2025年新冠基因檢測試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共30題，合計60分）1.關(guān)于新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）基因組特征，以下描述錯誤的是：A.為單股正鏈RNA病毒，基因組長度約29.9kbB.包含5’端帽子結(jié)構(gòu)和3’端poly(A)尾C.主要開放閱讀框（ORF）包括ORF1ab、S、E、M、N基因D.基因組變異主要集中于N基因，S基因相對保守答案：D（解析：SARS-CoV-2變異主要集中于刺突蛋白（S）基因，N基因相對保守。）2.實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測新冠病毒時，若Ct值為30，提示：A.樣本中病毒載量極高，傳染性強B.病毒載量較低，可能處于感染早期或恢復(fù)期C.Ct值超過35為陽性閾值，故該結(jié)果為陰性D.需立即重復(fù)檢測，排除污染可能答案：B（解析：Ct值與病毒載量呈負(fù)相關(guān)，Ct值30通常對應(yīng)中等偏低載量，可能為感染早期或恢復(fù)期樣本；目前多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)將Ct≤35判定為陽性。）3.新冠病毒基因檢測中，內(nèi)參基因（如人RPP30）的主要作用是：A.驗證引物特異性B.監(jiān)測樣本采集和處理過程中是否存在核酸損失C.提高檢測靈敏度D.區(qū)分不同變異株答案：B（解析：內(nèi)參基因用于評估樣本質(zhì)量，確認(rèn)核酸提取過程未丟失，避免假陰性。）4.設(shè)計新冠病毒RT-PCR引物時，最關(guān)鍵的原則是：A.引物長度需嚴(yán)格控制在18-22bpB.引物應(yīng)靶向病毒基因組高度保守區(qū)域C.引物GC含量需≥60%D.引物3’端可設(shè)計為A或T以提高特異性答案：B（解析：靶向保守區(qū)域可避免因病毒變異導(dǎo)致的漏檢，是引物設(shè)計的核心要求。）5.采用恒溫擴增技術(shù)（如LAMP）檢測新冠病毒時，其優(yōu)勢在于：A.對實驗室設(shè)備要求低，適合基層快速檢測B.靈敏度顯著高于RT-PCRC.可同時檢測多種變異株D.結(jié)果判讀無需專業(yè)人員答案：A（解析：LAMP無需PCR儀，通過恒溫反應(yīng)即可擴增，適合現(xiàn)場快速檢測；但靈敏度與RT-PCR相當(dāng)，結(jié)果判讀仍需培訓(xùn)。）6.關(guān)于新冠病毒樣本保存與運輸，以下操作正確的是：A.咽拭子樣本采集后，可在常溫下保存72小時B.病毒保存液選擇時，需優(yōu)先使用含胍鹽的滅活型保存液C.運輸時應(yīng)使用普通快遞，避免冷鏈導(dǎo)致核酸降解D.樣本管需裝滿保存液，防止拭子干燥答案：B（解析：滅活型保存液（如含胍鹽）可有效滅活病毒，保障操作安全；樣本應(yīng)4℃保存≤72小時，-20℃長期保存；需采用冷鏈運輸，保存液體積需覆蓋拭子但無需裝滿。）7.某實驗室檢測新冠樣本時，陰性對照出現(xiàn)擴增曲線，最可能的原因是：A.樣本核酸提取效率低B.引物設(shè)計錯誤C.實驗室交叉污染D.熒光探針降解答案：C（解析：陰性對照擴增提示實驗過程中存在污染，如擴增產(chǎn)物泄漏、移液器未消毒等。）8.針對奧密克戎變異株（Omicron）的基因檢測，需重點關(guān)注的突變位點是：A.S基因的D614G突變B.N基因的R203K/G204R突變C.S基因的F486V、R346T、K444T突變D.E基因的122del突變答案：C（解析：奧密克戎變異株（如XBB.1.5、EG.5）的關(guān)鍵突變集中于S基因的受體結(jié)合域（RBD），如F486V、R346T等，是區(qū)分于其他變異株的特征。）9.數(shù)字PCR（dPCR）檢測新冠病毒的優(yōu)勢不包括：A.絕對定量，無需標(biāo)準(zhǔn)曲線B.對抑制物耐受性更強C.可檢測極低濃度病毒（單拷貝）D.檢測時間顯著短于RT-PCR答案：D（解析：dPCR需進(jìn)行微滴生成和分區(qū)擴增，檢測時間與RT-PCR相近，甚至更長；其優(yōu)勢在于絕對定量和高靈敏度。）10.新冠病毒全基因組測序（WGS）的主要應(yīng)用場景是：A.大規(guī)模篩查疑似病例B.監(jiān)測病毒變異趨勢，追蹤傳播鏈C.快速診斷急性期感染D.評估疫苗保護(hù)效力答案：B（解析：WGS耗時較長（通常需24-48小時），不適合快速診斷，主要用于變異監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查。）11.關(guān)于樣本核酸提取質(zhì)量控制，以下指標(biāo)異常提示提取失敗的是：A.核酸濃度200ng/μL，A260/A280=1.8B.核酸濃度5ng/μL，A260/A280=1.6C.核酸濃度100ng/μL，A260/A230=2.0D.核酸濃度80ng/μL，A260/A280=2.0答案：B（解析：A260/A280比值1.6提示蛋白質(zhì)污染，且濃度過低（<10ng/μL）可能導(dǎo)致檢測失??；理想比值為1.8-2.0，A260/A230≥2.0提示無鹽或有機物污染。）12.新冠病毒基因檢測中，“灰區(qū)”結(jié)果（Ct值35-40）的處理原則是：A.直接判定為陽性B.判定為陰性C.重復(fù)檢測原樣本，若仍為灰區(qū)則結(jié)合臨床綜合判斷D.無需處理，報告“檢測結(jié)果不確定”答案：C（解析：灰區(qū)結(jié)果可能因病毒載量極低或操作誤差導(dǎo)致，需重復(fù)檢測，必要時結(jié)合抗原檢測或臨床癥狀綜合判定。）13.以下哪種變異株屬于免疫逃逸能力顯著增強的“高風(fēng)險變異株”（VOH）？A.原始株（Wuhan-Hu-1）B.德爾塔（Delta，B.1.617.2）C.XBB.1.16（Arcturus）D.阿爾法（Alpha，B.1.1.7）答案：C（解析：XBB系列變異株因S基因多個突變（如S486P、E484A）導(dǎo)致中和抗體逃逸能力顯著增強，被列為VOH。）14.采用熔解曲線分析（HRM）區(qū)分新冠變異株時，關(guān)鍵依據(jù)是：A.擴增產(chǎn)物的長度差異B.不同變異株引物結(jié)合效率不同C.擴增產(chǎn)物的GC含量差異導(dǎo)致熔解溫度（Tm）不同D.熒光探針的特異性結(jié)合答案：C（解析：HRM通過檢測擴增產(chǎn)物熔解時的熒光變化，根據(jù)Tm值差異區(qū)分不同變異株（如不同突變導(dǎo)致GC含量變化）。）15.實驗室進(jìn)行新冠基因檢測時，生物安全等級至少應(yīng)為：A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-4答案：B（解析：新冠病毒為第二類病原微生物，基因檢測涉及樣本處理時需在BSL-2實驗室進(jìn)行。）16.關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄酶（RT酶）的選擇，以下說法正確的是：A.莫洛尼鼠白血病病毒（M-MLV）逆轉(zhuǎn)錄酶熱穩(wěn)定性高于禽成髓細(xì)胞瘤病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶B.高保真RT酶可減少cDNA合成時的錯配率C.RT酶無需RNase抑制劑，因病毒RNA為單鏈不易降解D.RT反應(yīng)溫度越高，越有利于破壞RNA二級結(jié)構(gòu)答案：B（解析：高保真RT酶具有校正功能，可降低cDNA合成錯誤；AMV逆轉(zhuǎn)錄酶熱穩(wěn)定性更高（可在55℃反應(yīng)），M-MLV通常在42℃；RT反應(yīng)需添加RNase抑制劑；過高溫度可能導(dǎo)致酶失活。）17.某樣本RT-PCR檢測顯示N基因陽性、ORF1ab基因陰性，最可能的解釋是：A.樣本為疫苗接種后產(chǎn)生的核酸片段B.病毒發(fā)生ORF1ab基因區(qū)域缺失突變C.引物探針污染D.樣本采集時混入其他冠狀病毒答案：B（解析：若病毒在ORF1ab基因檢測區(qū)域發(fā)生缺失突變，可能導(dǎo)致該靶標(biāo)漏檢，而N基因未突變時仍可陽性；疫苗多為S蛋白抗原，不會導(dǎo)致N基因陽性。）18.新冠病毒基因檢測室內(nèi)質(zhì)控品的選擇不包括：A.滅活的病毒培養(yǎng)物B.人工合成的RNA片段（模擬病毒基因組）C.患者陽性血清D.質(zhì)粒DNA（含病毒靶標(biāo)序列）答案：C（解析：患者陽性血清可能存在生物安全風(fēng)險，且穩(wěn)定性差，不宜作為室內(nèi)質(zhì)控品；通常使用滅活病毒、合成RNA或質(zhì)粒。）19.關(guān)于高通量測序（NGS）檢測新冠病毒，以下描述錯誤的是：A.需先通過RT-PCR富集病毒核酸，降低宿主背景B.可同時檢測病毒載量和變異信息C.對實驗室生物信息分析能力要求低D.適合檢測混合感染（如新冠與流感病毒共感染）答案：C（解析：NGS數(shù)據(jù)需經(jīng)過拼接、比對、變異注釋等復(fù)雜分析，對生物信息學(xué)能力要求高。）20.樣本采集時，若患者已服用抗病毒藥物（如Paxlovid），可能對基因檢測結(jié)果的影響是：A.病毒載量下降，Ct值升高B.病毒發(fā)生耐藥突變，導(dǎo)致引物漏檢C.藥物成分抑制PCR反應(yīng)，出現(xiàn)假陰性D.無影響，因藥物不作用于病毒基因組答案：A（解析：抗病毒藥物可抑制病毒復(fù)制，降低樣本中病毒載量，導(dǎo)致Ct值升高（需結(jié)合用藥時間判斷）；藥物成分通常不直接抑制PCR反應(yīng)。）21.以下哪種樣本類型檢測新冠病毒的靈敏度最低？A.鼻咽拭子B.口咽拭子C.痰液D.糞便答案：B（解析：口咽拭子因采樣部位病毒載量較低，靈敏度低于鼻咽拭子；痰液和糞便在感染后期可能檢出。）22.實驗室進(jìn)行擴增反應(yīng)時，若擴增儀溫度均勻性偏差超過±0.5℃，可能導(dǎo)致：A.Ct值重復(fù)性差B.引物二聚體增多C.熒光信號強度降低D.內(nèi)參基因無法擴增答案：A（解析：溫度偏差會影響不同孔位的擴增效率，導(dǎo)致同一批樣本Ct值差異增大，重復(fù)性下降。）23.針對新冠病毒XBB.2.3變異株的檢測，引物應(yīng)靶向其：A.保守的3’非編碼區(qū)（3’UTR）B.特有的S基因突變位點（如F486S）C.N基因的全長序列D.ORF1ab基因的起始區(qū)域答案：B（解析：變異株檢測需靶向其特異性突變位點（如XBB.2.3的S基因F486S），以區(qū)分于其他變異株。）24.關(guān)于RNA提取過程中DNase處理，以下說法正確的是：A.新冠病毒為RNA病毒，無需處理DNaseB.需添加DNase以去除宿主DNA污染C.DNase處理會降解病毒RNA，降低靈敏度D.DNase處理后無需滅活，可直接進(jìn)行RT-PCR答案：B（解析：宿主細(xì)胞DNA可能與病毒RNA共提取，雖不影響RT-PCR（因逆轉(zhuǎn)錄針對RNA），但高濃度DNA可能干擾反應(yīng)，故需用DNase處理；DNase需滅活（如高溫），否則會降解cDNA。）25.某實驗室連續(xù)3天檢測結(jié)果均出現(xiàn)“所有樣本Ct值偏高2-3個循環(huán)”，可能的原因是：A.熒光探針濃度過高B.逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時間不足C.擴增儀光源老化，熒光信號采集效率下降D.樣本保存液添加過量答案：C（解析：光源老化會導(dǎo)致熒光信號弱，需更多循環(huán)達(dá)到閾值，表現(xiàn)為Ct值偏高；逆轉(zhuǎn)錄時間不足會導(dǎo)致cDNA合成量少，Ct值也會偏高，但通常為隨機現(xiàn)象；保存液過量可能稀釋核酸，導(dǎo)致Ct值偏高，但為批次性問題。）26.新冠病毒基因檢測結(jié)果報告中，“未檢測到SARS-CoV-2核酸”的表述適用于：A.Ct值>40的樣本B.內(nèi)參基因未擴增的樣本C.僅內(nèi)參基因擴增，病毒靶標(biāo)未擴增的樣本D.病毒靶標(biāo)和內(nèi)參基因均未擴增的樣本答案：C（解析：內(nèi)參基因擴增（提示樣本質(zhì)量合格）而病毒靶標(biāo)未擴增，可報告“未檢測到”；若內(nèi)參未擴增，需注明“樣本質(zhì)量不合格，檢測結(jié)果不可信”。）27.采用微流控芯片技術(shù)進(jìn)行新冠檢測時，其核心優(yōu)勢是：A.可同時檢測多種呼吸道病原體（如流感、RSV）B.靈敏度是傳統(tǒng)RT-PCR的10倍以上C.無需核酸提取步驟D.檢測成本顯著降低答案：A（解析：微流控芯片可集成多靶標(biāo)檢測，適合呼吸道病原體聯(lián)檢；靈敏度與傳統(tǒng)方法相當(dāng)，仍需核酸提取，成本較高。）28.關(guān)于病毒變異對基因檢測的影響，以下說法錯誤的是：A.同義突變（不改變氨基酸）通常不影響檢測B.引物結(jié)合區(qū)域的錯義突變可能導(dǎo)致漏檢C.插入/缺失突變（Indel）不會影響引物結(jié)合D.變異株可能導(dǎo)致某些商品化試劑盒失效答案：C（解析：引物結(jié)合區(qū)域的Indel可能導(dǎo)致引物與模板無法匹配（如長度差異），從而影響擴增效率，甚至漏檢。）29.實驗室質(zhì)量控制中，“室間質(zhì)評（EQA）”的主要目的是：A.評估實驗室日常檢測的精密度B.驗證檢測方法的準(zhǔn)確性C.監(jiān)測實驗室間的檢測一致性D.確保儀器設(shè)備狀態(tài)正常答案：C（解析：室間質(zhì)評通過外部機構(gòu)發(fā)放盲樣，評估實驗室與其他機構(gòu)的檢測一致性，是實驗室能力驗證的重要手段。）30.以下哪種情況可判定為“檢測結(jié)果無效”？A.陽性對照Ct值為32（臨界值35）B.陰性對照無擴增曲線C.內(nèi)參基因Ct值>30D.擴增曲線呈“平臺期”后熒光值下降答案：D（解析：擴增曲線平臺期后熒光下降提示儀器故障（如溫度過高導(dǎo)致探針降解）或反應(yīng)體系異常，結(jié)果無效；內(nèi)參Ct值>30可能因樣本質(zhì)量差，但需結(jié)合其他指標(biāo)判斷。）二、多項選擇題（每題3分，共10題，合計30分，少選、錯選均不得分）1.新冠病毒基因檢測實驗室分區(qū)應(yīng)包括：A.樣本處理區(qū)（核酸提取）B.試劑準(zhǔn)備區(qū)C.擴增反應(yīng)體系配制區(qū)D.擴增產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABCD（解析：基因檢測實驗室需嚴(yán)格分區(qū)，防止交叉污染，通常分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增配制區(qū)、擴增分析區(qū)。）2.影響新冠病毒RT-PCR檢測靈敏度的因素包括：A.樣本采集部位（鼻咽/口咽）B.病毒載量（Ct值）C.引物探針的特異性D.逆轉(zhuǎn)錄酶的熱穩(wěn)定性答案：ACD（解析：靈敏度指檢測低濃度病毒的能力，與樣本采集質(zhì)量（部位影響病毒載量）、引物探針與靶標(biāo)結(jié)合效率（特異性）、逆轉(zhuǎn)錄酶效率（熱穩(wěn)定性影響cDNA合成）相關(guān)；Ct值是結(jié)果指標(biāo)，非影響因素。）3.關(guān)于新冠病毒變異株的基因檢測策略，正確的有：A.針對已知變異株設(shè)計特異性引物/探針B.全基因組測序是金標(biāo)準(zhǔn)C.可通過多重PCR同時檢測多個突變位點D.無需關(guān)注同義突變，僅需檢測錯義突變答案：ABC（解析：同義突變雖不改變氨基酸，但可能影響引物結(jié)合（如位于引物區(qū)），需關(guān)注；其他選項均正確。）4.樣本核酸提取時，可能導(dǎo)致假陰性的操作包括：A.拭子在保存液中反復(fù)擠壓洗脫B.離心后棄上清時吸走部分沉淀C.提取試劑過期D.核酸洗脫體積過大（如200μL洗脫100μL樣本）答案：BCD（解析：吸走沉淀會丟失核酸；過期試劑影響提取效率；洗脫體積過大導(dǎo)致核酸稀釋，均可能導(dǎo)致假陰性；反復(fù)擠壓是正確操作，利于核酸釋放。）5.以下哪些情況需啟動實驗室污染排查？A.連續(xù)2天陰性對照出現(xiàn)擴增曲線B.陽性樣本Ct值普遍低于預(yù)期C.同一批次樣本中，30%出現(xiàn)內(nèi)參基因未擴增D.空白對照（無模板）出現(xiàn)擴增答案：AD（解析：陰性對照或空白對照擴增提示污染；內(nèi)參未擴增多因樣本質(zhì)量問題；陽性Ct值低可能因病毒載量高，非污染。）6.新冠病毒基因檢測結(jié)果的臨床解讀需結(jié)合：A.患者癥狀（如發(fā)熱、咳嗽）B.流行病學(xué)史（接觸史、旅居史）C.采樣時間（發(fā)病后幾天）D.其他檢測結(jié)果（如抗原、抗體）答案：ABCD（解析：基因檢測結(jié)果需結(jié)合臨床信息綜合判斷，避免單一結(jié)果誤判。）7.關(guān)于數(shù)字PCR檢測新冠病毒，正確的描述有：A.適用于極低病毒載量樣本（如恢復(fù)期）的定量B.可區(qū)分病毒活死狀態(tài)C.結(jié)果表示為拷貝數(shù)/μL（絕對定量）D.對抑制劑的耐受性優(yōu)于RT-PCR答案：ACD（解析：dPCR無法區(qū)分病毒活死狀態(tài)（僅檢測核酸），其他選項正確。）8.實驗室質(zhì)量控制應(yīng)包括：A.人員培訓(xùn)與考核B.儀器設(shè)備校準(zhǔn)（如PCR儀溫度校準(zhǔn)）C.檢測試劑性能驗證（靈敏度、特異性）D.樣本留存與追溯（至少保存7天）答案：ABCD（解析：質(zhì)量控制涵蓋人員、設(shè)備、試劑、樣本管理等全流程。）9.以下哪些突變可能導(dǎo)致新冠病毒逃避現(xiàn)有基因檢測？A.S基因引物結(jié)合區(qū)的單核苷酸變異（SNV）B.ORF1ab基因檢測區(qū)域的3個核苷酸缺失（3ntdel）C.N基因的同義突變（位于探針結(jié)合區(qū)）D.E基因的插入突變（位于擴增子中間）答案：ABC（解析：引物/探針結(jié)合區(qū)的SNV、Indel（即使3nt）、同義突變（改變探針結(jié)合序列）均可能導(dǎo)致無法結(jié)合，引起漏檢；擴增子中間的突變不影響引物結(jié)合。）10.關(guān)于新冠病毒樣本保存液，正確的選擇依據(jù)是：A.滅活型保存液（如含胍鹽）用于BSL-2實驗室B.非滅活型保存液（如病毒運輸培養(yǎng)基）需在BSL-3實驗室處理C.需根據(jù)檢測方法選擇（如LAMP可使用簡單緩沖液）D.保存液需注明有效成分，避免與提取試劑反應(yīng)答案：ACD（解析：非滅活型保存液含活病毒，需在BSL-3實驗室處理；其他選項正確。）三、判斷題（每題1分，共10題，合計10分）1.新冠病毒基因檢測中，Ct值越小，病毒載量越高。（）答案：√（解析：Ct值與病毒載量呈負(fù)相關(guān)，Ct值越小，需越少循環(huán)達(dá)到閾值，病毒載量越高。）2.咽拭子樣本采集時，只需擦拭扁桃體表面即可，無需接觸咽后壁。（）答案：×（解析：正確采樣需擦拭雙側(cè)扁桃體及咽后壁，確保采集到足夠病毒。）3.病毒保存液的主要作用是滅活病毒，無需保護(hù)RNA完整性。（）答案：×（解析：保存液需同時滅活病毒（生物安全）和保護(hù)RNA（防止降解），否則影響檢測結(jié)果。）4.新冠病毒全基因組測序僅需檢測S基因即可區(qū)分變異株。（）答案：×（解析：變異株區(qū)分需綜合多個基因的突變特征，僅檢測S基因可能漏判。）5.實驗室若使用自動化核酸提取儀，可省略室內(nèi)質(zhì)控。（）答案：×（解析：自動化設(shè)備仍需質(zhì)控，以驗證設(shè)備運行狀態(tài)和試劑有效性。）6.樣本運輸時，若冷鏈中斷（如冰袋融化），應(yīng)立即丟棄樣本。（）答案：×（解析：短期冷鏈中斷（如2-4小時）對RNA影響較小，可盡快送檢并備注運輸情況。）7.熒光探針?biāo)夥ǎ═aqMan）的特異性高于SYBRGreen染料法。（）答案：√（解析：TaqMan探針通過特異性雜交檢測，SYBRGreen結(jié)合所有雙鏈DNA，可能因引物二聚體產(chǎn)生假陽性。）8.新冠病毒變異株的出現(xiàn)會導(dǎo)致所有現(xiàn)有檢測試劑盒失效。（）答案：×（解析：僅當(dāng)變異發(fā)生在檢測靶標(biāo)區(qū)域時，才可能導(dǎo)致部分試劑盒失效，靶向保守區(qū)域的試劑盒仍有效。）9.基因檢測結(jié)果為陰性可100%排除新冠感染。（）答案：×（解析：可能因采樣時機（窗口期）、樣本質(zhì)量、檢測方法局限性導(dǎo)致假陰性，需結(jié)合其他指標(biāo)。）10.實驗室廢棄的擴增產(chǎn)物（如PCR管）可直接作為醫(yī)療垃圾處理，無需滅活。（）答案：×（解析：擴增產(chǎn)物含大量病毒核酸片段，可能污染實驗室，需經(jīng)高壓蒸汽滅菌或化學(xué)處理后再丟棄。）四、簡答題（每題8分，共5題，合計40分）1.簡述實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測新冠病毒的基本原理。答案：RT-PCR檢測新冠病毒的原理分為兩步：首先，以病毒RNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄酶（RT酶）合成互補DNA（cDNA）；然后，以cDNA為模板，利用DNA聚合酶進(jìn)行PCR擴增，同時加入熒光探針（如TaqMan探針）或熒光染料（如SYBRGreen）。探針/染料在擴增過程中釋放熒光信號，實時監(jiān)測儀通過檢測熒光強度變化確定Ct值（達(dá)到閾值的循環(huán)數(shù)）。Ct值與病毒初始載量呈負(fù)相關(guān)，通過與陽性閾值（如Ct≤35）比較判定結(jié)果。2.列舉新冠病毒樣本采集與運輸?shù)年P(guān)鍵注意事項（至少5項）。答案：（1）采樣部位：鼻咽拭子優(yōu)于口咽拭子，需深入鼻腔至咽后壁，避免觸碰其他部位；（2）采樣時機：發(fā)病后3-7天（病毒載量高峰）檢測靈敏度最高；（3）保存液選擇：使用滅活型保存液（如含胍鹽），體積需覆蓋拭子頭部（2-3mL）；（4）保存條件：4℃保存≤72小時，-20℃長期保存（避免反復(fù)凍融）；（5）運輸要求：采用冷鏈（冰袋/干冰），使用生物安全運輸箱（UN2814），填寫運輸交接單；（6）標(biāo)識信息：樣本需標(biāo)注姓名、采樣時間、編號，避免混淆。3.說明新冠病毒基因檢測中質(zhì)量控制的主要措施（至少4項）。答案：（1）室內(nèi)質(zhì)控：每批次檢測需加入陽性對照（已知濃度的病毒RNA）、陰性對照（無核酸模板）和內(nèi)參對照（人源基因如RPP30），確保反應(yīng)體系有效性和樣本質(zhì)量；（2）人員培訓(xùn)：檢測人員需通過PCR技術(shù)培訓(xùn)，熟悉操作流程和生物安全規(guī)范；（3）設(shè)備校準(zhǔn)：定期校準(zhǔn)PCR儀（溫度均勻性、熒光通道）、核酸提取儀（加樣精度），確保儀器性能；（4）試劑驗證：新批次試劑需進(jìn)行性能驗證（靈敏度、特異性、重復(fù)性），確認(rèn)符合要求后方可使用；（5）環(huán)境監(jiān)控：實驗室分區(qū)管理（試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣本處理區(qū)→擴增區(qū)單向流動），定期進(jìn)行環(huán)境核酸污染檢測（如擦拭實驗臺、移液器）。4.針對新冠病毒新型變異株（如XXB.1.9.1），設(shè)計基因檢測策略需考慮哪些因素？答案：（1）變異特征分析：通過全球流感數(shù)據(jù)倡議組織（GISAID）等平臺獲取變異株基因組信息，確定關(guān)鍵突變位點（如S基因的RBD區(qū)突變）；（2）靶標(biāo)選擇：優(yōu)先靶向變異株特有的高頻突變位點（如XXB.1.9.1的S:F486P），同時保留保守區(qū)域（如N基因）作為輔助檢測靶標(biāo)，避免因單一靶標(biāo)突變導(dǎo)致漏檢；（3）方法選擇：對于已知突變，采用特異性引物/探針的RT-PCR或HRM；對于未知突變，使用全基因組測序（WGS）或高通量測序（NGS）；（4）驗證實驗：通過合成含突變位點的RNA標(biāo)準(zhǔn)品驗證檢測方法的靈敏度（最低檢測限）和特異性（與其他變異株無交叉反應(yīng)）；（5）動態(tài)監(jiān)測：定期更新檢測靶標(biāo)，適應(yīng)變異株進(jìn)化趨勢。5.某實驗室檢測一批樣本時，出現(xiàn)“部分樣本內(nèi)參基因未擴增，病毒靶標(biāo)也未擴增”的情況，分析可能原因及解決措施。答案：可能原因：（1）樣本質(zhì)量差：采集時未接觸到靶細(xì)胞（如口咽拭子未擦拭咽后壁），或樣本保存不當(dāng)（如保存液過期導(dǎo)致RNA降解）；（2）核酸提取失?。禾崛≡噭┦Вㄈ绱胖闊o吸附能力）、操作失誤（如離心時間不足導(dǎo)致核酸丟失）；（3）內(nèi)參引物/探針問題：引物降解、探針熒光基團(tuán)淬滅，或內(nèi)參基因（如RPP30）在某些人群中低表達(dá)（如白細(xì)胞減少患者）；（4）擴增體系污染：PCR反應(yīng)液中存在核酸酶（如DNase/RNase），降解內(nèi)參和病毒核酸。解決措施：（1）復(fù)查樣本采集記錄，確認(rèn)采樣操作是否規(guī)范；（2）使用陽性樣本（已知內(nèi)參陽性）驗證提取試劑和操作流程，排查提取環(huán)節(jié)問題；（3）更換內(nèi)參引物/探針，或嘗試雙內(nèi)參（如同時檢測RPP30和β-actin）提高穩(wěn)定性；（4）對擴增體系進(jìn)行空白對照檢測（僅加反應(yīng)液，無模板），若出現(xiàn)降解，更換新批次試劑；（5）對結(jié)果異常樣本重新采樣檢測，結(jié)合抗原檢測或臨床癥狀綜合判斷。五、案例分析題（每題15分，共2題，合計30分）案例1：某社區(qū)醫(yī)院使用商品化RT-PCR試劑盒檢測10份新冠疑似樣本，其中5份報告“陽性”（Ct值28-32），3份“陰性”（Ct值>35），2份“灰區(qū)”（Ct值36-38）。但后續(xù)通過抗原檢測發(fā)現(xiàn)，2份灰區(qū)樣本抗原結(jié)果為陽性，1份陰性樣本抗原結(jié)果為陽性。問題：（1）分析灰區(qū)和陰性樣本抗原陽性的可能原因；（2）提出改進(jìn)檢測流程的建議。答案：（1）可能原因：①灰區(qū)樣本：病毒載量極低（接近檢測下限），RT-PCR因靈敏度限制未達(dá)到陽性閾值（Ct≤35），但抗原檢測（靈敏度較低，需更高載量）卻陽性，可能因RT-PCR閾值設(shè)置過嚴(yán)（如部分標(biāo)準(zhǔn)將Ct≤40判為陽性），或樣本中存在病毒抗原但核酸降解（如采樣后保存時間過長）；②陰性樣本抗原陽性：可能