單克隆抗體的出現(xiàn)與發(fā)展

一、概述

單克隆抗體，作為生物技術(shù)領(lǐng)域的一項(xiàng)重大突破，自其問(wèn)世以來(lái)

便在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域引發(fā)了深刻的變革。這一技術(shù)的出現(xiàn)，不僅極大地

提高了抗體生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化程度和產(chǎn)量，更以其高度的特異性和純凈度,

為疾病的診斷、預(yù)防和治療開(kāi)辟了新的途徑。

單克隆抗體，簡(jiǎn)稱mAb,是通過(guò)將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合

形成雜交瘤細(xì)胞，并篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞系而制備的。

這種制備方法徹底改變了傳統(tǒng)多克隆抗體的生產(chǎn)方式，使得抗體的生

產(chǎn)更加精準(zhǔn)、高效和可靠。

在醫(yī)學(xué)應(yīng)用中，單克隆抗體因其獨(dú)特的性質(zhì)而展現(xiàn)出巨大的潛力。

它們能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)抗原，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)特定疾病或病理

狀態(tài)的精準(zhǔn)治療。在癌癥治療中，針對(duì)特定癌細(xì)胞的單克隆抗體可以

攜帶藥物直接攻擊癌細(xì)胞，提高治療效果并降低副作用。單克隆抗體

還廣泛應(yīng)用于疾病的早期診斷，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等，

為疾病的早期發(fā)現(xiàn)和治療提供了有力工具。

隨著科技的不斷發(fā)展，單克隆抗體的制備技術(shù)也在不斷進(jìn)步?；?/p>

因工程、蛋白質(zhì)工程等新技術(shù)的應(yīng)用，使得我們能夠更加精確地控制

抗體的性質(zhì)和功能，從而開(kāi)發(fā)出更加安全、有效的抗體藥物。生物信

息學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)的進(jìn)步也為我們深入理解抗體與抗原的相互作用

機(jī)制提供了有力支持，為抗體藥物的優(yōu)化理供了理論依據(jù)。

單克隆抗體的出現(xiàn)與發(fā)展代表了生物技術(shù)的巨大進(jìn)步，它不僅提

高了我們對(duì)于生命現(xiàn)象的理解，也極大地推動(dòng)了醫(yī)學(xué)和其他相關(guān)領(lǐng)域

的發(fā)展。隨著科技的不斷進(jìn)步和應(yīng)用領(lǐng)域的不斷拓展，單克隆抗體將

在醫(yī)療、生物技術(shù)、農(nóng)業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮更加重要的作用，為人類健

康事業(yè)的發(fā)展做出更大的貢獻(xiàn)。

1.簡(jiǎn)要介紹抗體及其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要性

作為一種特殊的蛋白質(zhì)，是生物體在受到外來(lái)抗原刺激后產(chǎn)生的

免疫反應(yīng)的核心組成部分。它們能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合抗原，進(jìn)而

啟動(dòng)一系列生物學(xué)過(guò)程，以清除抗原并保護(hù)機(jī)體免受外來(lái)物質(zhì)的侵害。

在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，抗體因其高度的特異性和親和性而備受矚目，廣泛

應(yīng)用于疾病診斷、預(yù)防和治療等多個(gè)方面。

在疾病診斷方面，抗體作為一類重要的生物標(biāo)志物，能夠反映機(jī)

體對(duì)特定抗原的免疫反應(yīng)狀態(tài)。通過(guò)檢測(cè)血清中的抗體水平，醫(yī)生可

以判斷患者是否感染了某種病原體，或者是否患有某種自身免疫性疾

病。抗體還可以用于腫瘤的診斷，通過(guò)檢測(cè)特定腫瘤相關(guān)抗原的抗體，

有助于早期發(fā)現(xiàn)和診斷腫瘤。

在疾病預(yù)防方面，抗體具有中和病原體、阻止其感染細(xì)胞的能力。

通過(guò)接種疫苗或直接注射抗體，可以預(yù)防某些傳染病的發(fā)生?？贵w還

可以用于被動(dòng)免疫，即將抗體直接輸入體內(nèi)，以迅速提高機(jī)體的免疫

力，對(duì)抗病原體的侵襲。

在治療方面，抗體藥物的研發(fā)和應(yīng)用為許多疾病的治療帶來(lái)了新

的希望。通過(guò)利用抗體的特異性識(shí)別能力，可以設(shè)計(jì)出針對(duì)特定抗原

的藥物，以治療腫瘤、自身免疫性疾病等。抗體還可以用于藥物的靶

向輸送，將藥物精確地送達(dá)病變部位，提高治療效果并減少副作用。

抗體在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景和重要的科學(xué)價(jià)值。隨

著生物技術(shù)的不斷進(jìn)步和抗體藥物的不斷發(fā)展，相信未來(lái)會(huì)有更多創(chuàng)

新的抗體應(yīng)用方式出現(xiàn)，為人類健康事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)。

2.單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)背景與意義

單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)并非偶然，而是基于人類對(duì)抗體認(rèn)識(shí)的深

入以及免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域的技術(shù)積累。在單克隆抗

體技術(shù)問(wèn)世之前，抗體的制備主要依賴于傳統(tǒng)的多克隆抗體技術(shù)，這

種技術(shù)制備的抗體成分復(fù)雜、特異性低，且難以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和大規(guī)模

生產(chǎn)，限制了其在醫(yī)學(xué)研究和臨床應(yīng)用中的潛力。

20世紀(jì)60年代，多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)現(xiàn)為單克隆抗體技術(shù)的誕生

提供了重要的啟示。多發(fā)性骨髓瘤是一種漿細(xì)胞來(lái)源的腫瘤，能夠在

及其在未來(lái)醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的潛力。通過(guò)深入分析單克隆抗體的

制備技術(shù)、作用機(jī)制以及在疾病診斷和治療中的具體應(yīng)用案例，我們

期望能夠揭示其在現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)中的重要地位及價(jià)值。

文章將按照邏輯清晰、層次分明的結(jié)構(gòu)進(jìn)行展開(kāi)。我們將回顧單

克隆抗體的起源和早期研究，包括其理論基礎(chǔ)的奠定和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的突

破。我們將詳細(xì)介紹單克隆抗體的制備方法和優(yōu)化過(guò)程，探討不同制

備技術(shù)對(duì)抗體性質(zhì)和功能的影響。文章將重點(diǎn)闡述單克隆抗體在醫(yī)學(xué)

領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，包括感染性疾病、腫瘤治療、自身免疫性疾病等方

面的研究進(jìn)展和臨床應(yīng)用案例。我們還將關(guān)注單克隆抗體在生物技術(shù)

領(lǐng)域的應(yīng)用，如藥物研發(fā)、生物分析等方面。

文章將展望單克隆抗體的未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)和挑戰(zhàn)，探討新技術(shù)、新

方法的出現(xiàn)對(duì)單克隆抗體領(lǐng)域的影響，以及未來(lái)可能面臨的技術(shù)瓶頸

和市場(chǎng)前景。通過(guò)本文的闡述，我們期望能夠?yàn)樽x者提供一個(gè)全面、

深入的了解單克隆抗體的視角，并激發(fā)更多人對(duì)這一領(lǐng)域的關(guān)注和興

趣。

二、單克隆抗體技術(shù)的起源與基本原理

單克隆抗體技術(shù)的起源可追溯至20世紀(jì)70年代，當(dāng)時(shí)英國(guó)科學(xué)

家MiIstein和Kohler首次成功地將產(chǎn)生抗體的單個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨

髓腫瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，從而開(kāi)啟了單克隆抗體技術(shù)的新篇章。這

一技術(shù)的出現(xiàn)，不僅為免疫學(xué)領(lǐng)域帶來(lái)了革命性的突破，也為后續(xù)的

醫(yī)學(xué)診斷和治療提供了強(qiáng)有力的工具。

單克隆抗體技術(shù)的基本原理在于利用細(xì)胞融合技術(shù)，將具有特定

抗原識(shí)別能力的B淋巴細(xì)胞與具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行

融合。B淋巴細(xì)胞在受到抗原刺激后，能夠產(chǎn)生針對(duì)該抗原的特異性

抗體，但其在體外環(huán)境中無(wú)法進(jìn)行無(wú)限分裂。而骨髓瘤細(xì)胞則具有在

體外環(huán)境中無(wú)限傳代的能力，但本身并不具備產(chǎn)生抗體的功能。通過(guò)

將這兩種細(xì)胞進(jìn)行融合，得到的雜交瘤細(xì)胞既繼承了B淋巴細(xì)胞的抗

體產(chǎn)生能力，又保留了骨髓瘤細(xì)胞的無(wú)限漕殖特性。

在單克隆抗體技術(shù)的實(shí)際操作中，首先需要通過(guò)免疫動(dòng)物獲得特

定的抗原，并激發(fā)其體內(nèi)B細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體。從動(dòng)物的脾臟或骨

髓中分離出這些B細(xì)胞，并與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合°融合后的雜交瘤

細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選和擴(kuò)增，最終可以得到能夠穩(wěn)定產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞

株。這些單克隆抗體具有高度特異性和親和力，能夠精確識(shí)別并結(jié)合

目標(biāo)抗原，從而在醫(yī)學(xué)診斷、治療和科研領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)，極大地推動(dòng)了免疫學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展。與傳

統(tǒng)的多克隆抗體相比，單克隆抗體具有更高的特異性和純度，能夠更

準(zhǔn)確地識(shí)別目標(biāo)抗原，減少非特異性反應(yīng)和交叉反應(yīng)的發(fā)生。單克隆

抗體還可以通過(guò)基因工程技術(shù)進(jìn)行改造和優(yōu)化，進(jìn)一步拓展其應(yīng)用范

圍和功能。

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，單克隆抗體技術(shù)也在不斷更新

和優(yōu)化。該技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、治療、科研等多個(gè)領(lǐng)域，

為人類的健康事業(yè)做出了重要貢獻(xiàn)。隨著對(duì)單克隆抗體技術(shù)的深入研

究和探索，相信其將在更多領(lǐng)域展現(xiàn)出更廣闊的應(yīng)用前景和潛力。

1.雜交瘤技術(shù)的誕生與發(fā)展

在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中，單克隆抗體的出現(xiàn)堪稱是一場(chǎng)革命性的

突破。這一技術(shù)的誕生與發(fā)展，離不開(kāi)雜交瘤技術(shù)的創(chuàng)新與應(yīng)用。雜

交瘤技術(shù)，又稱單克隆抗體技術(shù)，是制備抗體的關(guān)鍵手段，為現(xiàn)代生

物醫(yī)學(xué)研究提供了強(qiáng)大的工具。

雜交瘤技術(shù)的誕生可以追溯到20世紀(jì)70年代中期。英國(guó)劍橋大

學(xué)的科學(xué)家Milstein和Khler率先開(kāi)展了這一領(lǐng)域的研究。他們巧

妙地將具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞與能夠分泌抗體的小鼠B細(xì)

胞進(jìn)行融合，成功獲得了能夠傳代培養(yǎng)和持續(xù)分泌單克隆抗體的小鼠

雜交瘤細(xì)胞。這一技術(shù)的誕生，不僅解決了傳統(tǒng)抗體制備方法中抗體

來(lái)源有限、特異性不強(qiáng)等問(wèn)題，而且為單克隆抗體的制備提供了全新

的途徑。

隨著雜交瘤技術(shù)的不斷發(fā)展，其應(yīng)用領(lǐng)域也不斷拓寬?？茖W(xué)家們

通過(guò)優(yōu)化細(xì)胞融合條件、改進(jìn)篩選方法等手段，不斷提高雜交瘤細(xì)胞

的穩(wěn)定性和抗體產(chǎn)量。他們還探索了將雜交瘤技術(shù)應(yīng)用于不同物種、

不同組織來(lái)源的抗體制備，使得單克隆抗體的種類和數(shù)量都得到了極

大的豐富。

雜交瘤技術(shù)的發(fā)展也為生物醫(yī)學(xué)研究帶來(lái)了深遠(yuǎn)的影響。通過(guò)制

備特異性強(qiáng)的單克隆抗體，科學(xué)家們能夠更準(zhǔn)確地定位和研究生物體

內(nèi)的特定分子和細(xì)胞，從而揭示了許多重要的生物學(xué)過(guò)程和疾病機(jī)制。

單克隆抗體還廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、免疫治療等領(lǐng)域，為人類的健康

事業(yè)做出了重要貢獻(xiàn)。

雜交瘤技術(shù)也面臨著一些挑戰(zhàn)和限制。由于鼠源性抗體與人體親

和力有限，可能導(dǎo)致成藥安全性問(wèn)題；從免疫到特異性雜交瘤鑒定的

工作流程漫長(zhǎng)且復(fù)雜，也限制了該技術(shù)的廣泛應(yīng)用。隨著科學(xué)技術(shù)的

不斷進(jìn)步和創(chuàng)新，相信未來(lái)雜交瘤技術(shù)將會(huì)得到進(jìn)一步的完善和發(fā)展,

為生物醫(yī)學(xué)研究帶來(lái)更多的突破和進(jìn)步。

2.單克隆抗體技術(shù)的基本原理

單克隆抗體技術(shù)的誕生，無(wú)疑是現(xiàn)代生物技術(shù)領(lǐng)域的一次重大突

破。這一技術(shù)的核心原理在于，通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)，將具有分泌特異

性抗體能力的B淋巴細(xì)胞與具有大量繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融

合，形成雜交瘤細(xì)胞。這種雜交瘤細(xì)胞既保留了B淋巴細(xì)胞合成分泌

特異性抗體的能力，又具備了骨髓瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性，從而實(shí)現(xiàn)

了既能生產(chǎn)高度均僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體，又能實(shí)現(xiàn)抗體的

大量制備。

在單克隆抗體技術(shù)的實(shí)際操作中，首先需要獲得針對(duì)某一特定抗

原的免疫B淋巴細(xì)胞。這通常是通過(guò)將抗原注射入動(dòng)物體內(nèi)，刺激其

免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，然后從動(dòng)物的脾臟等組織中分離出B淋巴

細(xì)胞。利用細(xì)胞融合技術(shù)，將這些B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,

形成雜交瘤細(xì)胞。這些雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選和克隆化，最終得到能夠

穩(wěn)定分泌針對(duì)特定抗原表位抗體的細(xì)胞株。

通過(guò)培養(yǎng)這些雜交瘤細(xì)胞，我們可以獲得大量的單克隆抗體。這

些抗體具有高度均一性，只針對(duì)特定的抗原表位，因此具有極高的特

異性和靈敏度。由于單克隆抗體技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)抗體的大量制備，因此

也為抗體的應(yīng)用提供了便利.

單克隆抗體技術(shù)的基本原理在于通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)，將B淋巴細(xì)

胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，形成能夠穩(wěn)定分泌高度均針對(duì)特定抗原表

位抗體的雜交瘤細(xì)胞。這一技術(shù)的出現(xiàn)，為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究和臨床

應(yīng)用提供了強(qiáng)有力的工具。

3.早期單克隆抗體的制備過(guò)程

單克隆抗體的制備過(guò)程是一項(xiàng)精細(xì)且復(fù)雜的生物技術(shù)操作，它標(biāo)

志著生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一次重大突破。這一過(guò)程的實(shí)現(xiàn)主要依賴于細(xì)胞

融合技術(shù)和選擇性培養(yǎng)技術(shù)。

制備單克隆抗體需要從免疫動(dòng)物中獲取致敏B淋巴細(xì)胞。研究者

會(huì)選擇純系小鼠作為免疫動(dòng)物，通過(guò)注射特定的抗原，使小鼠產(chǎn)生免

疫反應(yīng)并生成相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。這些B淋巴細(xì)胞能夠分泌特異性抗

體，針對(duì)特定的抗原進(jìn)行識(shí)別和攻擊。

研究者需要將致敏B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。骨髓瘤細(xì)

胞是一種能夠在體外無(wú)限增殖的細(xì)胞，而B(niǎo)淋巴細(xì)胞則具有分泌特異

性抗體的能力。通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)，研究者可以將這兩種細(xì)胞的特性

結(jié)合在一起，形成雜交瘤細(xì)胞。這種雜交瘤細(xì)胞既能夠無(wú)限增殖，又

能夠分泌針對(duì)特定抗原的抗體。

融合后的雜交瘤細(xì)胞需要通過(guò)選擇性培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行篩選。研究者

會(huì)利用特定的培養(yǎng)基，篩選出那些能夠穩(wěn)定分泌特異性抗體的雜交瘤

細(xì)胞系。這些細(xì)胞系被進(jìn)一步培養(yǎng)和擴(kuò)增，用于大量生產(chǎn)單克隆抗體。

研究者會(huì)從篩選出的雜交瘤細(xì)胞系中提取單克隆抗體。這些抗體

具有高度特異性、高純度和高靈敏度的特點(diǎn)，能夠用于疾病的診斷、

治療和生物研究等多個(gè)領(lǐng)域。

早期單克隆抗體的制備過(guò)程雖然復(fù)雜，但它的成功為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)

域帶來(lái)了巨大的變革。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和優(yōu)化，單克隆抗體的制

備過(guò)程變得更加高效和可靠，為人類的健康事業(yè)做出了重要貢獻(xiàn)。

三、單克隆抗體技術(shù)的突破與進(jìn)展

單克隆抗體技術(shù)的突破與進(jìn)展可謂日新月異，其在生物醫(yī)藥領(lǐng)域

的地位日益凸顯，為疾病診斷與治療帶來(lái)了革命性的變革。

自20世紀(jì)80年代初，Kohler和Mlsrein成功建立了體外細(xì)胞

雜交融合的雜交瘤細(xì)胞技術(shù)，從而制備出純度極高的單克隆抗體以來(lái),

單克隆抗體技術(shù)便開(kāi)啟了飛速發(fā)展的序幕。這一技術(shù)的出現(xiàn)，徹底改

變了傳統(tǒng)多克隆抗體的生產(chǎn)方式，使得抗體的生產(chǎn)更加標(biāo)準(zhǔn)化、產(chǎn)量

更高、品質(zhì)更均一°

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，單克隆抗體技術(shù)也在不斷創(chuàng)新和完善。

基因敲除技術(shù)、蛋白質(zhì)工程等新技術(shù)的應(yīng)用，使得我們能更加精確地

控制抗體的性質(zhì)和功能。通過(guò)對(duì)抗體基因的改造，可以使其具有更強(qiáng)

的親和力、更低的免疫原性或更好的穩(wěn)定性，從而進(jìn)一步提高其在診

斷和治療中的效果。

單克隆抗體技術(shù)的突破還體現(xiàn)在制備過(guò)程的優(yōu)化上。通過(guò)改進(jìn)細(xì)

胞培養(yǎng)條件、優(yōu)化雜交瘤細(xì)胞的篩選和克隆方法，可以進(jìn)一步提高單

克隆抗體的產(chǎn)量和純度。新的分離和純化技術(shù)的出現(xiàn)，也使得單克隆

抗體的制備更加高效和便捷。

在臨床應(yīng)用方面，單克隆抗體技術(shù)也取得了顯著的進(jìn)展。越來(lái)越

多的單克隆抗體藥物被批準(zhǔn)用于治療各種疾病，如癌癥、自身免疫性

疾病等。這些藥物通過(guò)特異性地識(shí)別并攻擊病原體或異常細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)

了對(duì)疾病的精準(zhǔn)治療，大大提高了治療效果并降低了副作用。

隨著生物信息學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)的發(fā)展，我們對(duì)抗體與抗原的相互

作用機(jī)制將有更深入的理解。這將為單克隆抗體技術(shù)的進(jìn)一步優(yōu)化和

創(chuàng)新提供理論支持。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療概念的普及，單克隆抗體在個(gè)體化

治療中的應(yīng)用也將得到更大的發(fā)展。

單克隆抗體技術(shù)的突破與進(jìn)展不僅提高了我們對(duì)于生命現(xiàn)象的

理解，也極大地推動(dòng)了醫(yī)學(xué)和其他相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展。我們有理由相信,

在不久的將來(lái)，單克隆抗體技術(shù)將在更多領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用，為人

類健康事業(yè)作出更大的貢獻(xiàn)。

1.基因工程抗體技術(shù)的興起

隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，基因工程抗體技術(shù)于20世紀(jì)80年代

后期嶄露頭角，并迅速成為單克隆抗體研究領(lǐng)域的嶄新篇章。這一技

術(shù)的興起，不僅極大地豐富了抗體藥物的種類，更提升了其療效和安

全性，為眾多疾病的診斷和治療開(kāi)辟了新的道路。

基因工程抗體技術(shù)通過(guò)改造抗體的基因序列，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗體性質(zhì)的

精確調(diào)控。與傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)相比，基因工程抗體技術(shù)具有更高的

靈活性和可定制性，能夠制備出具有特定功能、更高親和力、更低免

疫原性的抗體。通過(guò)基因敲除或替換技術(shù)，可以消除抗體中的非必需

成分，降低其在人體內(nèi)的免疫原性，從而提高藥物的耐受性和安全性。

基因工程抗體技術(shù)還能夠?qū)崿F(xiàn)抗體的人源化改造。通過(guò)將鼠源抗

體中的部分序列替換為人源序列，可以顯著降低抗體在人體內(nèi)的免疫

排斥反應(yīng)，提高藥物的療效和患者的生存質(zhì)量。這一技術(shù)的突破，使

得單克隆抗體藥物在腫瘤治療、自身免疫性疾病等領(lǐng)域的應(yīng)用更加廣

泛。

隨著基因測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)的不斷發(fā)展，基因工程抗體技

術(shù)的應(yīng)用也日益深入。研究人員可以通過(guò)對(duì)抗體基因和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的

深入分析，揭示抗體與抗原相互作用的分子機(jī)制，為抗體的優(yōu)化和設(shè)

計(jì)提供更為堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

基因工程抗體技術(shù)的興起為單克隆抗體的研究和發(fā)展注入了新

的活力。這一技術(shù)不僅提高了抗體的性能和質(zhì)量，更拓展了其在醫(yī)學(xué)

領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。隨著基因編輯、合成生物學(xué)等前沿技術(shù)的不斷進(jìn)步,

基因工程抗體技術(shù)有望在單克隆抗體的制備和應(yīng)用中發(fā)揮更加重要

的作用，為人類健康事業(yè)作出更大的貢獻(xiàn)。

2.人源化抗體、嵌合抗體和完全人源化抗體的出現(xiàn)

隨著單克隆抗體技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，人們逐漸認(rèn)識(shí)到鼠源單

克隆抗體在人體應(yīng)用中的局限性，如免疫原性強(qiáng)、半衰期短等?？蒲?/p>

人員開(kāi)始致力于改造和優(yōu)化單克隆抗體，使其更好地適應(yīng)人體環(huán)境,

提高治療效果。這一過(guò)程中，人源化抗體、嵌合抗體和完全人源化抗

體的出現(xiàn)，標(biāo)志著單克隆抗體技術(shù)進(jìn)入了一個(gè)新的階段。

人源化抗體是通過(guò)基因工程技術(shù)對(duì)鼠源單克隆抗體進(jìn)行改造，使

其大部分氨基酸序列為人源序列所取代，從而降低了異源性，減少了

免疫副反應(yīng)。這種抗體保留了親本鼠單克隆抗體的親和力和特異性，

同時(shí)又大大降低了對(duì)人體的免疫原性，因此在臨床應(yīng)用中具有更廣闊

的前景。

嵌合抗體則是利用DNA重組技術(shù)，將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)

基因插入含有人抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)出

嵌合抗體。這種抗體分子中輕重鏈的V區(qū)是異源的，而C區(qū)是人源的，

從而減少了異源性抗體的免疫原性，同時(shí)保留了親本抗體特異性結(jié)合

抗原的能力。

完全人源化抗體則是通過(guò)基因敲除術(shù)將小鼠1g基因敲除，代之

以人Ig基因，然后用Ag免疫小鼠，再經(jīng)雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生。這種抗體

完全由人源基因編碼，因此具有更好的人體相容性和更低的免疫原性,

是目前抗體技術(shù)發(fā)展的一個(gè)重要方向。

人源化抗體、嵌合抗體和完全人源化抗體的出現(xiàn)，不僅提高了單

克隆抗體的治療效果，降低了對(duì)人體的免疫原性，同時(shí)也拓展了單克

隆抗體在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。這些新型的抗體在疾病診斷、治療和

預(yù)防等方面發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，為人類的健康事業(yè)做出了巨大

的貢獻(xiàn)。

3.抗體庫(kù)的構(gòu)建與高通量篩選技術(shù)

隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，單克隆抗體的研究與應(yīng)用進(jìn)入了全新

的階段?？贵w庫(kù)的構(gòu)建與高通量篩選技術(shù)的出現(xiàn)，為單克隆抗體的制

備和應(yīng)用提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持:。

又稱為抗體基因文庫(kù)，是指通過(guò)基因工程手段，將大量的抗體基

因片段集合在一起，形成一個(gè)龐大的基因庫(kù)。這些抗體基因片段可以

來(lái)源于自然界中的免疫細(xì)胞，也可以通過(guò)合成生物學(xué)手段進(jìn)行人工設(shè)

計(jì)?？贵w庫(kù)的構(gòu)建不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)抗體資源的有效整合，更為后續(xù)的抗

體篩選提供了豐富的候選對(duì)象。

高通量篩選技術(shù)則是抗體庫(kù)構(gòu)建后的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的抗體篩選

方法往往效率低下，且難以保證篩選出的抗體具有高度的特異性和親

和力。而高通量篩選技術(shù)則通過(guò)自動(dòng)化、并行化的手段，實(shí)現(xiàn)對(duì)大量

抗體的高效篩選?；诹魇郊?xì)胞術(shù)的高通量篩選技術(shù)，可以在短時(shí)間

內(nèi)對(duì)數(shù)以萬(wàn)計(jì)的抗體進(jìn)行篩選，并準(zhǔn)確評(píng)估其與抗原的結(jié)合能力。

抗體庫(kù)的構(gòu)建與高通量篩選技術(shù)的結(jié)合，使得單克隆抗體的制備

更加高效、精準(zhǔn)。通過(guò)構(gòu)建不同種類的抗體庫(kù)，如人源化抗體庫(kù)、嵌

合抗體庫(kù)等，可以針對(duì)特定的疾病或抗原制備出具有高度特異性和親

和力的單克隆抗體。這些抗體在疾病診斷、治療以及生物研究等領(lǐng)域

具有廣泛的應(yīng)用前景。

高通量篩選技術(shù)還可以應(yīng)用于抗體的優(yōu)化和改造。通過(guò)對(duì)抗體結(jié)

構(gòu)、功能等方面的深入研究，可以設(shè)計(jì)出更加高效、安全的抗體藥物，

為人類的健康事業(yè)作出更大的貢獻(xiàn)。

抗體庫(kù)的構(gòu)建與高通量篩選技術(shù)的出現(xiàn)，為單克隆抗體的制備和

應(yīng)用開(kāi)辟了新的道路。隨著這些技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，相信未來(lái)單

克隆抗體將在更多領(lǐng)域展現(xiàn)出其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和潛力。

四、單克隆抗體在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用

單克隆抗體作為現(xiàn)代生物醫(yī)藥領(lǐng)域的一顆璀璨明珠，其應(yīng)用已經(jīng)

滲透到多個(gè)疾病治療領(lǐng)域，為人類的健康事業(yè)做出了巨大貢獻(xiàn)。

在腫瘤治療方面，單克隆抗體以其高度的特異性和親和力，成為

腫瘤免疫治療的重要武器。通過(guò)識(shí)別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的特定抗原,

單克隆抗體能夠激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行精準(zhǔn)打擊。己

有多種針對(duì)不同腫瘤類型的單克隆抗體藥物問(wèn)世，并在臨床治療中取

得了顯著療效。

單克隆抗體在自身免疫性疾病的治療中也發(fā)揮著重要作用。這類

疾病往往是由于機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)自身組織產(chǎn)生異常反應(yīng)所致。單克隆

抗體通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能，抑制過(guò)度活躍的免疫反應(yīng)，從而減輕

疾病癥狀并改善生活質(zhì)量。

在感染性疾病領(lǐng)域，單克隆抗體同樣展現(xiàn)出強(qiáng)大的應(yīng)用潛力。針

對(duì)病毒、細(xì)菌等病原體，研究人員可以制備出具有中和作用或阻斷感

染過(guò)程的單克隆抗體，為感染性疾病的預(yù)防和治療提供新的手段。

單克隆抗體還在神經(jīng)性疾病、心血管疾病等其他領(lǐng)域發(fā)揮著重要

作用。隨著研究的深入和技術(shù)的不斷進(jìn)步，單克隆抗體在生物醫(yī)藥領(lǐng)

域的應(yīng)用前景將更加廣闊。

1.疾病的診斷與治療

單克隆抗體的出現(xiàn)與發(fā)展，極大地推動(dòng)了疾病的診斷與治療技術(shù)

的進(jìn)步。作為一種高度特異性的生物制劑，單克隆抗體能夠精準(zhǔn)地識(shí)

別并結(jié)合目標(biāo)抗原，從而在疾病的診斷、預(yù)防和治療中發(fā)揮著不可替

代的作用。

在診斷方面，單克隆抗體被廣泛應(yīng)用于各種疾病的檢測(cè)。通過(guò)制

備針對(duì)特定病原體的單克隆抗體，醫(yī)學(xué)界可以實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的快速、準(zhǔn)

確診斷。在感染性疾病的診斷中，單克隆抗體可以用于檢測(cè)病原體抗

原或抗體，幫助醫(yī)生快速判斷病原體類型，為患者提供及時(shí)有效的治

療方案。單克隆抗體還可用于腫瘤的診斷，通過(guò)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面的

特異性抗原，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和定位。

在治療方面，單克隆抗體已經(jīng)成為許多疾病的重要治療手段。它

們可以通過(guò)中和病原體、阻斷信號(hào)傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等多種機(jī)制，

實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的精準(zhǔn)治療。在腫瘤治療中，單克隆抗體被廣泛應(yīng)用于靶

向治療和免疫治療。通過(guò)針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面的特異性抗原，單克隆抗

體可以精準(zhǔn)地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，提高患者的生存率和生活

質(zhì)量。在自身免疫性疾病、感染性疾病等領(lǐng)域，單克隆抗體也發(fā)揮著

重要作用，為患者的康復(fù)帶來(lái)了希望。

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，單克隆抗體的制備技術(shù)也日益

成熟。我們有理由相信，單克隆抗體將在疾病的診斷與治療領(lǐng)域發(fā)揮

更加廣泛和深入的作用，為人類的健康事業(yè)作出更大的貢獻(xiàn)。

2.藥物研發(fā)與生物制劑

隨著單克隆抗體技術(shù)的日益成熟，其在藥物研發(fā)與生物制劑領(lǐng)域

的應(yīng)用也愈加廣泛和深入。單克隆抗體因其高度的特異性和靶向性，

成為了許多疾病治療的重要工具，尤其在腫瘤、自身免疫性疾病以及

神經(jīng)系統(tǒng)疾病等領(lǐng)域展現(xiàn)出了巨大的潛力。

在藥物研發(fā)方面，單克隆抗體藥物已經(jīng)成為制藥業(yè)發(fā)展最快的領(lǐng)

域之一。通過(guò)針對(duì)特定疾病抗原設(shè)計(jì)并制備單克隆抗體，研究人員能

夠開(kāi)發(fā)出針對(duì)性更強(qiáng)、副作用更小的治療藥物。一些針對(duì)特定腫瘤抗

原的單克隆抗體藥物，能夠精確識(shí)別并攻擊腫瘤細(xì)胞，從而提高治療

效果并降低對(duì)正常細(xì)胞的損害。單克隆抗體還可用于攜帶其他藥物分

子，實(shí)現(xiàn)藥物的定向輸送和釋放，進(jìn)一步提高治療效率。

在生物制劑方面，單克隆抗體也發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。生物

制劑是指利用生物技術(shù)手段制備的具有生物活性的藥物，而單克隆抗

體正是其中的重要一員。通過(guò)基因工程技術(shù)，研究人員可以對(duì)單克隆

抗體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造和優(yōu)化，以提高其穩(wěn)定性和治療效果。單克隆抗

體還可用于制備免疫診斷試劑，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（EL1SA）等，

為疾病的早期診斷和治療提供有力支持。

隨著精準(zhǔn)醫(yī)療概念的普及和發(fā)展，單克隆抗體在個(gè)體化治療中的

應(yīng)用也H益受到重視。通過(guò)對(duì)患者體內(nèi)特定抗原的識(shí)別和檢測(cè)，醫(yī)生

能夠?yàn)榛颊咧贫ǜ泳珳?zhǔn)的治療方案，提高治療效果并降低不良反應(yīng)

的發(fā)生。

盡管單克隆抗體在藥物研發(fā)與生物制劑領(lǐng)域取得了顯著的成果，

但仍面臨一些挑戰(zhàn)和問(wèn)題。單克隆抗體的制備過(guò)程相對(duì)復(fù)雜且成本較

高，限制了其在一些經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)的應(yīng)用。對(duì)于某些疾病，單克隆

抗體的治療效果可能并不理想，需要進(jìn)一步研究和改進(jìn)。

單克隆抗體在約物研發(fā)與生物制劑領(lǐng)域的應(yīng)用已經(jīng)取得了顯著

的成果，為許多疾病的治療提供了新的手段。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和

應(yīng)用領(lǐng)域的不斷拓展，單克隆抗體有望在更多領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用，

為人類健康事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)。

五、單克隆抗體技術(shù)的挑戰(zhàn)與前景

盡管單克隆抗體技術(shù)在疾病診斷和治療方面取得了重大成就，但

其發(fā)展仍然面臨一些挑戰(zhàn)。制備單克隆抗體的過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，需要專

業(yè)的技術(shù)和設(shè)備支持，這在一定程度上限制了其應(yīng)用的廣泛性和可及

性。單克隆抗體的生產(chǎn)成本較高，尤其是在研發(fā)和規(guī)?；a(chǎn)過(guò)程中,

這使得其市場(chǎng)應(yīng)用受到一定的經(jīng)濟(jì)壓力。單克隆抗體在體內(nèi)的半衰期

相對(duì)較短，需要頻繁給藥，這給患者帶來(lái)了不便，也增加了治療成本。

盡管存在這些挑戰(zhàn)，單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展前景依然廣闊C隨著

科技的不斷進(jìn)步和創(chuàng)新，我們有望解決上述挑戰(zhàn)，并推動(dòng)單克隆抗體

技術(shù)在更多領(lǐng)域得到應(yīng)用。通過(guò)優(yōu)化制備工藝和提高生產(chǎn)效率，可以

降低單克隆抗體的生產(chǎn)成本，使其更加普及和可負(fù)擔(dān)。通過(guò)改進(jìn)給藥

方式和延長(zhǎng)半衰期，可以提高單克隆抗體的治療效果和患者的生活質(zhì)

量。

單克隆抗體技術(shù)有望在精準(zhǔn)醫(yī)療、個(gè)體化治療等領(lǐng)域發(fā)揮更大的

作用。隨著對(duì)疾病機(jī)制的深入理解和生物信息學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)的快速

發(fā)展，我們可以更加精確地設(shè)計(jì)和優(yōu)化單克隆抗體，以針對(duì)特定的疾

病靶點(diǎn)進(jìn)行精準(zhǔn)治療。單克隆抗體技術(shù)還有望與其他生物技術(shù)手段相

結(jié)合，如基因編輯、細(xì)胞治療等，共同推動(dòng)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展。

雖然單克隆抗體技術(shù)目前面臨一-些挑戰(zhàn)，但其廣闊的應(yīng)用前景和

巨大的發(fā)展?jié)摿κ蛊涑蔀樯镝t(yī)藥領(lǐng)域的重要研究方向。我們有理由

相信，在未來(lái)的發(fā)展中，單克隆抗體技術(shù)將為人類健康和醫(yī)學(xué)事業(yè)做

出更大的貢獻(xiàn)。

1.技術(shù)挑戰(zhàn)與局限性

單克隆抗體的出現(xiàn)與發(fā)展，無(wú)疑是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)重大突破。

其制備與應(yīng)用過(guò)程中也面臨著諸多技術(shù)挑戰(zhàn)與局限性。

單克隆抗體的制備過(guò)程需要精細(xì)的細(xì)胞融合技術(shù)和篩選方法。盡

管雜交瘤技術(shù)的出現(xiàn)極大地推動(dòng)了單克隆抗體的生產(chǎn)，但這一技術(shù)仍

需要經(jīng)驗(yàn)豐富的操作人員和嚴(yán)格的質(zhì)量控制。細(xì)胞融合的成功率并不

總是理想的，這導(dǎo)致制備過(guò)程的效率較低，成本較高。

單克隆抗體的親和性和生物活性存在一定的局限性。盡管單克隆

抗體具有高度特異性和純凈度，但其對(duì)某些抗原的識(shí)別能力可能不如

多克隆抗體。單克隆抗體在體內(nèi)環(huán)境中的穩(wěn)定性和持久性也需進(jìn)一步

提高，以確保其治療效果的持續(xù)性和安全性。

單克隆抗體的應(yīng)用還受到人體免疫系統(tǒng)的限制。由于單克隆抗體

通常來(lái)源于其他物種(如小鼠)，它們?cè)谌梭w內(nèi)可能引發(fā)免疫反應(yīng)，

產(chǎn)生人抗鼠抗體(HAMA)o這不僅可能影響單克隆抗體的治療效果，

還可能帶來(lái)安全隱患。研究人員需要通過(guò)抗體人源化等技術(shù)手段來(lái)降

低這種風(fēng)險(xiǎn)。

單克隆抗體的制備和應(yīng)用還受到倫理和法規(guī)的約束。在制備過(guò)程

中，可能需要使用動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這引發(fā)了關(guān)于動(dòng)物福利和倫理的討

論。單克隆抗體的臨床應(yīng)用也需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的審批和監(jiān)管，確保其安

全性和有效性。

單克隆抗體的出現(xiàn)與發(fā)展雖然為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域帶來(lái)了巨大的進(jìn)

步，但在其制備和應(yīng)用過(guò)程中仍面臨著諸多技術(shù)挑戰(zhàn)與局限性。隨著

科技的不斷進(jìn)步和研究的深入，相信這些挑戰(zhàn)和局限性將得到逐步解

決，單克隆抗體將在更多領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用。

2.前景展望

單克隆抗體作為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的濯璨明珠，其出現(xiàn)與發(fā)展為

疾病治療與預(yù)防開(kāi)辟了新的道路。單克隆抗體技術(shù)將繼續(xù)在多個(gè)方面

展現(xiàn)出廣闊的前景。

隨著基因編輯技術(shù)的不斷進(jìn)步，單克隆抗體的設(shè)計(jì)和優(yōu)化將更加

精準(zhǔn)和高效?？蒲腥藛T將能夠更精確地調(diào)控抗體的親和力、特異性和

穩(wěn)定性，從而開(kāi)發(fā)出更加高效、安全的抗體藥物。這將有助于解決當(dāng)

前抗體藥物存在的一些局限性和問(wèn)題，如免疫原性、抗藥性等。

單克隆抗體在個(gè)性化醫(yī)療和精準(zhǔn)治療方面將發(fā)揮越來(lái)越重要的

作用。通過(guò)對(duì)患者基因型、表型以及疾病機(jī)制的深入研究，科研人員

將能夠開(kāi)發(fā)出針對(duì)特定患者群體的定制化抗體藥物。這將有助于提高

治療效果、降低副作用，并推動(dòng)醫(yī)療領(lǐng)域向更加個(gè)性化和精準(zhǔn)化的方

向發(fā)展。

單克隆抗體在腫瘤免疫治療、感染性疾病治療以及自身免疫性疾

病治療等領(lǐng)域的應(yīng)用也將不斷拓展。隨著對(duì)腫瘤免疫逃逸機(jī)制、病原

體感染過(guò)程以及自身免疫反應(yīng)調(diào)控機(jī)制的深入了解，科研人員將能夠

開(kāi)發(fā)出更加有效的抗體藥物，為這些疾病的治療提供新的希望。

單克隆抗體技術(shù)還將與其他生物技術(shù)手段相結(jié)合，形成更加綜合

和高效的治療方案?？贵w藥物可以與細(xì)胞療法、基因療法等技術(shù)相結(jié)

合，共同應(yīng)對(duì)復(fù)雜性疾病的挑戰(zhàn)。這種跨學(xué)科的合作將為單克隆抗體

技術(shù)的發(fā)展注入新的活力，推動(dòng)生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域不斷進(jìn)步。

單克隆抗體的前景展望十分廣闊。隨著科研人員的不斷努力和技

術(shù)手段的不斷創(chuàng)新，單克隆抗體將在疾病治療與預(yù)防中發(fā)揮越來(lái)越重

要的作用，為人類健康事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)。

六、結(jié)論

單克隆抗體的出現(xiàn)與發(fā)展，無(wú)疑是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一大革命

性突破。從最初的基礎(chǔ)理論探索，到技術(shù)上的不斷突破與創(chuàng)新，再到

如今在醫(yī)療實(shí)踐中的廣泛應(yīng)用，單克隆抗體已經(jīng)深刻改變了我們對(duì)許

多疾病的認(rèn)識(shí)與治療方式。

通過(guò)回顧單克隆抗體的出現(xiàn)與發(fā)展歷程，我們可以看到，科技進(jìn)

步是推動(dòng)其發(fā)展的重要?jiǎng)恿?。隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)

等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，以及基因工程技術(shù)、蛋白質(zhì)工程技術(shù)等現(xiàn)代生物

技術(shù)的不斷創(chuàng)新，單克隆抗體的制備技術(shù)越來(lái)越成熟，性能也越來(lái)越

優(yōu)越。

單克隆抗體在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用也取得了顯著成效。無(wú)論是用于

疾病診斷，還是用于治療，單克隆抗體都展現(xiàn)出了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和潛力。

尤其在腫瘤治療、自身免疫性疾病治療等領(lǐng)域，單克隆抗體已經(jīng)成為

不可或缺的重要藥物。

單克隆抗體的發(fā)展仍面臨一些挑戰(zhàn)和問(wèn)題。制備成本較高、免疫

原性較強(qiáng)、可能引發(fā)不良反應(yīng)等。未來(lái)還需要在制備技術(shù)、免疫原性

降低、安全性提高等方面進(jìn)行深入研究和泰索。

L總結(jié)單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)與發(fā)展歷程

在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)與發(fā)展歷程堪稱一部波

瀾壯闊的史詩(shī)。自1975年分子生物學(xué)家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦開(kāi)

創(chuàng)性地建立了雜交瘤技術(shù)以來(lái)，單克隆抗體便以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，逐漸

在科研和臨床應(yīng)用中占據(jù)重要地位。

雜交瘤技術(shù)的誕生，標(biāo)志著抗體技術(shù)從多克隆抗體時(shí)代邁向了單

克隆抗體時(shí)代。這一技術(shù)通過(guò)將骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)抗原激活的B細(xì)胞融

合，形成能夠持續(xù)分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)單一抗

原決定簇的高度特異性識(shí)別。這種高度均一且特異性強(qiáng)的抗體，為后

續(xù)的生物醫(yī)學(xué)研究和疾病治療提供了有力工具。

隨著基因工程技術(shù)的不斷進(jìn)步，單克隆抗體技術(shù)也迎來(lái)了新的發(fā)

展階段。研究者們開(kāi)始嘗試將鼠源單抗進(jìn)行人源化改造，以減少其在

人體內(nèi)的免疫原性。從最初的人鼠嵌合單抗，到進(jìn)一步的人源化單抗,

再到如今的全人源單抗，每一次技術(shù)的飛躍都使得單克隆抗體在臨床

應(yīng)用中的安全性和有效性得到了顯著提升。

單克隆抗體己經(jīng)成為生物醫(yī)藥領(lǐng)域的重要組成部分，廣泛應(yīng)用于

腫瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病等多個(gè)領(lǐng)域的治療。隨著技術(shù)的

不斷發(fā)展，單克隆抗體的制備和應(yīng)用也將更加精準(zhǔn)、高效和個(gè)性化，

為人類的健康事業(yè)貢獻(xiàn)更多力量。

回顧單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)與發(fā)展歷程，我們不禁為科學(xué)家們的

智慧和勇氣所折服。正是他們不懈的探索和創(chuàng)新，才使得這一技術(shù)得

以不斷發(fā)展和完善，為人類健康事業(yè)帶來(lái)了革命性的變革。我們有理

由相信，單克隆抗體技術(shù)將繼續(xù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，為人

類的健康事業(yè)創(chuàng)造更加美好的未來(lái)。

2.強(qiáng)調(diào)單克隆抗體在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的重要性與潛力

單克隆抗體在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的重要性與潛力，可謂是不容忽視的

革命性力量。它們憑借高度特異性、強(qiáng)效性和低副作用等諸多優(yōu)勢(shì),

在疾病診斷和治療中發(fā)揮著日益重要的作用。

單克隆抗體在疾病治療方面展現(xiàn)出了巨大的潛力。它們能夠精確

地識(shí)別并結(jié)合到目標(biāo)抗原上，從而有效地中和病原體、阻斷病理過(guò)程

或調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。這使得單克隆抗體成為治療多種疾病，包括癌癥、

自身免疫性疾病和感染性疾病等的有力武器。某些針對(duì)特定腫瘤抗原

的單克隆抗體，能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡或抑制其生長(zhǎng)，為癌癥患者提

供了新的治療選擇。

單克隆抗體在疾病診斷方面也具有重要的應(yīng)用價(jià)值。它們可以作

為高靈敏度和高特異性的探針，用于檢測(cè)生物樣本中的病原體、抗原

或抗體等生物標(biāo)志物。這種診斷方法不僅準(zhǔn)確度高，而且能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)

疾病的早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)測(cè)，為疾病的預(yù)防和治療提供了有力支持。

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展和創(chuàng)新，單克隆抗體的制備技術(shù)和應(yīng)用

策略也在不斷進(jìn)步?；蚬こ碳夹g(shù)的應(yīng)用使得我們可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)

和改造單克隆抗體的結(jié)構(gòu)和功能，從而進(jìn)一步提高其療效和降低副作

用?；趩慰寺】贵w的免疫療法和藥物聯(lián)合療法等新型治療策略也在

不斷探索和實(shí)踐中，為未來(lái)的生物醫(yī)藥領(lǐng)域帶來(lái)了更多的可能性。

單克隆抗體在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的重要性和潛力不言而喻。它們不僅

為疾病的治療和診斷提供了新的思路和方法，也為生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的創(chuàng)

新發(fā)展注入了新的活力。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和應(yīng)用領(lǐng)域的不斷擴(kuò)展,

我們有理由相信單克隆抗體將會(huì)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域發(fā)揮更加重要的作

用。

3.對(duì)未來(lái)研究方向與發(fā)展趨勢(shì)的展望

隨著基因編輯技術(shù)的不斷進(jìn)步，如CRISPRCas9等，我們可以預(yù)

見(jiàn)，未來(lái)的單克隆抗體研究將更加精準(zhǔn)地定位并編輯目標(biāo)基因，從而

生產(chǎn)出具有更高親和力和特異性的抗體。這將為疾病治療提供更加有

效的武器，尤其是針對(duì)那些目前尚無(wú)有效治療手段的復(fù)雜疾病。

單克隆抗體在免疫治療領(lǐng)域的應(yīng)用將更加廣泛。隨著對(duì)免疫系統(tǒng)

機(jī)制的深入理解，研究者們將能夠設(shè)計(jì)出更加智能的單克隆抗體，它

們能夠精準(zhǔn)地識(shí)別并攻擊病原體，同時(shí)減少對(duì)正常細(xì)胞的損傷。這將

為癌癥、自身免疫性疾病等提供新的治療策略。

單克隆抗體在預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域也將發(fā)揮重要作用。通過(guò)研發(fā)針對(duì)特

定病原體的單克隆抗體，我們可以實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的早期預(yù)防，從而降低

疾病的發(fā)生率和傳播風(fēng)險(xiǎn)。這對(duì)于控制傳染病、提高公共衛(wèi)生水平具

有重要意義。

隨著生物信息學(xué)和大數(shù)據(jù)技術(shù)的快速發(fā)展，單克隆抗體的研發(fā)過(guò)

程將更加高效和智能化。通過(guò)對(duì)大量數(shù)據(jù)的挖掘和分析，我們可以預(yù)

測(cè)抗體的性能、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并加速新抗體的發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證過(guò)程。這

將大大縮短單克隆抗體的研發(fā)周期，降低研發(fā)成本，為更多患者帶來(lái)

福音。

單克隆抗體的未來(lái)研究方向與發(fā)展趨勢(shì)將涉及基因編輯技術(shù)的

應(yīng)用、免疫治療領(lǐng)域的拓展、預(yù)防醫(yī)學(xué)的重要性以及生物信息學(xué)和大

數(shù)據(jù)技術(shù)的融合。這些發(fā)展方向?qū)⒐餐苿?dòng)單克隆抗體領(lǐng)域取得更加

豐碩的成果，為人類的健康事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)。

參考資料：

單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均僅針對(duì)某一特定

抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備，雜交瘤(hybridcma)

抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的

致敏B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。

用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群，可制備針對(duì)一

種抗原表位的特異性抗體，即單克隆抗體。

單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)的，雜交瘤細(xì)胞是由一

個(gè)經(jīng)抗原激活后的B細(xì)胞與一個(gè)骨髓瘤細(xì)胞融合形成。單克隆抗體優(yōu)

點(diǎn)：純度高，特異性強(qiáng)，交叉反應(yīng)少，制備的成本低。缺點(diǎn)：對(duì)技術(shù)

有一定的要求，而且通過(guò)抗原的化學(xué)處理很容易丟失表位。

1975年分子生物學(xué)家G.J.F.克勒和C米爾斯坦在自然雜交技術(shù)

的基礎(chǔ)上，創(chuàng)建了雜交瘤技術(shù)，他們把可在體外培養(yǎng)和大量增殖的小

鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)抗原免疫后的純系小鼠B細(xì)胞融合，成為雜交細(xì)胞

系，既具有瘤細(xì)胞易于在體外無(wú)限增殖的特性，又具有抗體形成細(xì)胞

的合成和分泌特異性抗體的特點(diǎn)。將這種雜交瘤作單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，可

形成單細(xì)胞系，即單克隆。利用培養(yǎng)或小鼠腹腔接種的方法，便能得

到大量的、高濃度的、非常均一的抗體，其結(jié)構(gòu)、氨基酸順序、特異

性等都是一致的，而且在培養(yǎng)過(guò)程中，只要沒(méi)有變異，不同時(shí)間所分

泌的抗體都能保持同樣的結(jié)構(gòu)與機(jī)能。這種單克隆抗體是用其他方法

所不能得到的。

這項(xiàng)新技術(shù)從根本上解決了在抗體制備中長(zhǎng)期存在的特異性和

可重復(fù)性問(wèn)題，可用于探討

⑦免疫治療和與藥物結(jié)合的免疫-化學(xué)療法（“導(dǎo)彈”療法,利用

單克隆抗體與靶細(xì)胞特異性結(jié)合，將藥物帶至病灶部位。單克隆抗體

可直接用于人類疾病的診斷、預(yù)防、治療以及免疫機(jī)制的研究，為人

類惡性腫瘤的免疫診斷與免疫治療開(kāi)辟了廣闊前景。

免疫動(dòng)物是用R的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的

過(guò)程。一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方

案進(jìn)行免疫注射?？乖ㄟ^(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，

刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴

細(xì)胞。

采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓

研磨，制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞

按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各

種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。

選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，一般采用HAT選擇

性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的小鼠骨髓瘤細(xì)胞中DNA的從頭

合成途徑會(huì)被阻止；未融合的骨髓瘤細(xì)胞又因缺乏次黃喋吟-鳥(niǎo)喋吟-

磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT),不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA；這樣未融合

小鼠骨髓瘤細(xì)胞的兩個(gè)DNA合成途徑都被阻止，骨髓瘤細(xì)胞DNA不能

復(fù)制而死亡。未融合的B淋巴細(xì)胞雖具有次黃噪吟-鳥(niǎo)喋吟-磷酸核

糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。只有融合的

雜交瘤細(xì)胞由于從3淋巴細(xì)胞獲得了次黃喋吟-鳥(niǎo)喋吟-磷酸核糖轉(zhuǎn)

移酶，可以通過(guò)補(bǔ)救途徑合成DNA,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的

特性，雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。

在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性

單克隆抗體的細(xì)胞，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)

行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，

篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。

經(jīng)過(guò)全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、

親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后，及時(shí)進(jìn)行凍存。

(1)體內(nèi)誘生法取BALB/c小鼠，首先腹腔注射5ml液體石蠟或

降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞

在小鼠腹腔內(nèi)增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見(jiàn)小鼠

腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)

程中，雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養(yǎng)上清液，離心去

除細(xì)胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的

抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn)，大大提高了抗體的

生產(chǎn)量。

是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生(特異性)免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)

物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)(特異性反應(yīng))的

物質(zhì)。

很多物質(zhì)都可以成為抗原，抗原的具體分類可以參見(jiàn)抗原，在進(jìn)

行單克隆抗體制備過(guò)程中，很多物質(zhì)都可以成為抗原，在常規(guī)的科研

實(shí)驗(yàn)中，科研者經(jīng)常選用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug重組蛋白、

偶聯(lián)多肽、偶聯(lián)小分子等作為抗原產(chǎn)生特異性的單克隆抗體。

單克隆抗體制備的宿主動(dòng)物一般選用BALB/c小鼠，鼠單抗的應(yīng)

用范圍相當(dāng)廣泛，一些國(guó)內(nèi)外公司均開(kāi)發(fā)出了兔的單克隆抗體制備技

術(shù)。

免疫原分為可溶性抗原和顆粒性（細(xì)胞）抗原，用無(wú)菌鹽水稀釋

并與佐劑混合，腹腔注射抗原與佐劑徹底混勻后形成的穩(wěn)定乳狀液，

在免疫原提供持續(xù)的免疫應(yīng)答基礎(chǔ)上進(jìn)行加強(qiáng)免疫

細(xì)胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學(xué)融合法和

生物融合法，如滅活的仙臺(tái)病毒，此處例舉化學(xué)融合法中的一種即聚

乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG）,在分子量為200?700時(shí)，呈無(wú)色、

無(wú)臭的粘稠狀液體，分子量大于1000時(shí)，呈乳白色蠟狀固體，能溶

于水、乙醇及其他許多有機(jī)溶劑，與許多化學(xué)藥品不起作用。用作細(xì)

胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為4000者，常用濃度為50%,

pHO?pH2（用1O96N&HCO3調(diào)整），分子量小的PEG,融合效應(yīng)差，分

子量過(guò)大，則粘性太大，不易操作。50%濃度，pH偏堿時(shí)融合效應(yīng)最

高口也有采用30%?50%濃度的PEG加上10%二甲亞颯口不同批號(hào)的

PEG,即使分子量相同，但融合率卻有明顯差異，選用時(shí)必須注意。

每批都必須進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)后方可應(yīng)用。要買(mǎi)高純度的，一般選供

氣相色譜用的PEG。

融合的方法很多，常用的有轉(zhuǎn)動(dòng)法和離心法。融合時(shí)脾細(xì)胞和骨

髓瘤細(xì)胞的比例為1:1至1（）:1不等。3:1或5:1最為常用。

（6）50%PEG：取分子量4000,高純度的（日本進(jìn)口或Serva）PEG10g

放入25ml瓶中高壓滅菌，使用前用預(yù)熱于40℃的1640液10ml等量

(W/V)混合，以酚紅檢查pH,一般不必調(diào)pH。如pH有改變，可用

HC1或NaHC03調(diào)整。

⑵在50ml沉淀管中混合108脾細(xì)胞和107小鼠骨髓瘤細(xì)胞，并

力口入50nli5%FCS—1640液。

⑸輕敲管底部，使沉淀流動(dòng)，把沉淀管放于水浴中，使其

達(dá)融合溫度。

⑹加預(yù)熱至40c的50%PEG8ml,用1ml吸管緩慢滴加，邊加邊搖

沉淀管，肉眼觀察可見(jiàn)有顆粒出現(xiàn)，滴加過(guò)程要求持續(xù)2min。

(M)往已于前一日種有飼養(yǎng)細(xì)胞的40孔塑料培養(yǎng)盤(pán)中滴加融合的

細(xì)胞液,每孔1滴(約05ml)。

(⑹第10日換入含HAT的完全1640培養(yǎng)液。注意輕輕吸取上清液,

勿將固定于孔底的細(xì)胞吸出，根據(jù)需要加入適量的飼養(yǎng)細(xì)胞。

?于第15日加入含有HAT的完全1640培養(yǎng)液。在每次換液前用

倒置顯微鏡觀察，大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)出來(lái)。

大多數(shù)雜交瘤細(xì)胞在10~20天內(nèi)出現(xiàn)，但也有在1個(gè)月左右才能出現(xiàn)

的。雜交瘤細(xì)胞出現(xiàn)后，吸取上清液，檢查抗體。

(18)對(duì)繼續(xù)生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖傳代。在傳代過(guò)程中，依情

況取消HAT液和完全1640液而代之以10%FCS-1640液。同時(shí)保存于

液氮和進(jìn)行克隆化，在這期間每代都要檢查抗體，以防止產(chǎn)生抗體細(xì)

胞的變異和丟失。

1.技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。供者淋巴細(xì)胞沒(méi)有查到

免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。

2.融合試驗(yàn)最大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一

個(gè)無(wú)毒無(wú)菌的操作環(huán)境。

克隆化的細(xì)胞可以在體外進(jìn)行大量培養(yǎng)，收集上清液而獲得大量

的單一的克隆化抗體。不過(guò)體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不

能超過(guò)特定的細(xì)胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞繁殖

可以克服這些限制。雜交瘤細(xì)胞具有從親代淋巴細(xì)胞得來(lái)的腫瘤細(xì)胞

的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小

鼠(無(wú)胸腺的裸鼠)，雜交瘤細(xì)胞就開(kāi)始無(wú)限地繁殖，直至宿主死亡。

產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的小鼠腹水和血清中含有大量的雜交瘤細(xì)胞分泌的單

克隆抗體，這種抗體的效價(jià)往往高于培養(yǎng)細(xì)胞上清液的1001000倍。

利用免疫抑制劑，如降植烷、液體石蠟、抗淋巴細(xì)胞血清等，可

以加速和促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。

(2)收取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的雜交瘤細(xì)胞，用5%FCS—1640液洗滌一次,

1000r/min離心lOmin。

(3)取樣，用臺(tái)盼藍(lán)染色，計(jì)活細(xì)胞數(shù)，重新用5%FCS—1640液

配成0X107細(xì)胞的懸液。

(4)給注射了降植烷的小白鼠接種雜交瘤細(xì)胞，每只腹腔注射1ml

(含0X107個(gè)細(xì)胞/ml)o

(5)接種后10天左右時(shí)間腫瘤體積最大，此時(shí)可由腹腔抽取腹水,

每隔廣3天取1次，可取10次。血清可由腋下動(dòng)脈或心臟采血后分

離。

(1)小鼠腹水用冷PBS液稀釋4倍后，于00義105轉(zhuǎn)離心30min,

去沉淀。

(2)在4c于上清中緩緩滴加飽和硫酸鉉液，邊加邊攪拌，使

溶液最終為50%硫酸鏤濃度。

(3)此溶液置冰中30miiT60min,然后5000r/min離心lOmin,

去上清。

(4)將沉淀溶于Tris-HCl緩沖液(40mMol/LNaCl)中(溶液

可能混濁)。

(5)裝入透析袋于Tris—HC1緩沖液(20mMol/LNaCl)中透析

除鹽。

(6)離心去沉淀。(7)溶液稀釋(1:100或更高倍稀釋)后，

于280nm測(cè)蛋白含量，估計(jì)蛋白質(zhì)含量lA280unit=8mg蛋白質(zhì)一般每

ml腹水中，含有總蛋白約25mg'36mgo

(8)過(guò)DEAE一纖維素柱：纖維素柱高40cm,以20mMol/LNaClTris

緩沖液平衡。透析樣品以Tris緩沖液等量稀釋。

樣品進(jìn)入柱床速度為以NaCl線形梯度洗脫。大

部分單克隆IgG于40mMol/L和80mMol/LNaCl洗脫，也有極少例外的

單克隆抗體于120nlMol/L~150mMol/LNaCl洗脫。測(cè)0D280nm收集蛋白

峰，單克隆IgG保存?zhèn)溆谩?/p>

雜交瘤產(chǎn)生各種免疫球蛋白，但主要是IgG和Ig'L究竟是哪種

為主，則決定于抗原的免疫程序。且3天后就取脾，多為產(chǎn)生IgM的

B淋巴細(xì)胞。免疫多次的多為IgG。

2.單克隆抗體的類型、亞型的測(cè)定：購(gòu)買(mǎi)兔抗小鼠Ig類型和亞

型的標(biāo)準(zhǔn)抗血清，采用瓊脂擴(kuò)散法或ELISA夾心法測(cè)定單抗的Ig類

型和亞型。

本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細(xì)胞雜交瘤培養(yǎng)上清

中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類（可區(qū)分出

IgGl\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）o采用小鼠抗體共有位點(diǎn)的二抗

包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標(biāo)記

的抗小鼠各類、亞類的抗體來(lái)分別反應(yīng)，最后用?B底物系統(tǒng)顯色并

用稀硫酸終止，再通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)判斷被測(cè)單克隆抗體的類

或亞類。本試劑盒具有極高的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、

亞類的可靠工具。

首先將試劑盒恢復(fù)室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配

成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。

取出酶標(biāo)板。每個(gè)標(biāo)本需要6孔，陽(yáng)性對(duì)照6孔。多余的用自封

袋保存，記得放入干燥劑。

將細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）50ul加入酶標(biāo)微孔

板，每個(gè)標(biāo)本加6孔，陽(yáng)性對(duì)照也是加6孔每孔50口1。然后每孔再

加入50H1標(biāo)本稀釋液。貼上封板膜37c溫育30分鐘。

棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗

5遍。再在每個(gè)標(biāo)本的6孔中分別加入6種酶標(biāo)二抗各100ul,通用

陽(yáng)性對(duì)照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板

膜37℃溫育30分鐘。

吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗

5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50口1,換一張新的封板

膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍(lán)的那個(gè)孔

所對(duì)應(yīng)的前標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的1g類或亞類。更口J將反應(yīng)終止液

（每孔50口1）終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450nm測(cè)定波長(zhǎng)，630nm參考波

長(zhǎng)雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果，參看高值孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的

Ig類或亞類。陽(yáng)性對(duì)照0D小于5實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需要重做。

2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過(guò)于頻繁開(kāi)啟使用有可

能因此使效期縮短。

在檢測(cè)腹水類單抗時(shí)要稀釋到1/5萬(wàn)，雖然可以分辨但并不建議

您這樣做。此類樣品成分十分復(fù)雜，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況

下您可以選擇的C030215抗體鑒定試劑。它會(huì)給您帶來(lái)滿意的結(jié)果。

手洗板子時(shí)一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，最后要拍干

凈。特別是在酶標(biāo)二抗溫育后洗板時(shí)一定要把酶吸出而不是甩出，要

吸凈。這個(gè)在手工洗板時(shí)對(duì)結(jié)果很重要。

單抗的特異性鑒定可以采用各種方法，如免疫熒光法、ELISA法、

間接血凝和免疫印跡技術(shù)等，同時(shí)還需做免疫阻斷試驗(yàn)等。

單抗的效價(jià)測(cè)定可采用凝集反應(yīng)、ELISA或放射免疫測(cè)定。不同

的測(cè)定方法效價(jià)不同。培養(yǎng)上清液的效價(jià)遠(yuǎn)不如腹水的效價(jià)。采用凝

集反應(yīng)，腹水效價(jià)可達(dá)5X104。而采用ELISA檢查，腹水效價(jià)可達(dá)0

X106o單抗的效價(jià)以培養(yǎng)上清和腹水的稀釋度表示。

經(jīng)過(guò)抗體測(cè)定的陽(yáng)性孔，可以擴(kuò)大培養(yǎng)，以得到單個(gè)細(xì)胞的后代

分泌單克隆抗體?？寺〉臅r(shí)間一般說(shuō)來(lái)越早越好。因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各

種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長(zhǎng)，互相爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生指定抗體

的細(xì)胞有被淹沒(méi)和淘汰的可能。但克隆時(shí)間也不宜太早，太早細(xì)胞性

狀不穩(wěn)定，數(shù)量少也易丟失。克隆化的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過(guò)一段時(shí)

期培養(yǎng)之后，也還會(huì)因?yàn)榧?xì)胞突變或特定染色體的丟失，使部分細(xì)胞

喪失產(chǎn)生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)?？寺』螖?shù)

的多少由分泌能力強(qiáng)弱和抗原的免疫性強(qiáng)弱而決定。免疫性強(qiáng)的抗原

克隆次數(shù)可少一些，但至少要3?5次克隆才能穩(wěn)定?？寺』姆椒?/p>

很多，包括有限稀釋法、顯微操作法、軟瓊脂平板法及熒光激活分離

法等。

（1）微量培養(yǎng)盤(pán)，盤(pán)內(nèi)各孔于克隆化前一天培養(yǎng)小鼠腹腔細(xì)胞

（即飼養(yǎng)細(xì)胞）每孔2萬(wàn)?4萬(wàn)。

（1）取出抗體陽(yáng)性孔細(xì)胞，用HT培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。并取樣

進(jìn)行臺(tái)盼蘭染色，計(jì)數(shù)。

⑵用HT培養(yǎng)液將細(xì)胞稀釋成200個(gè)/ml、40個(gè)/ml、20個(gè)/ml

和的懸液。

（3）用吸管將細(xì)胞懸液分別種入微量培養(yǎng)盤(pán)，每孔05ml,細(xì)胞

含量分別為10個(gè)/孔、2個(gè)/孔、1個(gè)/孔和5個(gè)/孔。

（5）每天用倒置顯微鏡觀察克隆生長(zhǎng)情況，選擇只有一個(gè)集落

生長(zhǎng)的孔，棄掉兩個(gè)以上和沒(méi)有細(xì)胞生長(zhǎng)的孔。

（6）克隆大量繁殖后，布滿孔底的1/3?1/2時(shí)，，測(cè)培養(yǎng)液抗體。

（7）抗體陽(yáng)性孔細(xì)胞，移到有飼養(yǎng)層的組織培養(yǎng)瓶中，并傳2?

4代就可以脫離飼養(yǎng)細(xì)胞，建成克隆株。

（二）軟瓊脂克隆化借助撒在軟瓊脂上單個(gè)細(xì)胞定位生長(zhǎng)，而達(dá)

到克隆化，具體操作如下：

2.將117ml完全DMEM液和3mllO倍濃度的DMEM液混合，置45℃

水浴預(yù)熱。

3.將瓊脂糖與DMEM液混合,即為含5%瓊脂糖的完全DMEM液,

并加75X108脾細(xì)胞。

5.DMEM中的細(xì)胞與DMEM一瓊脂1:1混合,將細(xì)胞瓊脂混合物

2ml鋪于凝固的平板上，使其全部覆蓋。

7.用PBS配制6%瓊脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃,在保溫情

況下取一試管，迅速加入1/25%羊紅血球，2ml豚鼠補(bǔ)體，7nli6%瓊

脂糖。

8.用3nli瓊脂糖一羊紅血球混合液覆蓋克隆。于37CCO2箱孵

育lh?2h。從克隆上部溶解羊紅血球的溶血范圍，可篩選抗羊紅血球

Igo

在直徑6cm培養(yǎng)皿中，加入lml0X108細(xì)胞懸液放置5%C02飽和

濕度，37U溫箱中放置30nlin以上，倒置顯微鏡卜，尋找那些與周圍

相距甚遠(yuǎn)的單個(gè)細(xì)胞，將毛細(xì)管口（一頭有直角彎頭毛細(xì)管，一頭連

接一尺長(zhǎng)乳膠管，用口控制液體進(jìn)入）水平置放于液面上，直到看見(jiàn)

管口，吸入毛細(xì)管，將管中細(xì)胞移到預(yù)先加有0X104~0X104飼養(yǎng)細(xì)

胞96孔板內(nèi)，即可獲得單個(gè)細(xì)胞形成的克隆。(四)熒光激活分離

法

用一種熒光激活細(xì)胞分類器(FluoresceinActivafedCellSorter,

FACS)o其基本原理是：將細(xì)胞經(jīng)熒光抗體染色后，經(jīng)噴嘴形成單個(gè)

細(xì)胞的線形液滴，在萊塞光激發(fā)下，熒光素發(fā)射熒光，此信號(hào)由光電

倍增管接收，再結(jié)合細(xì)胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號(hào)，經(jīng)電腦處理，產(chǎn)

生信號(hào)并與預(yù)定的信號(hào)對(duì)比，根據(jù)細(xì)胞熒光強(qiáng)度及細(xì)胞大小不同，將

細(xì)胞分成不同級(jí)別，在電場(chǎng)中發(fā)生偏離，而分別收集于不同容器中。

(2)將小鼠放于70%酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無(wú)菌

條件下取脾。

(3)把脾放入5ml含有5%FCS的1640液中，冰浴下輕輕洗去脾上

的紅血球°

(4)用鍍子輕輕擠壓脾，做成脾細(xì)胞懸液，用毛細(xì)管將懸液移入

小試管中。

(5)直立小試管3min,使大塊的結(jié)締組織下沉，把細(xì)胞懸液移入

離心管中。

(6)以5%FCS—1640充滿離心管，并以400g離心7min?lOmin(與

此同時(shí)應(yīng)開(kāi)始制備骨髓細(xì)胞)。

⑼計(jì)算細(xì)胞，以臺(tái)盼蘭染色用相差顯微鏡檢查，活細(xì)胞數(shù)應(yīng)高

于80%為合格。

骨髓瘤細(xì)胞能產(chǎn)生并分泌大量的免疫球蛋白，這樣的瘤細(xì)胞融合

后，可能影響或降低所分泌抗體的滴度，所以必須選育出非分泌免疫

球蛋白缺陷型的骨髓瘤細(xì)胞。

①該瘤細(xì)胞系的來(lái)源應(yīng)與制備脾細(xì)胞小鼠為同一品系，以便兩者

的組織相容性抗原一致；

③骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)需要一個(gè)較高的細(xì)胞密度,最好106個(gè)細(xì)胞

/ml；

@F0以653最為常用，它是由礦物油4一甲基一15烷(Pristane,

降植烷)誘發(fā)出來(lái)的一種漿細(xì)胞瘤(MinerolOilplasmacytoma,MOPC)

并經(jīng)過(guò)培育形成一一株8-氮鳥(niǎo)噂吟有抵抗力的亞系。骨髓瘤細(xì)胞一般

由有關(guān)單位直接引入，保存于-195。。液氮罐中，試驗(yàn)時(shí)復(fù)蘇、增殖、

傳代即可。由于骨髓瘤細(xì)胞是半貼壁狀態(tài)，很容易脫落，因此不需要

胰酶處理。為了防止出現(xiàn)返祖現(xiàn)象，可將培養(yǎng)基內(nèi)加入15ug/ml8一

氮鳥(niǎo)喋吟。取約IX107?6X107對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(即培養(yǎng)15h?20h)的

骨髓瘤細(xì)胞，在室溫離心(400g)lOmin,沉淀以5%FCS—1640液再

懸浮并計(jì)數(shù)。

在體外的細(xì)胞培養(yǎng)中，單個(gè)的或數(shù)量很少的細(xì)胞不易生存與繁殖,

必須加入其它活的細(xì)胞才能使其生長(zhǎng)繁殖，加入的細(xì)胞稱之為飼養(yǎng)細(xì)

胞(Feedercell)o在細(xì)胞融合和單克隆的選擇過(guò)程中，就是在少量

的或單個(gè)細(xì)胞的基礎(chǔ)上使其生長(zhǎng)繁殖成群體，因此在這一過(guò)程中必須

使用飼養(yǎng)細(xì)胞。許多種類的動(dòng)物細(xì)胞都可以做飼養(yǎng)細(xì)胞，如正常的脾

細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、腹腔滲出細(xì)胞等，常選用腹腔滲出細(xì)胞，其中主要

是巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。

一方面做飼養(yǎng)細(xì)胞，另一方面巨噬細(xì)胞可以吞噬死亡的細(xì)胞和細(xì)

胞碎片，為融合細(xì)胞的生長(zhǎng)造成良好的環(huán)境。腹腔細(xì)胞的來(lái)源可以是

與骨髓瘤細(xì)胞同系鼠。也可以是其他種類的小鼠，如C57鼠，昆明小

白鼠等。

(4)用注射器將4nli6%蔗糖溶液注入腹腔，用手指輕揉Imin仍

用該注射器回抽腹腔液體，加入離心管。

(6)棄上清，以HT培養(yǎng)液將細(xì)胞制成懸液。臺(tái)吩藍(lán)染色計(jì)數(shù)活

細(xì)胞，使每毫升含40萬(wàn)個(gè)活細(xì)胞。

(7)以1ml吸管將細(xì)胞種入微量培養(yǎng)皿，每孔05ml,含2萬(wàn)個(gè)

細(xì)胞，放入C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)，即可供細(xì)胞融合和克隆化之用.

單克隆抗體問(wèn)世以來(lái)，由于其獨(dú)有的特征已迅速應(yīng)用于醫(yī)學(xué)很多

領(lǐng)域。主要表現(xiàn)在以下兒個(gè)方面。

作為檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的診斷試劑，單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純

度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫分

析、免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)。并且單克隆抗體的應(yīng)用，很大程

度上促進(jìn)了商品化試劑盒的發(fā)展。

單克隆抗體對(duì)抗原的識(shí)別，與多克隆抗體有很大的不同。不同試

劑盒因使用的單克隆抗體不同，識(shí)別抗原的位點(diǎn)不同，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果

有一定差異。標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題還需要進(jìn)一步研究。

單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個(gè)

惰性的固相基質(zhì)(如Speharose2B^4B、6B等)上,并制備成層析

柱。當(dāng)樣品流經(jīng)層析柱時(shí)，待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生

特異性結(jié)合，其余成分不能與之結(jié)合。將層析柱充分洗脫后，改變洗

脫液的離子強(qiáng)度或pH,欲分離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可

得到欲純化的抗原。

將針對(duì)某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質(zhì)連接，

利用單克隆抗體的導(dǎo)向作用，將藥物或放療物質(zhì)攜帶至靶器官，直接

殺傷靶細(xì)胞，稱為腫瘤導(dǎo)向治療。將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接,

注入患者體內(nèi)可進(jìn)行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。單克隆抗體主

要為鼠源性抗體，異種動(dòng)物血清可引起人體過(guò)敏反應(yīng)。制備人-人單

克隆抗體或人源化抗體更為重要，但此方面仍未取得明顯進(jìn)展。

(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發(fā)生細(xì)胞

株的基因突變，就可以不斷地生產(chǎn)高特異性、高均一性的抗體。

(3)由于可能得到“無(wú)限量”的均一性抗體，所以適用于以標(biāo)記

抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法，如IRMA和ELISA等。

(4)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學(xué)功能，可用于體內(nèi)

的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療。

(1)單克隆抗體固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用

范圍。由于單克隆抗體不能進(jìn)行沉淀和凝集反應(yīng)，所以很多檢測(cè)方法

不能用單克隆抗體完成。

(3)制備技術(shù)復(fù)雜，而且費(fèi)時(shí)費(fèi)工，所以單克隆抗體的價(jià)格也較

局O

單克隆抗體藥物的發(fā)展起源于1975年，雜交瘤技術(shù)的問(wèn)世使大

量制備均一的鼠源單克隆抗體成為可能。1986年第一個(gè)抗移植后免

疫排斥反應(yīng)的鼠源單克隆抗體muromonab-CD3(0KT3),經(jīng)美國(guó)食品藥

品監(jiān)督管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)批準(zhǔn)上市,

但是來(lái)源于鼠源淋巴細(xì)胞雜交瘤的抗體被人的免疫系統(tǒng)識(shí)別，會(huì)引起

嚴(yán)重的人抗鼠抗體反應(yīng)(humananti-mouseantibody,HAMA),不僅

使治療性單抗半衰期變短，有時(shí)還會(huì)引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)。

單克隆抗體藥物的發(fā)展在1988年到1993年間陷入低谷。隨著重

組DNA技術(shù)的發(fā)展，各種抗體人緣化技術(shù)迅速發(fā)展，單克隆抗體藥物

經(jīng)歷了人鼠嵌合單抗、人源化單抗階段。隨后出現(xiàn)的噬菌體展示文庫(kù)

技術(shù)和轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)，使全人源單抗的產(chǎn)生成為可能，2002年第

一個(gè)全人源抗體阿達(dá)木單抗上市。

單克隆抗體在醫(yī)藥治療上有廣泛的前景，被用于治療腫瘤、自身

免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反應(yīng)等多種疾病。阿達(dá)木用于緩

解抗風(fēng)濕性藥物(DMARD)治療無(wú)效的結(jié)構(gòu)性損傷的中至重度類風(fēng)濕關(guān)

節(jié)炎(RA)。

鼠源性單克隆抗體、嵌合性單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全

人源單克隆抗體。

全人源單克隆抗體：其抗體的可變區(qū)和恒定區(qū)都是人源的，去除

免疫原性和毒副作用。

人雜交瘤技術(shù)、EBV轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞技術(shù)、噬菌體顯示技術(shù)

(phagedisplay)、轉(zhuǎn)基因小鼠抗體制備技術(shù)(transgenicmouse)

和單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)等。

由人源化和全人源抗體制備的人源化和全人源抗體藥物因其具

有高親和力、高特異性、毒副作用小的特點(diǎn)，克服了動(dòng)物源抗體及嵌

合抗體的各種缺點(diǎn)，已經(jīng)成為了治療性抗體藥物發(fā)展的必然趨勢(shì)。

阿達(dá)木單抗作為生物單抗藥物，在療效和技術(shù)門(mén)檻方面難以挑戰(zhàn);

越來(lái)越多的醫(yī)生在治療類風(fēng)濕時(shí)首選皮下注射給藥的劑型，不需要注

射過(guò)程和費(fèi)用，雖然與依那西普的對(duì)比臨床試驗(yàn)還未出來(lái)，但是人們

普遍認(rèn)為阿達(dá)木單抗的療效更好。

2010年全球治療用單抗藥物的銷售總額達(dá)到440億美元，如果

加上100億美元的單抗診斷和研究試劑，羊抗藥物的市場(chǎng)總量達(dá)到

550億美元。2011年單抗藥物的市場(chǎng)總量已經(jīng)達(dá)到628億美元。全球

單克隆抗體藥依舊會(huì)保持較高的增長(zhǎng)率。到