2025年大學(xué)生物（細胞培養(yǎng)實驗）試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題共30分）答題要求：每題只有一個正確答案，請將正確答案的序號填在括號內(nèi)。(總共10題，每題3分)w1.細胞培養(yǎng)中，常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是（）A.DMEMB.RPMI1640C.MEMD.以上都是w2.細胞培養(yǎng)時，最適宜的二氧化碳濃度一般為（）A.1%B.3%C.5%D.10%w3.用于細胞培養(yǎng)的血清，通常采用（）A.胎牛血清B.小牛血清C.馬血清D.人血清w4.細胞培養(yǎng)過程中，防止微生物污染的常用抗生素是（）A.青霉素B.鏈霉素C.慶大霉素D.以上都是w5.細胞傳代培養(yǎng)時，一般當(dāng)細胞長滿培養(yǎng)瓶底的（）時進行傳代。A.50%B.70%C.80%D.90%w6.細胞凍存時，常用的保護劑是（）A.DMSOB.甘油C.乙醇D.以上都是w7.細胞復(fù)蘇時，正確的操作順序是（）A.37℃水浴快速解凍，離心棄上清，加培養(yǎng)液重懸接種B.4℃水浴緩慢解凍，離心棄上清，加培養(yǎng)液重懸接種C.直接將凍存管放入培養(yǎng)箱解凍，然后接種D.先在室溫放置1小時解凍，再離心接種w8.細胞培養(yǎng)箱的溫度一般設(shè)置為（）A.常溫B.30℃C.37℃D.42℃w9.細胞培養(yǎng)用的水通常要求是（）A.蒸餾水B.去離子水C.雙蒸水D.自來水w10.細胞培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)細胞生長緩慢，可能的原因不包括（）A.血清質(zhì)量差B.培養(yǎng)溫度不合適C.細胞密度過高D.培養(yǎng)液pH值合適第II卷（非選擇題共70分）w11.（10分）簡述細胞培養(yǎng)的基本流程。w12.（15分）細胞培養(yǎng)過程中，如何進行無菌操作？w13.（15分）請說明細胞傳代培養(yǎng)的步驟及注意事項。材料題：某實驗室在進行細胞培養(yǎng)實驗時，使用了DMEM培養(yǎng)基、10%胎牛血清、青霉素和鏈霉素。在培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)細胞生長狀態(tài)不佳，培養(yǎng)液變渾濁。w14.（15分）請分析細胞生長狀態(tài)不佳且培養(yǎng)液變渾濁可能的原因，并提出相應(yīng)的解決措施。w15.（15分）若要對培養(yǎng)的細胞進行凍存，簡述凍存的具體操作及后續(xù)復(fù)蘇的要點。答案：w1.D；w2.C；w3.A；w4.D；w5.C；w6.A；w7.A；w8.C；w9.C；w10.D；w11.細胞培養(yǎng)基本流程：準(zhǔn)備細胞培養(yǎng)所需物品，如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基、血清、抗生素等。選擇合適的細胞系，復(fù)蘇細胞。將復(fù)蘇后的細胞接種到含合適培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。定期觀察細胞生長狀態(tài)，當(dāng)細胞長滿進行傳代培養(yǎng)。如需長期保存細胞，則進行凍存。w12.細胞培養(yǎng)無菌操作：在超凈工作臺操作，提前紫外燈照射消毒。實驗人員穿戴無菌工作服、口罩、手套。操作前用酒精擦拭雙手和臺面。打開的試劑瓶及時蓋好，避免長時間暴露。接種工具如吸管、移液器頭要提前滅菌，操作過程中避免交叉污染。培養(yǎng)細胞的器皿要提前滅菌處理。w13.細胞傳代培養(yǎng)步驟：在顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，當(dāng)細胞長滿培養(yǎng)瓶底約80%時進行傳代。吸棄原培養(yǎng)液，用PBS沖洗細胞1-2次。加入適量胰蛋白酶消化液，覆蓋細胞，放入培養(yǎng)箱或在室溫下消化，顯微鏡下觀察細胞變圓、間隙增大時，立即吸棄消化液。加入含血清的培養(yǎng)液終止消化，用吸管輕輕吹打細胞，使其分散成單細胞懸液。按合適比例接種到新的培養(yǎng)瓶中，補充新鮮培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。注意事項：嚴格無菌操作，消化時間不宜過長，吹打細胞力度要適中，避免損傷細胞，接種密度要合適。w14.可能原因及解決措施：污染，可能是操作過程中無菌不嚴格，導(dǎo)致微生物進入培養(yǎng)液。解決措施：重新嚴格按照無菌操作要求進行實驗，更換培養(yǎng)液和培養(yǎng)器皿，對污染的細胞進行丟棄。血清質(zhì)量問題，血清可能存在質(zhì)量差異或變質(zhì)。解決措施：更換血清品牌或批次，重新復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)。細胞老化，傳代不及時導(dǎo)致細胞老化。解決措施：按照合適的傳代時間及時傳代細胞。w15.凍存操作：配制凍存液，一般為含10%-20%DMSO的培養(yǎng)液。將對數(shù)生長期的細胞消化制成單細胞懸液，離心棄上清。加入適量凍存液重懸細胞，調(diào)整細胞密度至合適濃度。將細胞懸液分裝到凍存管中，密封好。先將凍存管置于4℃冰箱1-2小時，再放入-20℃冰箱2小時，最后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱過夜或長期保存。復(fù)蘇要點：從-80℃冰箱取出凍