實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)安全計(jì)劃###一、概述

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)安全計(jì)劃旨在規(guī)范實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作流程，確保實(shí)驗(yàn)人員、動(dòng)物及環(huán)境的安全。本計(jì)劃涵蓋實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作、實(shí)驗(yàn)過程中的安全措施、實(shí)驗(yàn)后的廢棄物處理等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，以降低實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)，提高實(shí)驗(yàn)效率。

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###二、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作

####（一）人員準(zhǔn)備

1.**培訓(xùn)要求**

-實(shí)驗(yàn)人員需完成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作安全培訓(xùn)，考核合格后方可參與實(shí)驗(yàn)。

-培訓(xùn)內(nèi)容包括動(dòng)物行為識(shí)別、操作規(guī)范、消毒流程及應(yīng)急處理。

2.**個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）**

-必須穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套、護(hù)目鏡，必要時(shí)佩戴口罩或面罩。

-長發(fā)需束起，避免接觸動(dòng)物或污染物。

####（二）環(huán)境準(zhǔn)備

1.**實(shí)驗(yàn)室要求**

-實(shí)驗(yàn)區(qū)域需保持清潔，地面、墻面及設(shè)備定期消毒。

-空氣流通需符合標(biāo)準(zhǔn)，溫濕度適宜（溫度22±2℃，濕度50±10%）。

2.**動(dòng)物設(shè)施**

-動(dòng)物房需具備通風(fēng)、隔離及監(jiān)控系統(tǒng)，防止交叉感染。

-動(dòng)物籠具需定期清洗，確保衛(wèi)生。

####（三）實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備

1.**器材檢查**

-所有實(shí)驗(yàn)器械（如注射器、手術(shù)刀）需滅菌處理，確保無菌。

-電子設(shè)備（如顯微鏡、離心機(jī)）需預(yù)熱調(diào)試，確保運(yùn)行正常。

2.**耗材準(zhǔn)備**

-準(zhǔn)備充足的消毒劑（如75%酒精、碘伏）、急救包及廢棄物收集容器。

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###三、實(shí)驗(yàn)過程中的安全措施

####（一）動(dòng)物操作規(guī)范

1.**抓取與固定**

-抓取動(dòng)物時(shí)需輕柔，避免應(yīng)激反應(yīng)。

-大型動(dòng)物需使用專用固定架，小型動(dòng)物可用軟布包裹。

2.**實(shí)驗(yàn)操作**

-注射、采樣等操作需嚴(yán)格遵循無菌原則，避免污染。

-實(shí)驗(yàn)中若動(dòng)物出現(xiàn)異常行為（如尖叫、抽搐），需立即停止并報(bào)告。

####（二）生物安全防護(hù)

1.**病原控制**

-實(shí)驗(yàn)人員需定期體檢，無傳染病方可參與。

-動(dòng)物需進(jìn)行健康檢測，隔離觀察期不少于14天。

2.**廢棄物處理**

-實(shí)驗(yàn)廢棄物需分類收集：感染性廢物（如組織樣本）、損傷性廢物（如針頭）、普通廢物。

-感染性廢物需高壓滅菌后焚燒，普通廢物需消毒處理。

####（三）應(yīng)急處理

1.**過敏反應(yīng)**

-若出現(xiàn)過敏癥狀（如皮疹、呼吸困難），需立即脫離實(shí)驗(yàn)環(huán)境，使用抗過敏藥物。

2.**咬傷/抓傷**

-受傷后需立即清洗傷口，用碘伏消毒，并上報(bào)至實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。

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###四、實(shí)驗(yàn)后的處理

####（一）器材清潔與消毒

1.**器械處理**

-可重復(fù)使用器械需清洗、滅菌，并標(biāo)注下次使用日期。

-一次性器械需直接丟棄，避免污染。

2.**環(huán)境消毒**

-實(shí)驗(yàn)區(qū)域需使用消毒液（如含氯消毒劑）全面噴灑，作用時(shí)間≥30分鐘。

####（二）動(dòng)物處置

1.**安樂死**

-需采用人道安樂死方法（如吸入性麻醉），避免痛苦。

-處置過程需記錄，并由雙人核對。

2.**尸體處理**

-尸體需深埋或焚燒，避免環(huán)境污染。

####（三）記錄與歸檔

1.**實(shí)驗(yàn)記錄**

-實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)需詳細(xì)記錄，包括操作時(shí)間、動(dòng)物反應(yīng)、廢棄物處理情況等。

-記錄需存檔至少3年，便于追溯。

2.**安全評估**

-每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后需進(jìn)行安全評估，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)并改進(jìn)流程。

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###五、總結(jié)

本安全計(jì)劃通過規(guī)范人員、環(huán)境、器材及廢棄物管理，有效降低實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)人員需嚴(yán)格遵守各項(xiàng)措施，確保實(shí)驗(yàn)安全高效進(jìn)行。定期審核計(jì)劃內(nèi)容，及時(shí)更新以適應(yīng)新要求。

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###二、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作（續(xù)）

####（一）人員準(zhǔn)備（續(xù)）

1.**培訓(xùn)要求（續(xù)）**

***培訓(xùn)內(nèi)容細(xì)化**：

-動(dòng)物行為學(xué)基礎(chǔ)：識(shí)別不同動(dòng)物的正常行為及應(yīng)激信號(hào)（如rat的快速梳理毛發(fā)、mouse的胡須觸碰、rabbit的豎耳或跺腳），以便及時(shí)調(diào)整操作或中止實(shí)驗(yàn)。

-操作技術(shù)培訓(xùn)：涵蓋抓取、保定、注射（皮下、肌肉、靜脈）、采血（尾靜脈、心臟）、灌胃、手術(shù)基本操作等，強(qiáng)調(diào)輕柔、精準(zhǔn)，減少動(dòng)物痛苦。

-消毒隔離技術(shù)：學(xué)習(xí)不同消毒劑的適用范圍（如75%酒精用于手部和物體表面，季銨鹽類用于環(huán)境噴灑），掌握高壓蒸汽滅菌參數(shù)（如121℃，15-20分鐘）和注意事項(xiàng)（如包裹器械的材質(zhì)要求）。

-應(yīng)急預(yù)案演練：模擬動(dòng)物突發(fā)狀況（如麻醉過深、器械脫落、設(shè)備故障）的處理流程，包括緊急停止實(shí)驗(yàn)、隔離受影響動(dòng)物、啟動(dòng)備用方案等。

***考核標(biāo)準(zhǔn)**：

-理論考核：采用選擇題、判斷題形式，檢驗(yàn)對安全規(guī)范、動(dòng)物福利原則的掌握程度。

-實(shí)操考核：由資深實(shí)驗(yàn)員或監(jiān)督員進(jìn)行評分，評估操作熟練度、規(guī)范性及動(dòng)物應(yīng)激控制能力。合格者獲得授權(quán)后方可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)域操作。

2.**個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）（續(xù)）**

***PPE選擇依據(jù)**：

-操作類型：簡單接觸（如觀察）僅需實(shí)驗(yàn)服、手套；高風(fēng)險(xiǎn)操作（如活體手術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)物處理）需增加護(hù)目鏡/面屏、口罩，必要時(shí)佩戴防滲透實(shí)驗(yàn)服。

-潛在風(fēng)險(xiǎn)：處理潛在病原體需佩戴符合生物安全等級(jí)的防護(hù)服和正壓呼吸器（如NIOSH認(rèn)證的防顆粒物呼吸器）。

***PPE使用規(guī)范**：

-穿戴順序：先穿戴內(nèi)層衣物，再穿實(shí)驗(yàn)服，最后戴手套。脫卸時(shí)順序相反，避免污染外層衣物和皮膚。

-手部衛(wèi)生：操作前后、接觸動(dòng)物后、接觸污染物后必須使用抗菌洗手液和流動(dòng)水徹底清洗，或使用含酒精的免洗洗手液。

-PPE檢查：使用前檢查實(shí)驗(yàn)服是否有破損，手套是否完好無孔洞，護(hù)目鏡是否清晰。

####（二）環(huán)境準(zhǔn)備（續(xù)）

1.**實(shí)驗(yàn)室要求（續(xù)）**

***清潔消毒制度**：

-日常清潔：每日實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用濕抹布擦拭臺(tái)面、地面，清除可見污物。

-定期消毒：每周使用消毒劑對實(shí)驗(yàn)區(qū)域地面、墻面、通風(fēng)口、設(shè)備表面進(jìn)行徹底消毒。高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域（如手術(shù)間）需每日額外消毒。

-空氣凈化：確保通風(fēng)系統(tǒng)正常運(yùn)行，空氣過濾系統(tǒng)（HEPA）定期更換，維持空氣潔凈度。

***生物安全級(jí)別**：

-根據(jù)實(shí)驗(yàn)涉及的生物風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)，選擇合適的實(shí)驗(yàn)室布局（如隔離操作臺(tái)、負(fù)壓通風(fēng)柜）。高風(fēng)險(xiǎn)實(shí)驗(yàn)需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，防止氣溶膠擴(kuò)散。

2.**動(dòng)物設(shè)施（續(xù)）**

***動(dòng)物房管理**：

-溫濕度控制：配備自動(dòng)調(diào)控系統(tǒng)，定期監(jiān)測并記錄溫濕度數(shù)據(jù)，確保動(dòng)物生理需求。

-光照管理：模擬自然光照周期，避免強(qiáng)光直射，提供安靜環(huán)境。

-通風(fēng)過濾：進(jìn)風(fēng)需經(jīng)過高效過濾（HEPA），排除微生物污染。

***動(dòng)物籠具與設(shè)備**：

-材質(zhì)與設(shè)計(jì)：使用易清洗、耐腐蝕材料（如不銹鋼、PP），設(shè)計(jì)需便于清洗消毒（如倒置式水碗）。

-清潔流程：制定籠具清洗消毒流程圖，明確清洗順序（從外到內(nèi)）、消毒劑濃度、作用時(shí)間、干燥方式。

-設(shè)備維護(hù)：定期檢查水源、食槽、水瓶，確保供水清潔。監(jiān)控環(huán)境監(jiān)測設(shè)備（溫濕度、壓力）運(yùn)行狀態(tài)。

####（三）實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備（續(xù)）

1.**器材檢查與滅菌（續(xù)）**

***滅菌方法選擇**：

-高壓蒸汽滅菌：適用于耐熱器械（如玻璃器皿、金屬器械、布類）。包裹時(shí)需考慮蒸汽穿透性，避免過多包裹導(dǎo)致受熱不均。

-環(huán)氧乙烷滅菌：適用于不耐熱器械（如塑料注射器、電子設(shè)備）。需在專用滅菌柜內(nèi)進(jìn)行，注意殘留氣體揮發(fā)時(shí)間。

-紫外線消毒：僅適用于表面消毒，無法穿透物體，需配合擦拭使用。

***滅菌效果驗(yàn)證**：

-化學(xué)指示卡：使用壓力蒸汽滅菌指示卡，根據(jù)顏色變化判斷是否達(dá)到滅菌參數(shù)。

-生物指示劑：定期使用嗜熱脂肪芽孢菌（*Geobacillusstearothermophilus*）作為生物指示劑，監(jiān)測滅菌效果，記錄滅菌參數(shù)。

2.**耗材準(zhǔn)備（續(xù)）**

***消毒劑管理**：

-儲(chǔ)存：根據(jù)不同消毒劑特性（如光敏性、腐蝕性）選擇合適儲(chǔ)存條件（避光、陰涼、干燥）。標(biāo)簽清晰標(biāo)明名稱、濃度、有效期。

*配制：使用標(biāo)準(zhǔn)量具（如移液器、容量瓶）精確配制，現(xiàn)配現(xiàn)用（如過氧化氫需新鮮配制）。記錄配制時(shí)間、濃度、配制人。

***急救與廢棄物準(zhǔn)備**：

-急救箱：存放創(chuàng)可貼、消毒棉球、碘伏、生理鹽水、腎上腺素筆（若允許）、外傷處理指南。定期檢查藥品有效期。

-廢棄物分類容器：按風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)分類，如銳器盒（防刺穿）、感染性廢物袋（防滲漏）、普通垃圾袋。容器需有明確標(biāo)識(shí)。

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###三、實(shí)驗(yàn)過程中的安全措施（續(xù)）

####（一）動(dòng)物操作規(guī)范（續(xù)）

1.**抓取與固定（續(xù)）**

***具體動(dòng)物操作指南**：

-**小鼠**：用拇指和食指輕握頸部皮膚后背，或使用小型鼠保定籠。避免壓迫胸腔。

-**大鼠**：類似小鼠，但需力量稍大，可配合使用鼠尾固定器（注意避免尾挫傷）。

-**豚鼠**：需兩人協(xié)作，一人輕柔托住身體，另一人固定頭部或使用專用保定器。避免抓耳或尾巴。

-**兔子**：抓取頸部皮膚，注意避開神經(jīng)叢。使用兔保定架或由經(jīng)驗(yàn)豐富人員手持。避免劇烈晃動(dòng)。

-**貓/狗**：使用頸圈和背帶，或由訓(xùn)練有素的助手協(xié)助固定。操作時(shí)保持語言安撫和動(dòng)作輕柔。

***固定裝置要求**：

-設(shè)計(jì)需符合動(dòng)物生理結(jié)構(gòu)，避免壓迫重要臟器或?qū)е鹿趋?肌肉損傷。定期檢查裝置是否磨損。

-固定時(shí)間盡量縮短，每隔一段時(shí)間松開檢查動(dòng)物狀態(tài)，防止長時(shí)間固定導(dǎo)致組織損傷或死亡。

2.**實(shí)驗(yàn)操作（續(xù)）**

***注射操作要點(diǎn)**：

-皮下注射：選擇合適部位（如背側(cè)肩胛部），進(jìn)針角度約30-45度，回抽無血再推注藥液。

-肌肉注射：選擇大肌肉群（如股四頭?。?，進(jìn)針角度約90度，快速刺入，緩慢推注。

-靜脈注射：需明確血管位置（如鼠尾靜脈、兔耳緣靜脈），緩慢勻速推注，觀察有無滲漏。

-注射器與針頭：使用一次性無菌注射器及針頭，避免交叉污染。針頭粗細(xì)根據(jù)動(dòng)物大小和注射目的選擇。

***采樣操作規(guī)范**：

-采血：尾靜脈采血后壓迫止血，觀察有無血腫。心臟采血需嚴(yán)格無菌操作，麻醉深度需精確控制。

-組織采集：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的解剖工具（如手術(shù)剪、組織鉗），快速、盡量減少損傷地獲取組織。

-體液采集：如胸水、腹水，需使用無菌注射器和穿刺針，嚴(yán)格無菌操作，避免污染。

***觀察與記錄**：

-實(shí)驗(yàn)過程中需持續(xù)觀察動(dòng)物的反應(yīng)（呼吸、心率、行為、體征），詳細(xì)記錄異常情況。

-使用標(biāo)準(zhǔn)化表格記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，確保信息完整、準(zhǔn)確。

####（二）生物安全防護(hù)（續(xù)）

1.**病原控制（續(xù)）**

***動(dòng)物來源與檢疫**：

-購買動(dòng)物時(shí)需索取健康證明，了解其背景。

-到達(dá)后需隔離觀察（通常14-30天），期間進(jìn)行基礎(chǔ)健康檢查（體重、精神狀態(tài)、皮毛），排除傳染病。

***隔離與轉(zhuǎn)群**：

-患病或可疑患病動(dòng)物需立即隔離，避免擴(kuò)散。

-轉(zhuǎn)群操作需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，或確保環(huán)境無菌，防止交叉感染。

***環(huán)境監(jiān)測**：

*定期對動(dòng)物房空氣、籠具表面、工作人員手部進(jìn)行微生物抽樣檢測，評估生物安全水平。

*監(jiān)測常見病原體（如鼠痘病毒、漢坦病毒、沙門氏菌等），根據(jù)檢測結(jié)果調(diào)整防控措施。

2.**廢棄物處理（續(xù)）**

***分類與收集細(xì)化**：

-**感染性廢物**：受感染動(dòng)物的組織、血液、體液、培養(yǎng)基、廢棄注射器/針頭、被污染的實(shí)驗(yàn)服等。需放入防滲漏、有生物危害標(biāo)識(shí)的黃色袋中，壓實(shí)封口。

-**損傷性廢物**：手術(shù)刀、針頭、解剖刀等銳器。需放入專用銳器盒，填滿3/4后封口。

-**藥物性廢物**：過期或廢棄的實(shí)驗(yàn)藥物、化學(xué)試劑。需單獨(dú)收集，按化學(xué)品規(guī)定處理。

-**化學(xué)性廢物**：廢棄的實(shí)驗(yàn)試劑、有機(jī)溶劑。需分類收集，與感染性廢物分開存放。

-**普通廢物**：實(shí)驗(yàn)紙屑、包裝材料等未受污染物品。需放入普通垃圾袋。

***轉(zhuǎn)運(yùn)與處置**：

-廢棄物需在產(chǎn)生地點(diǎn)初步分類，由指定人員使用專用容器和路線轉(zhuǎn)運(yùn)至指定儲(chǔ)存點(diǎn)。

-感染性廢物需由專業(yè)醫(yī)療廢物處理公司進(jìn)行高溫高壓滅菌或焚燒處置。銳器盒需由有資質(zhì)機(jī)構(gòu)回收。

-化學(xué)廢棄物需交由化學(xué)品回收處理單位處理。

####（三）應(yīng)急處理（續(xù)）

1.**過敏反應(yīng)（續(xù)）**

***識(shí)別與分級(jí)**：

-輕度：皮膚瘙癢、蕁麻疹。

-中度：呼吸困難、面部水腫、喉頭水腫。

-重度：過敏性休克（血壓下降、意識(shí)模糊、呼吸困難）。

***處置流程**：

-立即脫離過敏原（停止接觸動(dòng)物或可疑物質(zhì)）。

-輕度：移至空氣清新處，使用抗過敏藥物（如氯雷他定）。

-中度/重度：立即報(bào)告，使用腎上腺素（若備有）、抗組胺藥，必要時(shí)進(jìn)行吸氧、心肺復(fù)蘇。

-做好記錄，并向醫(yī)療人員說明情況。

2.**咬傷/抓傷（續(xù)）**

***傷口處理**：

-立即用大量流動(dòng)水沖洗傷口至少15分鐘。

-使用肥皂或消毒液（如碘伏）徹底清洗。

-對于深部傷口或出血不止，需用無菌紗布?jí)浩戎寡?，并考慮使用抗生素（需遵醫(yī)囑）。

***報(bào)告與評估**：

-無論傷口輕重，均需向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人和醫(yī)療部門報(bào)告。

-評估動(dòng)物健康狀況，若動(dòng)物有感染風(fēng)險(xiǎn)，需考慮對傷口進(jìn)行預(yù)防性抗生素治療。

-記錄傷口細(xì)節(jié)（位置、深度、是否出血），追蹤愈合情況。

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###四、實(shí)驗(yàn)后的處理（續(xù)）

####（一）器材清潔與消毒（續(xù)）

1.**器械處理（續(xù)）**

***可重復(fù)使用器械**：

-**清洗流程**：

1.流水沖洗掉可見殘留物。

2.使用中性洗滌劑和軟毛刷清洗（避免刮傷）。

3.流水徹底沖洗干凈。

4.瀝干或使用清洗設(shè)備甩干。

-**滅菌準(zhǔn)備**：

1.檢查器械是否完好，復(fù)雜結(jié)構(gòu)（如內(nèi)腔）需確保清潔。

2.根據(jù)材質(zhì)選擇合適的包裹方式（如布類包裹、金屬器械放入金屬網(wǎng)套）。

3.標(biāo)注器械名稱、滅菌日期、有效期。

-**滅菌后管理**：

1.存放在干燥、清潔的環(huán)境中，防止二次污染。

2.按規(guī)定周期（如高壓滅菌建議不超過3個(gè)月）更換滅菌包裝。

3.使用前檢查包裝是否完好，有無過期。

***一次性器械**：

-使用后立即放入指定顏色的廢棄容器中，避免接觸任何表面。

-由專業(yè)機(jī)構(gòu)統(tǒng)一回收處理，禁止重復(fù)使用或試圖滅菌后復(fù)用。

2.**環(huán)境消毒（續(xù)）**

***消毒方法細(xì)化**：

-**表面消毒**：

1.使用合適的消毒劑（如70-80%酒精、季銨鹽類、含氯消毒劑）。

2.對臺(tái)面、地面、設(shè)備表面、墻壁進(jìn)行噴灑或擦拭。

3.確保消毒劑作用時(shí)間足夠（通常需15-30分鐘，參照產(chǎn)品說明）。

4.高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域（如手術(shù)臺(tái)、解剖臺(tái)）需使用更強(qiáng)力消毒劑或多次消毒。

-**空氣消毒**：

1.對于難以通風(fēng)的區(qū)域，可使用紫外線燈照射（需人員離開）。

2.確保通風(fēng)系統(tǒng)濾網(wǎng)清潔，定期更換。

***消毒記錄**：

-記錄每次消毒的時(shí)間、地點(diǎn)、消毒劑名稱/濃度、作用時(shí)間、操作人。

####（二）動(dòng)物處置（續(xù)）

1.**安樂死（續(xù)）**

***方法選擇原則**：

-優(yōu)先選擇人道、快速、減少痛苦的方法。

-方法選擇需考慮動(dòng)物種類、體型、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄈ缧璞Ａ羝鞴伲?/p>

-必須由經(jīng)過培訓(xùn)并獲得授權(quán)的人員執(zhí)行。

***常用安樂死方法**：

-**吸入性麻醉**：使用專用麻醉機(jī)，輸送高濃度吸入性麻醉劑（如異氟烷、sevoflurane），直至動(dòng)物呼吸停止、心跳消失。需確保麻醉氣體充分排出。

-**注射性麻醉**：使用大劑量鎮(zhèn)靜劑/麻醉劑（如pentobarbitalsodium，需了解動(dòng)物體重精確計(jì)算劑量），通過心臟注射或大血管快速推注。

-**物理方法**：如大動(dòng)物快速放血（需極度人道且快速完成），或使用特定設(shè)備（如CO2窒息箱，需確保氣體濃度和暴露時(shí)間適宜，且動(dòng)物無掙扎）。

***安樂死過程記錄**：

1.記錄動(dòng)物編號(hào)、品種、性別、年齡、體重。

2.記錄安樂死方法、具體操作時(shí)間、執(zhí)行人。

3.記錄動(dòng)物在安樂死過程中的反應(yīng)（如掙扎程度）。

4.若為吸入性麻醉，記錄麻醉劑種類、濃度、持續(xù)時(shí)間。

2.**尸體處理（續(xù)）**

***處理流程**：

1.安樂死確認(rèn)后，將動(dòng)物尸體移至指定處理區(qū)域。

2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)室規(guī)定和當(dāng)?shù)匾?，選擇深埋或焚燒。

3.深埋需選擇遠(yuǎn)離水源、居民區(qū)的地點(diǎn)，深度足夠（通常>