ICS65.120CCSB463502chromatography-tandemIDB3502/T155—2024前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14方法原理 15干擾與消除 16試劑和材料 27儀器和設(shè)備 28樣品 29分析步驟 310結(jié)果計(jì)算與表示 411精密度和正確度 612質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 713廢物處理 714注意事項(xiàng) 7附錄A（資料性）方法檢出限和測定下限 8附錄B（資料性）標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度 9附錄C（資料性）目標(biāo)化合物的測定參考參數(shù) DB3502/T155—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由廈門市生態(tài)環(huán)境局提出并歸口。本文件起草單位：廈門大學(xué)、廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院、福建省廈門環(huán)境監(jiān)測中心站、廈門市標(biāo)準(zhǔn)化研究院。本文件主要起草人：高靜、陳猛、王倩、梁榕源、李振良、許方巧。DB3502/T155—20241水質(zhì)19種藻毒素的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件描述了水中19種藻毒素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本文件適用于地表水和海水中原多甲酸毒素1（AZA1）、原多甲酸毒素2（AZA2）、原多甲酸毒素3（AZA3）、環(huán)亞胺毒素（GYM）、蛤毒素-2（PTX2）、13-去甲螺旋內(nèi)酯C（SPX1）、大田軟海綿酸（OA）、鰭藻毒素1（DTX1）、鰭藻毒素2（DTX2）、節(jié)球藻素（NOD）、微囊藻毒素-RR（MC-RR）、微囊藻毒素-YR（MC-YR）、微囊藻毒素-HtyR（MC-HtyR）、微囊藻毒素-LR（MC-LR）、微囊藻毒素-WR（MC-WR）、微囊藻毒素-LA（MC-LA）、微囊藻毒素-LY（MC-LY）、微囊藻毒素-LW（MC-LW）、微囊藻毒素-LF（MC-LF）等19種藻毒素的測定。當(dāng)取樣量為1L，定容體積為1.0mL，進(jìn)樣體積為10μL時(shí)，19種藻毒素的方法檢出限為0.8ng/L～3ng/L，測定下限為3.2ng/L～12ng/L。詳見附錄A。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB17378.3海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運(yùn)輸HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ442.3近岸海域環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范第三部分近岸海域水質(zhì)監(jiān)測HJ493水質(zhì)樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4方法原理水中的藻毒素經(jīng)固相萃取柱富集，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測，通過保留時(shí)間、特征離子及其豐度比進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。5干擾與消除金屬離子與部分目標(biāo)化合物能形成絡(luò)合物，降低固相萃取效率，向水樣中加入乙二胺四乙酸二鈉抑制絡(luò)合物的形成，消除干擾。2DB3502/T155—20246試劑和材料除非另有規(guī)定，僅使用色譜純試劑。6.1水：GB/T6682，一級(jí)。6.2乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）：優(yōu)級(jí)純。6.30.1%甲酸溶液：取1mL甲酸，加水稀釋至1000mL，混勻。6.40.1%甲酸乙腈溶液：取1mL甲酸，加乙腈稀釋至1000mL，混勻。6.5甲醇-水（2+8）溶液：甲醇和水（6.1）按照2：8的體積比混合，混勻。6.60.1%甲酸甲醇-水（2+8）溶液：取1mL甲酸，加甲醇-水（2+8）溶液（6.5）稀釋至1000mL，搖勻。6.7標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，參照制造商的產(chǎn)品說明保存。6.8標(biāo)準(zhǔn)使用液：分別移取適量19種藻毒素的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（6.7），用甲醇配制成為附錄B表B.1中濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液，于-18℃以下冷凍、避光保存不超過3個(gè)月。6.9固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB），規(guī)格為1g/20mL，或其他等效萃取柱。6.10濾膜：0.45μm玻璃纖維或其他材質(zhì)等效濾膜。6.11針式微孔濾膜：0.22μm聚四氟乙烯濾膜（PTFE）。7儀器和設(shè)備7.1液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子化源（ESI）。7.2固相萃取裝置：自動(dòng)或手動(dòng)（帶真空泵），流速可調(diào)節(jié)。7.3濃縮裝置：氮吹濃縮儀或其他性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。7.4分析天平：感量0.01g。8樣品8.1樣品采集和保存按照GB17378.3、HJ442.3、HJ493和HJ91.2的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行樣品的采集。樣品采集時(shí)應(yīng)注滿棕色磨口具塞玻璃瓶或具有聚四氟乙烯襯墊瓶蓋的棕色螺口玻璃瓶，不留空隙。樣品采集后應(yīng)于4℃冷藏、避光運(yùn)輸，及時(shí)分析。若不能及時(shí)分析，應(yīng)置于4℃冷藏、避光保存，3天內(nèi)完成分析。8.2試樣的制備8.2.1水樣預(yù)處理水樣經(jīng)0.45μm濾膜（6.10）過濾后，量取1000mL水樣，加入0.5g的Na2EDTA（6.2振蕩至完全溶解。8.2.2固相萃取將固相萃取柱（6.9）固定在固相萃取裝置（7.2）上，分別用10mL甲醇和10mL水（6.1）活化，在活化過程中應(yīng)保證柱頭浸潤。DB3502/T155—20243將水樣以6mL/min流速通過活化后的固相萃取柱，再用10mL水（6.1）淋洗萃取柱，負(fù)壓抽干。用12mL甲醇洗脫富集后的小柱，收集洗脫液。將上述洗脫液濃縮（7.3）至近干，用0.1%甲酸甲醇-水（2+8）溶液（6.6）定容至1.0mL，經(jīng)0.22μm針式微孔濾膜（6.11）過濾于樣品瓶中，待測。8.3空白試樣的制備以水（6.1）代替水樣，按照與試樣的制備（8.2）相同的步驟，制備空白試樣。9分析步驟9.1儀器參考條件9.1.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長150mm，內(nèi)徑3mm，粒徑2.6μm，或等效反相高效液相色譜柱；b)流動(dòng)相：正離子模式：A相-0.1%甲酸溶液（6.3），B相-0.1%甲酸乙腈溶液（6.4）；負(fù)離子模式：A相-水（6.1），B相-乙腈；梯度洗脫程序見表1、表2；c)進(jìn)樣體積：10μL；d)流速：0.25mL/min。表1正離子模式下梯度洗脫程序55表2負(fù)離子模式下梯度洗脫程序9.1.2質(zhì)譜參考條件DB3502/T155—20244質(zhì)譜參考條件如下：a)離子源類型：電噴霧離子源；b)離子源溫度：350℃;c)毛細(xì)管電壓：正離子3500V，負(fù)離子-3000V；d)檢測方式：多離子反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；e)具體條件參見附錄C。對于不同質(zhì)譜儀器，參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。9.1.3儀器調(diào)諧按照儀器使用說明書在規(guī)定時(shí)間和頻次內(nèi)對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)量數(shù)和分辨率的校正，以確保儀器處于最佳測試狀態(tài)。在儀器使用過程中，如發(fā)現(xiàn)質(zhì)量數(shù)出現(xiàn)明顯偏差或靈敏度大幅度下降時(shí)，應(yīng)立即對儀器重新進(jìn)行質(zhì)量數(shù)和分辨率的校正。9.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立依次吸取10.0μL、20.0μL、50.0μL、100μL、200μL、400μL標(biāo)準(zhǔn)使用液（6.8，參考體積），用0.1%甲酸甲醇-水（2+8）溶液（6.6）定容至1mL，配制至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列。按照儀器參考條件（9.1）測定并記錄標(biāo)準(zhǔn)系列目標(biāo)物的保留時(shí)間、定量離子的峰面積。由低濃度到高濃度依次對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣，以目標(biāo)化合物定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。待測樣品中19種藻毒素的質(zhì)量濃度應(yīng)在檢測的線性范圍內(nèi)。9.3試樣測定按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立（9.2）相同的條件進(jìn)行試樣（8.2）的測定。9.4空白試驗(yàn)按照與試樣測定（9.3）相同的條件進(jìn)行空白試樣（8.3）的測定。10結(jié)果計(jì)算與表示10.1定性分析每種被測組分選擇1個(gè)母離子和2個(gè)~3個(gè)子離子進(jìn)行監(jiān)測。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中待測組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中目標(biāo)組分的保留時(shí)間比較，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的絕對值應(yīng)小于2.5%；且待測樣品譜圖中，各組分定性子離子的相對豐度（Ksam，見式1）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中對應(yīng)的定性子離子相對豐度（Kstd，見式2）進(jìn)行比較，偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。19種藻毒素的總離子流圖見圖1和圖2。ksam=×100·····················································(1)式中：Ksam——樣品中某組分定性子離子的相對豐度的數(shù)值，單位為百分比（%）；A2——樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定性子離子的峰面積；A1——樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定量子離子的峰面積。DB3502/T155—20245式中：Kstd——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分定性子離子的相對豐度，單位為百分比（%）；Astd2——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定性子離子的峰面積；Astd1——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定量子離子的峰面積。表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差Kstd（%）Ksam最大允許偏差（%）Kstd>5020<Kstd≤50Kstd≤10圖1ESI+模式下16種目標(biāo)化合物的總離子流圖DB3502/T155—20246圖2ESI-模式下3種目標(biāo)化合物的總離子流圖10.2定量分析根據(jù)樣品峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出相應(yīng)的質(zhì)量濃度。樣品中藻毒素質(zhì)量濃度為ρi（ng/L按式（3）進(jìn)行計(jì)算。pi=×1000··················································(1)式中：ρi——樣品中微囊藻毒素的質(zhì)量濃度，單位為納克每升（ng/L）；Ρis——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的測試液中藻毒素質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L）；V1——定容體積，mL；V2——水樣體積，mL。10.3結(jié)果表示測定結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)與方法檢出限一致，最多保留3位有效數(shù)字。11精密度和正確度11.1精密度11.1.13家實(shí)驗(yàn)室對三個(gè)加標(biāo)濃度的統(tǒng)一地表水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定：——實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.7%～13%、0.6%～13%和0.6%～8.2%；——實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.1%～20%、0.4%～19%和2.8%～19%；——重復(fù)性限分別為0.8ng/L～3.7ng/L、1.4ng/L～11ng/L和1.1ng/L～15ng/L；——再現(xiàn)性限分別為1.3ng/L～11ng/L、1.9ng/L～22ng/L和7.7ng/L～46ng/L。DB3502/T155—2024711.1.23家實(shí)驗(yàn)室對三個(gè)加標(biāo)濃度的統(tǒng)一海水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定：——實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.6%～18%、0.8%～12%和0.6%～9.4%；——實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.4%～20%、0.5%～16%和2.1%～20%；——重復(fù)性限分別為1.1ng/L～4.8ng/L、1.3ng/L～10ng/L和2.5ng/L～14ng/L；——再現(xiàn)性限分別為1.6ng/L～9.2ng/L、2.6ng/L～20ng/L和3.8ng/L～49ng/L。11.2正確度11.2.13家實(shí)驗(yàn)室對三個(gè)加標(biāo)濃度的統(tǒng)一地表水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定：——加標(biāo)回收率范圍分別為50.7%～111%、51.0%～115%和51.3%～117%；——加標(biāo)回收率最終值分別為（52.6±3.5）%90.4±36.0）%、（51.2±0.4）%99.9±27.7）%和（53.7±2.2）%94.6±12.1）%。11.2.23家實(shí)驗(yàn)室對三個(gè)加標(biāo)濃度的統(tǒng)一海水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定：——加標(biāo)回收率范圍分別為51.1%～110%、51.0%～107%和52.4%～112%；——加標(biāo)回收率最終值分別為（51.9±2.5）%91.5±.5.3）%、（52.0±2.4）%94.9±20.8）%和（54.3±2.5）%96.4±27.6）%。12質(zhì)量保證和質(zhì)量控制12.1空白試驗(yàn)每批樣品(≤20個(gè)/批）應(yīng)至少做一個(gè)空白試驗(yàn)，測定結(jié)果應(yīng)低于方法檢出限。12.2校準(zhǔn)每批樣品應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.990，否則重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每批樣品(≤20個(gè)/批）應(yīng)測定一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，其測定結(jié)果與該點(diǎn)濃度的相對偏差應(yīng)在±20%以內(nèi)，否則，須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。12.3平行樣的測定每批樣品(≤20個(gè)/批）應(yīng)至少測定一個(gè)平行雙樣。平行雙樣測定結(jié)果的相對偏差應(yīng)控制在20%以內(nèi)。12.4基體加標(biāo)每批樣品(≤20個(gè)/批）應(yīng)至少測定一個(gè)基體加標(biāo)樣，加標(biāo)樣與原樣品在完全相同的測試條件下進(jìn)行分析。各目標(biāo)物的加標(biāo)回收率范圍應(yīng)滿足方法正確度的要求。13