2025年大學(xué)（生物技術(shù)）基因工程實(shí)驗(yàn)試題

（考試時(shí)間：90分鐘滿分100分）班級(jí)______姓名______第I卷（選擇題，共30分）（總共10題，每題3分，每題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)將正確答案填在括號(hào)內(nèi)）1.基因工程中常用的工具酶不包括以下哪種？（）A.限制性核酸內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.淀粉酶2.以下關(guān)于質(zhì)粒的說法，錯(cuò)誤的是（）A.是一種環(huán)狀雙鏈DNA分子B.能獨(dú)立于染色體外進(jìn)行復(fù)制C.不能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在D.可作為基因工程的載體3.限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生的末端通常是（）A.平末端B.黏性末端C.兩者都有D.以上都不對(duì)4.基因工程中構(gòu)建重組DNA分子常用的載體是（）A.噬菌體B.質(zhì)粒C.病毒D.以上都是5.以下哪種方法可用于檢測重組DNA分子是否導(dǎo)入受體細(xì)胞？（）A.核酸雜交B.蛋白質(zhì)電泳C.細(xì)胞培養(yǎng)D.顯微鏡觀察6.基因工程中目的基因的獲取方法不包括（）A.從基因組文庫中篩選B.從cDNA文庫中篩選C.化學(xué)合成D.細(xì)胞融合7.用于將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA的酶是（）A.DNA聚合酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.RNA聚合酶D.限制性核酸內(nèi)切酶8.基因工程中轉(zhuǎn)化的概念是指（）A.將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞B.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞C.將載體導(dǎo)入受體細(xì)胞D.將蛋白質(zhì)導(dǎo)入受體細(xì)胞9.以下關(guān)于PCR技術(shù)的說法，正確的是（）A.是一種體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)B.需要引物C.需要DNA聚合酶D.以上都是10.基因工程中篩選陽性克隆的方法不包括（）A.抗生素抗性篩選B.藍(lán)白斑篩選C.核酸雜交篩選D.細(xì)胞凋亡篩選第II卷（非選擇題，共70分）二、填空題（每題3分共15分）1.基因工程的核心步驟是____________________。2.限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的DNA序列具有____________________特點(diǎn)。3.常用的DNA連接酶有____________________和____________________。4.基因工程中常用的受體細(xì)胞有____________________、____________________等。5.PCR技術(shù)的三個(gè)基本反應(yīng)步驟是____________________、____________________、____________________。三、簡答題（每題10分共30分）1.簡述基因工程的基本操作流程。2.w說明限制性核酸內(nèi)切酶在基因工程中的作用及特點(diǎn)。3.闡述基因工程中載體應(yīng)具備的條件。四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題（15分）現(xiàn)有一未知基因，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案獲取該基因并構(gòu)建其表達(dá)載體。要求：寫出實(shí)驗(yàn)思路、主要實(shí)驗(yàn)步驟及用到的主要工具酶和試劑。實(shí)驗(yàn)思路：首先通過一定方法獲取未知基因，然后選擇合適載體，利用工具酶將基因與載體連接構(gòu)建表達(dá)載體。主要實(shí)驗(yàn)步驟：1.從相關(guān)生物材料中提取總RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。2.根據(jù)已知信息設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增目的基因。3.選擇合適載體，用限制性核酸內(nèi)切酶切割載體和目的基因。4.用DNA連接酶將目的基因與載體連接。用到的主要工具酶和試劑：逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶、總RNA提取試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑、載體等。五、分析題（10分）在基因工程實(shí)驗(yàn)中，對(duì)構(gòu)建的重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)酶切產(chǎn)物電泳條帶與預(yù)期不符。請(qǐng)分析可能出現(xiàn)這種情況的原因?？赡茉颍阂皇敲盖蟹磻?yīng)體系中酶的活性受到抑制，比如反應(yīng)體系中存在抑制劑，或者酶保存不當(dāng)失活。二是質(zhì)粒提取過程中出現(xiàn)問題，導(dǎo)致質(zhì)粒不純或結(jié)構(gòu)異常。三是引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤，導(dǎo)致擴(kuò)增得到的目的基因片段不準(zhǔn)確，進(jìn)而影響重組質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)。四是連接反應(yīng)不成功，目的基因未正確連接到載體上，使得重組質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)不符合預(yù)期。答案：一、1.D2.C3.C4.D5.A6.D7.B8.A9.D10.D二、1.構(gòu)建重組DNA分子2.特異性3.E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶4.大腸桿菌、酵母菌5.變性、退火、延伸三、1.基因工程基本操作流程：獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定。2.作用：識(shí)別特定DNA序列并切割，產(chǎn)生末端用于后續(xù)連接等操作。特點(diǎn)：具有特異性識(shí)別序列，切割位點(diǎn)具有特定性。3.條件：有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；有標(biāo)記基因便于篩選；能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；分子量小，便于操作。四、實(shí)驗(yàn)思路：首先通過一定方法獲取未知基因，然后選擇合適載體，利用工具酶將基因與載體連接構(gòu)建表達(dá)載體。主要實(shí)驗(yàn)步驟：1.從相關(guān)生物材料中提取總RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。2.根據(jù)已知信息設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增目的基因。3.選擇合適載體，用限制性核酸內(nèi)切酶切割載體和目的基因。4.用DNA連接酶將目的基因與載體連接。用到的主要工具酶和試劑：逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶、總RNA提取試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑、載體等。五、可能原因：一是酶切反應(yīng)體系中酶的活性受到抑制，比如反應(yīng)體系中存在