟失D.試劑揮發(fā)答案：B解析：未蓋緊的離心管在震蕩或離心時可能導(dǎo)致液體濺出，造成不同樣本間的交叉污染；核酸降解主要由核酸酶污染或保存不當(dāng)引起。20.實驗室生物安全防護(hù)裝備中，不屬于一級防護(hù)的是？A.醫(yī)用外科口罩B.一次性乳膠手套C.護(hù)目鏡D.防護(hù)服答案：D解析：一級防護(hù)（基礎(chǔ)防護(hù)）包括醫(yī)用外科口罩、手套、工作帽、護(hù)目鏡；二級防護(hù)（加強(qiáng)防護(hù)）需穿戴防護(hù)服、N95口罩、雙層手套等，適用于樣本處理區(qū)等高風(fēng)險操作。二、多項選擇題（共10題，每題3分，共30分，每題至少2個正確選項，錯選、漏選均不得分）1.核酸檢測實驗室的“四區(qū)一室”包括以下哪些區(qū)域？A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本處理區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)E.高壓滅菌室答案：ABCD解析：“四區(qū)”指PCR實驗室的四個功能區(qū)（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)），“一室”通常指緩沖室（非必須）；高壓滅菌室為輔助區(qū)域。2.影響qPCR檢測靈敏度的因素包括？A.引物/探針的特異性B.樣本中病毒載量C.擴(kuò)增儀的溫度準(zhǔn)確性D.反應(yīng)體系的體積E.檢測人員的操作熟練程度答案：ABCDE解析：引物/探針設(shè)計不合理（非特異性結(jié)合）、病毒載量過低（低于檢測限）、擴(kuò)增儀溫度偏差（影響退火效率）、反應(yīng)體系體積不準(zhǔn)確（模板量稀釋）、操作不規(guī)范（如加樣誤差）均會影響靈敏度。3.核酸檢測樣本采集時，需遵循的原則有？A.無菌操作B.一人一管一拭子C.采集后立即滅活（如添加病毒保存液）D.記錄采集時間、人員信息E.樣本可與其他檢測樣本混裝答案：ABCD解析：樣本需單獨分裝（一人一管），避免混裝導(dǎo)致交叉污染；病毒保存液含滅活成分（如胍鹽），可防止病毒活性；需記錄完整信息以便溯源。4.以下屬于實驗室生物安全事故的是？A.樣本管未密封導(dǎo)致氣溶膠擴(kuò)散B.實驗人員未戴手套接觸樣本C.廢棄拭子直接投入普通垃圾桶D.生物安全柜風(fēng)機(jī)故障E.擴(kuò)增儀顯示屏故障答案：ABCD解析：生物安全事故指因操作不當(dāng)或設(shè)備故障導(dǎo)致病原微生物泄漏、人員暴露等風(fēng)險事件；擴(kuò)增儀顯示屏故障屬于設(shè)備故障，不直接涉及生物安全。5.核酸提取質(zhì)量的評價指標(biāo)包括？A.核酸濃度（OD260）B.純度（OD260/OD280）C.完整性（電泳條帶）D.內(nèi)參基因Ct值E.擴(kuò)增效率答案：ABCDE解析：通過分光光度計檢測濃度（OD260）和純度（260/280應(yīng)為1.8-2.0），電泳觀察完整性（RNA需28S、18S條帶清晰），內(nèi)參基因Ct值（反映提取效率），擴(kuò)增效率（90%-110%為佳）綜合評價。6.以下哪些操作可能導(dǎo)致PCR污染？A.在樣本處理區(qū)拆封新引物B.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的移液器用于樣本處理區(qū)C.實驗后未對工作臺面消毒D.使用同一把移液器加樣所有反應(yīng)體系E.陽性對照與樣本同時處理答案：BCDE解析：引物應(yīng)在試劑準(zhǔn)備區(qū)（清潔區(qū)）拆封；跨區(qū)使用移液器（如擴(kuò)增區(qū)的槍用于樣本區(qū)）會導(dǎo)致污染；未消毒臺面可能殘留核酸；同一移液器加樣可能交叉污染；陽性對照應(yīng)最后處理，避免氣溶膠擴(kuò)散。7.新冠病毒核酸檢測的適用場景包括？A.疑似病例診斷B.密切接觸者篩查C.入境人員檢測D.治愈患者復(fù)查E.健康人群大規(guī)模篩查答案：ABCDE解析：核酸檢測廣泛用于診斷、篩查、監(jiān)測等場景，包括疑似病例確認(rèn)、密接排查、入境管控、康復(fù)隨訪及大規(guī)模人群篩查。8.核酸提取過程中，使用蛋白酶K的目的是？A.裂解細(xì)胞膜B.降解蛋白質(zhì)C.滅活核酸酶D.促進(jìn)核酸與磁珠結(jié)合E.提高提取效率答案：BCE解析：蛋白酶K可降解樣本中的蛋白質(zhì)（如核蛋白復(fù)合體），釋放核酸；同時滅活樣本中的核酸酶（如DNA酶、RNA酶），防止核酸降解，從而提高提取效率。9.實驗室質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)包括？A.試劑驗收（批間差異檢測）B.設(shè)備校準(zhǔn)（擴(kuò)增儀溫度、加樣器精度）C.人員培訓(xùn)與考核D.室內(nèi)質(zhì)控（陰/陽性對照）E.室間質(zhì)評（參加上級實驗室比對）答案：ABCDE解析：質(zhì)量控制涵蓋試劑管理、設(shè)備維護(hù)、人員能力、室內(nèi)質(zhì)控（每批檢測必做）、室間質(zhì)評（定期參加）等全流程環(huán)節(jié)。10.以下關(guān)于核酸檢測報告的說法，正確的是？A.需由授權(quán)人員審核簽發(fā)B.結(jié)果需注明“檢測陰性”或“未檢測到”C.報告格式應(yīng)符合衛(wèi)生行政部門要求D.電子報告與紙質(zhì)報告具有同等效力E.報告保存期限不少于2年答案：ABCDE解析：根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理辦法》，報告需雙人審核（操作人員+授權(quán)人員），結(jié)果表述規(guī)范（避免“正?！钡饶：g(shù)語），格式統(tǒng)一，電子報告需加密可溯源，保存至少2年。三、判斷題（共10題，每題1分，共10分，正確填“√”，錯誤填“×”）1.核酸檢測實驗室可與其他檢測項目共用同一實驗室，無需分區(qū)。（×）解析：PCR實驗室需嚴(yán)格分區(qū)，防止交叉污染。2.樣本采集時，若被檢者已接種新冠疫苗，需間隔48小時后再采樣。（√）解析：部分疫苗為滅活疫苗或重組蛋白疫苗，不影響核酸檢測；但腺病毒載體疫苗可能含病毒核酸序列，需間隔48小時避免假陽性。3.核酸提取過程中，離心步驟的主要目的是沉淀細(xì)胞碎片。（√）解析：離心可使細(xì)胞碎片、雜質(zhì)沉淀，上清含核酸，便于后續(xù)提取。4.qPCR反應(yīng)中，ROX染料用于校準(zhǔn)儀器信號漂移。（√）解析：ROX（參比染料）作為內(nèi)參，用于校正不同孔間的熒光信號差異（如加樣體積誤差）。5.實驗室廢棄的核酸提取試劑（如裂解液）可直接排入下水道。（×）解析：裂解液含胍鹽、乙醇等化學(xué)物質(zhì)，需按實驗室化學(xué)廢棄物處理，不可直接排放。6.核酸檢測結(jié)果為陰性時，無需記錄原始數(shù)據(jù)（如擴(kuò)增曲線）。（×）解析：原始數(shù)據(jù)（包括擴(kuò)增曲線、Ct值）需長期保存，用于結(jié)果追溯和質(zhì)量核查。7.生物安全柜使用時，需確保前窗操作口高度符合要求（一般為20-25cm）。（√）解析：前窗過高或過低會影響氣流屏障效果，需按說明書調(diào)整至規(guī)定高度。8.核酸檢測中，內(nèi)參基因陰性提示樣本可能被污染。（×）解析：內(nèi)參基因陰性提示樣本核酸提取失?。ㄈ绮杉坎蛔恪⒑怂峤到猓?，而非污染。9.實驗室發(fā)生火災(zāi)時，應(yīng)優(yōu)先轉(zhuǎn)移檢測樣本。（×）解析：人員安全優(yōu)先于樣本，發(fā)生火災(zāi)時應(yīng)立即撤離并報警。10.核酸檢測試劑的有效期指未開封狀態(tài)下的保存期限，開封后需在規(guī)定時間內(nèi)使用。（√）解析：試劑開封后可能因反復(fù)凍融、污染等導(dǎo)致性能下降，需按說明書規(guī)定的開封后有效期使用。四、簡答題（共4題，每題5分，共20分）1.簡述PCR實驗室“四區(qū)”的功能及氣流方向要求。答案：PCR實驗室四區(qū)包括：（1）試劑準(zhǔn)備區(qū)：配制PCR反應(yīng)體系（如引物、dNTP、酶等），需嚴(yán)格避免核酸污染；（2）樣本處理區(qū)（提取區(qū)）：進(jìn)行樣本核酸提取、逆轉(zhuǎn)錄（針對RNA病毒），需處理原始樣本（含潛在病原體）；（3）擴(kuò)增區(qū)：進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，溫度循環(huán)使DNA復(fù)制；（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：檢測擴(kuò)增結(jié)果（如熒光讀取、電泳），處理已擴(kuò)增的DNA片段（高污染風(fēng)險）。氣流方向要求：為防止污染擴(kuò)散，四區(qū)需保持單向壓力梯度，即試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣本處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，壓力逐漸降低（或維持正壓到負(fù)壓），避免空氣逆向流動。2.核酸提取過程中，如何避免RNA降解？答案：避免RNA降解需注意以下幾點：（1）使用無RNA酶的耗材（如DEPC處理的離心管、槍頭）；（2）實驗環(huán)境清潔，避免RNA酶污染（如戴手套、口罩，操作前用75%乙醇擦拭臺面）；（3）樣本采集后盡快處理（RNA易降解），若不能及時提取，需-80℃保存；（4）提取過程中加入RNA酶抑制劑（如RNasin）；（5）避免反復(fù)凍融（RNA溶液應(yīng)分裝保存，減少凍融次數(shù)）；（6）提取完成后盡快進(jìn)行擴(kuò)增（RNA在4℃短期保存不超過24小時）。3.簡述核酸檢測中“假陽性”的常見原因及預(yù)防措施。答案：假陽性常見原因：（1）擴(kuò)增產(chǎn)物污染（氣溶膠擴(kuò)散至樣本處理區(qū)或試劑準(zhǔn)備區(qū)）；（2）樣本交叉污染（如加樣時槍頭未更換、樣本管未密封）；（3）試劑污染（引物、dNTP等被陽性模板污染）；（4）操作不規(guī)范（如跨區(qū)使用移液器、實驗后未消毒）。預(yù)防措施：（1）嚴(yán)格分區(qū)操作，各區(qū)物品專用；（2）使用帶濾芯的槍頭，避免氣溶膠吸入移液器；（3）實驗前后對臺面、設(shè)備進(jìn)行消毒（如1%次氯酸鈉擦拭、紫外燈照射）；（4）每批檢測設(shè)置陰性對照（監(jiān)測污染）；（5）試劑分裝保存，避免反復(fù)凍融；（6）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)與其他區(qū)域物理隔離，使用專用移液器。4.簡述新冠病毒核酸檢測樣本的采集、運輸與保存要求。答案：（1）采集要求：使用無菌拭子（鼻咽拭子或咽拭子），規(guī)范擦拭目標(biāo)區(qū)域（如咽后壁、扁桃體），避免接觸其他部位；每例樣本使用獨立拭子和采集管（含病毒保存液），立即密封。（2）