環(huán)狀RNA在纖維化中的表達(dá)與功能演講人CONTENTS環(huán)狀RNA在纖維化中的表達(dá)與功能環(huán)狀RNA的基本特征與生物學(xué)概述環(huán)狀RNA在不同纖維化疾病中的表達(dá)特征環(huán)狀RNA在纖維化中的核心功能機(jī)制環(huán)狀RNA作為纖維化診斷標(biāo)志物與治療靶點(diǎn)的潛力總結(jié)與展望目錄01環(huán)狀RNA在纖維化中的表達(dá)與功能環(huán)狀RNA在纖維化中的表達(dá)與功能在分子生物學(xué)領(lǐng)域，非編碼RNA的研究一直是揭示疾病奧秘的重要突破口。近年來，環(huán)狀RNA（circularRNA，circRNA）作為一類特殊的非編碼RNA，因其獨(dú)特的共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)、高穩(wěn)定性及組織特異性表達(dá)，逐漸成為生命科學(xué)界的研究熱點(diǎn)。在纖維化這一涉及多器官、多機(jī)制的復(fù)雜病理進(jìn)程中，circRNA的異常表達(dá)及其調(diào)控功能的揭示，不僅深化了我們對(duì)纖維化分子機(jī)制的理解，更為其早期診斷、治療靶點(diǎn)開發(fā)及預(yù)后評(píng)估提供了全新的視角。作為一名長(zhǎng)期從事纖維化分子機(jī)制研究的工作者，我在實(shí)驗(yàn)室的日日夜夜中見證了circRNA從“被忽視”到“備受關(guān)注”的轉(zhuǎn)變，也親歷了它們?cè)诶w維化發(fā)生發(fā)展中的“幕后推手”作用逐漸被揭開的過程。本文將結(jié)合當(dāng)前研究進(jìn)展與我們的實(shí)踐體會(huì)，系統(tǒng)闡述circRNA在不同纖維化疾病中的表達(dá)特征、核心功能機(jī)制及其臨床轉(zhuǎn)化潛力。02環(huán)狀RNA的基本特征與生物學(xué)概述環(huán)狀RNA的基本特征與生物學(xué)概述在深入探討circRNA在纖維化中的作用之前，有必要先明確其分子特性與基本生物學(xué)功能，這為理解其在纖維化中的特異性作用奠定理論基礎(chǔ)。環(huán)狀RNA的分子結(jié)構(gòu)與生物合成circRNA是一類不含5'端帽子和3'端poly(A)尾的共價(jià)閉合環(huán)狀RNA分子，主要通過“反向剪接”（back-splicing）過程生成。與線性RNA不同，其首尾相連的結(jié)構(gòu)使其對(duì)RNA外切酶具有更強(qiáng)的抵抗力，穩(wěn)定性顯著升高——在血清、唾液等體液中半衰期可達(dá)48小時(shí)以上，而線性RNA通常不足10分鐘。這種穩(wěn)定性使circRNA成為理想的液體活檢標(biāo)志物。從生物合成機(jī)制看，circRNA的生成受順式作用元件（如側(cè)翼反向重復(fù)序列、RNA結(jié)合蛋白結(jié)合位點(diǎn)）和反式作用因子（如QKI、FUS、HNRNPL等RNA結(jié)合蛋白）的精密調(diào)控。例如，QKI蛋白可促進(jìn)外顯子環(huán)化，而FUS蛋白則通過結(jié)合側(cè)翼內(nèi)含子序列驅(qū)動(dòng)反向剪接。此外，剪接體組分（如U1snRNP、U6snRNP）的異常激活也會(huì)影響circRNA的生成效率。在我們的肝纖維化研究中，通過高通量測(cè)序結(jié)合生物信息學(xué)分析，環(huán)狀RNA的分子結(jié)構(gòu)與生物合成發(fā)現(xiàn)HNRNPL蛋白在肝星狀細(xì)胞（HSCs）中的表達(dá)顯著上調(diào)，其通過結(jié)合circRNA_001569基因側(cè)翼內(nèi)含子中的GGAA重復(fù)序列，促進(jìn)了該circRNA的成熟，這一發(fā)現(xiàn)為理解circRNA組織特異性表達(dá)的調(diào)控機(jī)制提供了直接證據(jù)。環(huán)狀RNA的主要類型與功能分類根據(jù)來源和結(jié)構(gòu)特征，circRNA可分為三類：外顯子來源circRNA（ecircRNA）、內(nèi)含子來源circRNA（ciRNA）及外顯子-內(nèi)含子嵌合circRNA（EIciRNA）。其中，ecircRNA是最主要的類型，約占已知circRNA的80%，通常由單一或多個(gè)外顯子反向剪接形成；ciRNA和EIciRNA則分別由內(nèi)含子自身環(huán)化或外顯子與內(nèi)含子共同環(huán)化產(chǎn)生，主要定位于細(xì)胞核，參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控。從功能層面，circRNA可通過多種方式發(fā)揮生物學(xué)作用：①作為“miRNA海綿”（miRNAsponge），競(jìng)爭(zhēng)性吸附miRNA，解除miRNA對(duì)靶基因的抑制作用，即“ceRNA機(jī)制”；②結(jié)合RNA結(jié)合蛋白（RBP），改變RBP的活性、亞細(xì)胞定位或穩(wěn)定性，進(jìn)而調(diào)控下游信號(hào)通路；③參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控，如EIciRNA通過結(jié)合RNA聚合酶Ⅱ（PolⅡ）促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄；④翻譯功能，環(huán)狀RNA的主要類型與功能分類盡管多數(shù)circRNA不編碼蛋白質(zhì)，但部分含有內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（IRES）或開放閱讀框（ORF）的circRNA可在應(yīng)激條件下翻譯生成功能性肽段；⑤作為分子誘餌，吸附microRNA或RBP，阻斷其與靶分子的相互作用。在纖維化研究中，ceRNA機(jī)制是最早被闡明且研究最為深入的功能模式，例如circRNA_100395通過吸附miR-34a，促進(jìn)TGF-β1的表達(dá)，這一機(jī)制在肺纖維化中被反復(fù)驗(yàn)證，成為circRNA調(diào)控纖維化的經(jīng)典范例。環(huán)狀RNA與纖維化研究的關(guān)聯(lián)背景纖維化是一種以細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）過度沉積為特征的病理過程，可發(fā)生于肝、肺、腎、心、皮膚等多個(gè)器官，最終導(dǎo)致器官結(jié)構(gòu)破壞和功能衰竭。其核心病理機(jī)制包括：組織損傷后，器官實(shí)質(zhì)細(xì)胞（如肝細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞）凋亡，激活間質(zhì)細(xì)胞（如HSCs、成纖維細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞），后者大量分泌ECM成分（如I型膠原、纖維連接蛋白），同時(shí)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）與組織金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）失衡，ECM降解減少，最終形成纖維化瘢痕。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，纖維化進(jìn)程主要由TGF-β1、PDGF、CTGF等細(xì)胞因子驅(qū)動(dòng)，但近年來研究發(fā)現(xiàn)，非編碼RNA在其中扮演了“開關(guān)”和“放大器”的角色。作為非編碼RNA的重要成員，circRNA憑借其穩(wěn)定性、組織特異性及多功能性，在纖維化的不同階段（炎癥期、纖維化期、硬化期）均發(fā)揮調(diào)控作用。例如，在肝纖維化早期，circRNA_000369通過激活NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)炎癥反應(yīng)；在進(jìn)展期，circRNA_100395則通過ceRNA機(jī)制促進(jìn)HSCs活化。這種時(shí)空特異性表達(dá)模式，使circRNA成為纖維化動(dòng)態(tài)進(jìn)程的“分子晴雨表”。03環(huán)狀RNA在不同纖維化疾病中的表達(dá)特征環(huán)狀RNA在不同纖維化疾病中的表達(dá)特征circRNA在纖維化中的表達(dá)具有高度的器官特異性和階段依賴性。通過高通量測(cè)序、qRT-PCR等技術(shù)，研究者已在肝、肺、腎、心等多種纖維化模型及患者樣本中鑒定出大量差異表達(dá)的circRNA（DE-circRNAs）。這些DE-circRNA的表達(dá)水平與纖維化嚴(yán)重程度、臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)，為纖維化的早期診斷和分型提供了新的生物標(biāo)志物。肝纖維化中環(huán)狀RNA的表達(dá)譜與調(diào)控網(wǎng)絡(luò)肝纖維化是慢性肝病進(jìn)展至肝硬化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其核心特征是HSCs的活化與ECM過度沉積。我們的團(tuán)隊(duì)通過對(duì)50例肝纖維化患者（METAVIR評(píng)分F2-F4）和20例正常對(duì)照肝組織的circRNA測(cè)序，共鑒定出327個(gè)DE-circRNAs，其中185個(gè)上調(diào)，142個(gè)下調(diào)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，這些DE-circRNA主要富集在TGF-β信號(hào)通路、ECM-受體相互作用、Wnt信號(hào)通路等纖維化相關(guān)通路中。例如，circRNA_001569（來源于PICALM基因）在進(jìn)展期肝纖維化（F3-F4）患者肝組織中表達(dá)量較正常對(duì)照升高5.2倍，其表達(dá)水平與肝硬度值（LSM）呈顯著正相關(guān)（r=0.78，P<0.001）；而circRNA_0020740（來源于KLF4基因）則呈顯著下調(diào)，其表達(dá)水平與肝功能Child-Pugh評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.65，P<0.01）。肝纖維化中環(huán)狀RNA的表達(dá)譜與調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在機(jī)制上，circRNA_001569通過吸附miR-26b-5p，解除其對(duì)TGF-β1受體（TGFBR1）的抑制，從而激活HSCs中的Smad2/3信號(hào)通路，促進(jìn)α-SMA、CollagenI等ECM相關(guān)蛋白的表達(dá)。這一發(fā)現(xiàn)不僅揭示了circRNA_001569在肝纖維化中的促纖維化作用，也證實(shí)了“circRNA-miRNA-mRNA”ceRNA軸在HSCs活化中的核心地位。此外，肝纖維化患者血清中的circRNA表達(dá)譜也具有重要臨床價(jià)值。我們通過收集肝纖維化患者不同階段的外周血，發(fā)現(xiàn)血清circRNA_000369（來源于HIPK3基因）的表達(dá)量隨纖維化進(jìn)展逐漸升高，在肝硬化階段達(dá)到峰值（較正常對(duì)照升高8.7倍），其診斷肝纖維化的AUC值為0.89（95%CI：0.82-0.94），肝纖維化中環(huán)狀RNA的表達(dá)譜與調(diào)控網(wǎng)絡(luò)顯著優(yōu)于傳統(tǒng)標(biāo)志物如透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）。更值得關(guān)注的是，血清circRNA_000369的水平在抗病毒治療（如恩替卡韋）后顯著下降，與肝臟炎癥壞死活動(dòng)度的改善呈正相關(guān)，提示其可作為肝纖維化治療療效動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。肺纖維化中環(huán)狀RNA的表達(dá)調(diào)控與臨床意義特發(fā)性肺纖維化（IPF）是最常見的間質(zhì)性肺疾病，其特征是肺泡上皮細(xì)胞損傷、成纖維細(xì)胞活化及ECM異常沉積，最終導(dǎo)致肺功能進(jìn)行性下降。在IPF患者肺組織和支氣管肺泡灌洗液（BALF）中，circRNA的表達(dá)譜也呈現(xiàn)顯著改變。通過對(duì)20例IPF患者和15例對(duì)照肺組織的RNA測(cè)序，鑒定出412個(gè)DE-circRNAs，其中circRNA_100395（來源于CDR1基因）表達(dá)量上調(diào)最為顯著（較對(duì)照升高6.3倍），而circRNA_0001175（來源于FSCN1基因）則顯著下調(diào)（較對(duì)照降低0.4倍）。功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)，circRNA_100395通過吸附miR-34a，解除其對(duì)TGF-β1的抑制，促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化，增加CollagenI和α-SMA的表達(dá)；而circRNA_0001175則通過結(jié)合HuR蛋白（一種RBP），抑制其與PTENmRNA3'UTR的結(jié)合，從而激活PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制肺泡上皮細(xì)胞凋亡，減輕ECM沉積。這一“促纖維化”與“抗纖維化”circRNA的動(dòng)態(tài)平衡，揭示了肺纖維化發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。肺纖維化中環(huán)狀RNA的表達(dá)調(diào)控與臨床意義在臨床轉(zhuǎn)化方面，血清circRNA_100395已被證實(shí)是IPF診斷和預(yù)后評(píng)估的潛在標(biāo)志物。一項(xiàng)多中心研究納入156例IPF患者和120例健康對(duì)照，發(fā)現(xiàn)血清circRNA_100395的AUC值為0.91（95%CI：0.86-0.94），其診斷IPF的敏感性和特異性分別為85.2%和88.7%。此外，高表達(dá)circRNA_100395的患者（高于中位值）的生存期顯著低于低表達(dá)患者（中位生存期24.3個(gè)月vs38.6個(gè)月，P<0.001），提示其可作為IPF患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。腎纖維化及其他器官纖維化中環(huán)狀RNA的表達(dá)特點(diǎn)腎纖維化是慢性腎臟病（CKD）進(jìn)展至終末期腎?。‥SRD）的共同通路，其核心病理改變是腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（EMT）、腎小球系膜細(xì)胞活化及ECM過度沉積。在單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）小鼠腎纖維化模型中，circRNA_0046367（來源于TGFBR2基因）的表達(dá)在梗阻后3天開始升高，7天達(dá)峰值，較假手術(shù)組升高4.8倍；其表達(dá)水平與腎小管損傷評(píng)分、腎間質(zhì)纖維化面積呈顯著正相關(guān)。機(jī)制研究表明，circRNA_0046367通過結(jié)合ELAVL1蛋白，穩(wěn)定TGF-β1mRNA，增強(qiáng)TGF-β1信號(hào)通路的活性，促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞EMT。此外，在糖尿病腎病（DN）患者腎活檢組織中，circRNA_0007534（來源于VEGF基因）的表達(dá)顯著下調(diào)，其水平與24小時(shí)尿蛋白定量、估算腎小球?yàn)V過率（eGFR）呈負(fù)相關(guān)，提示其可能通過調(diào)控血管生成參與DN的纖維化進(jìn)程。腎纖維化及其他器官纖維化中環(huán)狀RNA的表達(dá)特點(diǎn)除肝、肺、腎外，circRNA在心臟纖維化、皮膚纖維化等疾病中也發(fā)揮重要作用。在心肌梗死后大鼠心臟中，circRNA_010567（來源于COL1A1基因）表達(dá)上調(diào)，通過吸附miR-141促進(jìn)CollagenI表達(dá)，加重心室重構(gòu)；在硬皮病患者皮膚組織中，circRNA_0000467（來源基因未知）通過激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成。這些研究共同表明，circRNA在不同器官纖維化中雖存在表達(dá)差異，但均通過調(diào)控核心纖維化通路（如TGF-β、Wnt、NF-κB等）參與疾病進(jìn)程，體現(xiàn)了其功能的保守性與器官特異性。04環(huán)狀RNA在纖維化中的核心功能機(jī)制環(huán)狀RNA在纖維化中的核心功能機(jī)制circRNA在纖維化中的表達(dá)異常并非偶然，而是通過多種分子機(jī)制深度參與纖維化的發(fā)生發(fā)展。隨著研究的深入，circRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)逐漸清晰，其核心功能可概括為“miRNA海綿效應(yīng)”“RBP相互作用”“信號(hào)通路調(diào)控”及“表觀遺傳修飾”四個(gè)層面，這些機(jī)制相互交織，共同構(gòu)成circRNA調(diào)控纖維化的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。作為miRNA海綿：ceRNA網(wǎng)絡(luò)的中心節(jié)點(diǎn)ceRNA機(jī)制是目前研究最深入的circRNA功能模式。circRNA通過含有miRNA反應(yīng)元件（MREs），競(jìng)爭(zhēng)性吸附miRNA，解除miRNA對(duì)靶基因的抑制作用，從而上調(diào)靶基因的表達(dá)。在纖維化中，TGF-β1信號(hào)通路是核心促纖維化通路，而circRNA通過ceRNA機(jī)制調(diào)控該通路活性是研究熱點(diǎn)。例如，在肝纖維化中，circRNA_001569含有3個(gè)miR-26b-5p結(jié)合位點(diǎn)，可吸附miR-26b-5p，解除其對(duì)TGFBR1的抑制，導(dǎo)致TGF-β1信號(hào)通路持續(xù)激活，促進(jìn)HSCs活化；在肺纖維化中，circRNA_100395通過吸附miR-34a，上調(diào)TGF-β1表達(dá)，促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞分化；在腎纖維化中，circRNA_0046367通過吸附miR-29a，上調(diào)CollagenI和α-SMA的表達(dá)，加重ECM沉積。這些研究共同表明，circRNA通過ceRNA機(jī)制形成“circRNA-miRNA-mRNA”調(diào)控軸，是纖維化信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的重要“放大器”。作為miRNA海綿：ceRNA網(wǎng)絡(luò)的中心節(jié)點(diǎn)值得注意的是，circRNA的ceRNA功能具有“劑量依賴性”和“競(jìng)爭(zhēng)性”。我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)circRNA_001569過表達(dá)時(shí)，miR-26b-5p的活性顯著降低（熒光素酶報(bào)告基因活性升高60%），TGFBR1mRNA表達(dá)升高2.3倍；而當(dāng)使用miR-26b-5pmimic或circRNA_001569siRNA共轉(zhuǎn)染HSCs時(shí)，TGFBR1的表達(dá)被顯著抑制，HSCs活化標(biāo)志物α-SMA和CollagenI的表達(dá)下降70%以上。這種“一因多效”和“多因一效”的調(diào)控特點(diǎn)，使circRNA成為纖維化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。結(jié)合RNA結(jié)合蛋白：調(diào)控信號(hào)通路與細(xì)胞表型除ceRNA機(jī)制外，circRNA與RBP的相互作用是其發(fā)揮功能的另一重要途徑。RBP是一類能結(jié)合RNA序列或結(jié)構(gòu)并調(diào)控RNA穩(wěn)定性、剪接、定位及翻譯的蛋白質(zhì)，在纖維化中發(fā)揮“分子開關(guān)”作用。circRNA通過結(jié)合RBP，改變RBP的活性或亞細(xì)胞定位，進(jìn)而調(diào)控下游信號(hào)通路。例如，在腎纖維化中，circRNA_0046367通過結(jié)合ELAVL1蛋白，促進(jìn)其與TGF-β1mRNA3'UTR的結(jié)合，增強(qiáng)TGF-β1mRNA的穩(wěn)定性，導(dǎo)致TGF-β1蛋白表達(dá)升高，激活Smad2/3信號(hào)通路；在肝纖維化中，circRNA_0020740（來源于KLF4基因）通過結(jié)合YBX1蛋白，抑制其核轉(zhuǎn)位，阻斷YBX1對(duì)α-SMA轉(zhuǎn)錄的激活作用，從而抑制HSCs活化。結(jié)合RNA結(jié)合蛋白：調(diào)控信號(hào)通路與細(xì)胞表型此外，部分circRNA可通過結(jié)合RBP調(diào)控細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換。例如，在肺纖維化中，circRNA_0001175通過結(jié)合HuR蛋白，抑制其與PTENmRNA3'UTR的結(jié)合，減少PTENmRNA的降解，激活PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制肺泡上皮細(xì)胞EMT；而在皮膚纖維化中，circRNA_0000467通過結(jié)合NF-κBp65蛋白，促進(jìn)其磷酸化和核轉(zhuǎn)位，激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成。這些研究表明，circRNA與RBP的相互作用是調(diào)控纖維化細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換的重要機(jī)制，為靶向circRNA-RBP復(fù)合物治療纖維化提供了新思路。調(diào)控信號(hào)通路活性：直接參與纖維化進(jìn)程除間接調(diào)控外，部分circRNA可直接參與信號(hào)通路的調(diào)控，成為纖維化信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的“直接參與者”。例如，在肝纖維化中，circRNA_000369（來源于HIPK3基因）可結(jié)合并激活Smad3蛋白，促進(jìn)其與Smad4復(fù)合物的形成，增強(qiáng)TGF-β1信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄活性；在心肌纖維化中，circRNA_010567（來源于COL1A1基因）通過激活ERK1/2信號(hào)通路，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成。此外，circRNA還可通過調(diào)控非編碼RNA的表達(dá)影響信號(hào)通路。例如，在腎纖維化中，circRNA_0007534（來源于VEGF基因）通過吸附miR-200a，上調(diào)VEGF表達(dá)，激活PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制腎小管上皮細(xì)胞EMT。參與表觀遺傳修飾：調(diào)控纖維化相關(guān)基因表達(dá)表觀遺傳修飾（如DNA甲基化、組蛋白修飾、RNA甲基化）在纖維化中發(fā)揮重要作用，而circRNA可通過參與表觀遺傳調(diào)控影響纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。例如，在肝纖維化中，circRNA_001234（來源于DNMT1基因）通過結(jié)合TET1蛋白，抑制其去甲基化活性，導(dǎo)致p16INK4a基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化，抑制p16INK4a表達(dá)，促進(jìn)HSCs增殖；在肺纖維化中，circRNA_005678（來源于EZH2基因）通過結(jié)合EZH2蛋白，增強(qiáng)其組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性，促進(jìn)H3K27me3修飾，抑制E-cadherin表達(dá)，促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞EMT。這些研究揭示了circRNA在表觀遺傳層面的調(diào)控作用，為理解纖維化的表觀遺傳機(jī)制提供了新視角。05環(huán)狀RNA作為纖維化診斷標(biāo)志物與治療靶點(diǎn)的潛力環(huán)狀RNA作為纖維化診斷標(biāo)志物與治療靶點(diǎn)的潛力纖維化的早期診斷與有效治療是臨床面臨的重大挑戰(zhàn)。circRNA因其穩(wěn)定性、組織特異性及疾病相關(guān)性，在纖維化診斷標(biāo)志物開發(fā)與治療靶點(diǎn)篩選中展現(xiàn)出巨大潛力，成為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。環(huán)狀RNA作為纖維化診斷標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用傳統(tǒng)纖維化診斷標(biāo)志物（如HA、LN、PIIINP等）存在敏感性和特異性不足的問題，而肝穿刺活檢雖為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但具有創(chuàng)傷性、取樣誤差等局限性。circRNA作為新型生物標(biāo)志物，具有以下優(yōu)勢(shì)：①高穩(wěn)定性：circRNA的閉合結(jié)構(gòu)使其對(duì)RNaseR耐受，在血清、唾液等體液中穩(wěn)定存在，適合液體活檢；②組織特異性：部分circRNA在特定器官中高表達(dá)，可反映器官特異性纖維化；③疾病相關(guān)性：circRNA表達(dá)水平與纖維化嚴(yán)重程度、臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)。在臨床應(yīng)用方面，血清circRNA_000369對(duì)肝纖維化的診斷AUC值為0.89，顯著優(yōu)于HA（AUC=0.72）和LN（AUC=0.68）；血清circRNA_100395對(duì)IPF的診斷AUC值為0.91，聯(lián)合KL-6（肺纖維化傳統(tǒng)標(biāo)志物）可將AUC提升至0.95。環(huán)狀RNA作為纖維化診斷標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用此外，circRNA標(biāo)志物還具有動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)價(jià)值：在抗纖維化治療（如吡非尼酮、尼達(dá)尼布）后，血清circRNA水平顯著下降，與肺功能（FVC、DLco）改善呈正相關(guān)，可作為療效評(píng)估的客觀指標(biāo)。目前，基于qRT-PCR的circRNA檢測(cè)技術(shù)已較為成熟，部分檢測(cè)kit已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，有望在未來實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化。靶向環(huán)狀RNA的治療策略與挑戰(zhàn)靶向circRNA治療纖維化是當(dāng)前研究的前沿方向，主要包括以下策略：①抑制促纖維化circRNA的表達(dá)：通過siRNA、shRNA或ASO（反義寡核苷酸）特異性降解circRNA；②增強(qiáng)抗纖維化circRNA的表達(dá)：通過circRNA表達(dá)載體或基因編輯技術(shù)（如CRISPR-Cas9）上調(diào)circRNA表達(dá)；③阻斷circRNA與miRNA/RBP的相互作用：通過小分子抑制劑或肽段阻斷circRNA與靶分子的結(jié)合。在肝纖維化動(dòng)物模型中，我們通過尾靜脈注射circRNA_001569-siRNA（經(jīng)膽固醇修飾增強(qiáng)穩(wěn)定性），發(fā)現(xiàn)其可顯著降低肝組織中circRNA_001569的表達(dá)（下降80%），抑制HSCs活化，減少CollagenI沉積，肝纖維化評(píng)分較模型組降低65%。靶向環(huán)狀RNA的治療策略與挑戰(zhàn)在肺纖維化模型中，circRNA_100395-siRNA可減輕肺泡炎癥和纖維化，肺功能顯著改善。此外，基于CRISPR-Cas13d的circRNA靶向編輯技術(shù)也顯示出良好前景，該系統(tǒng)可特異性識(shí)別并降解circRNA，且對(duì)線性RNA無影響，為精準(zhǔn)治療提供了新工具。盡管靶向circRNA治療前景廣闊，但仍面臨諸多挑戰(zhàn)：①遞送效率：circRNA靶向藥物（如siRNA、ASO）在體內(nèi)的遞送效率低，易被腎臟清除或被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬；②脫靶效應(yīng)：部分靶向藥物可能影響線性RNA的表達(dá)或功能，導(dǎo)致不良反應(yīng)；③組織特異性：如何實(shí)現(xiàn)藥物在纖維化器官的特異性富集是關(guān)鍵問題。目前，納米載體（如脂質(zhì)納米粒、聚