再生醫(yī)學(xué)RT-PCR檢測工程師崗位考試試卷及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.RT-PCR中“RT”代表？A.逆轉(zhuǎn)錄B.實(shí)時C.隨機(jī)引物D.放射性標(biāo)記答案：A2.以下哪種酶用于逆轉(zhuǎn)錄過程？A.Taq酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.限制性內(nèi)切酶D.DNA連接酶答案：B3.RT-PCR反應(yīng)體系不包括以下哪種成分？A.dNTPB.引物C.模板DNAD.緩沖液答案：C4.實(shí)時熒光定量RT-PCR常用的熒光化學(xué)物質(zhì)是？A.溴酚藍(lán)B.吖啶橙C.SYBRGreenD.伊紅答案：C5.逆轉(zhuǎn)錄的模板是？A.DNAB.mRNAC.tRNAD.rRNA答案：B6.RT-PCR可用于檢測？A.基因表達(dá)水平B.蛋白質(zhì)含量C.細(xì)胞活性D.細(xì)胞周期答案：A7.設(shè)計(jì)RT-PCR引物時，引物長度一般為？A.5-10bpB.15-30bpC.35-50bpD.50bp以上答案：B8.進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)時，RNA提取后首先要檢測？A.純度和濃度B.分子量C.堿基組成D.二級結(jié)構(gòu)答案：A9.以下哪種情況會導(dǎo)致RT-PCR結(jié)果假陽性？A.引物特異性差B.RNA降解C.模板量不足D.反應(yīng)溫度過低答案：A10.RT-PCR實(shí)驗(yàn)中，PCR循環(huán)的正確順序是？A.退火、變性、延伸B.變性、退火、延伸C.延伸、變性、退火D.變性、延伸、退火答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.RT-PCR實(shí)驗(yàn)中可能用到的儀器有？A.離心機(jī)B.移液器C.熒光定量PCR儀D.電泳儀答案：ABCD2.逆轉(zhuǎn)錄過程需要的條件有？A.模板mRNAB.dNTPC.逆轉(zhuǎn)錄酶D.引物答案：ABCD3.影響RT-PCR結(jié)果的因素包括？A.RNA質(zhì)量B.引物設(shè)計(jì)C.反應(yīng)體系D.循環(huán)參數(shù)答案：ABCD4.實(shí)時熒光定量RT-PCR的優(yōu)點(diǎn)有？A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.能準(zhǔn)確定量D.操作簡單答案：ABC5.RT-PCR可應(yīng)用于以下哪些領(lǐng)域？A.疾病診斷B.藥物研發(fā)C.基因功能研究D.細(xì)胞治療答案：ABCD6.提取RNA時常用的試劑有？A.Trizol試劑B.氯仿C.異丙醇D.乙醇答案：ABCD7.以下哪些是合格RNA的特征？A.A260/A280在1.8-2.0之間B.無明顯DNA污染C.完整性好D.有蛋白質(zhì)雜質(zhì)答案：ABC8.設(shè)計(jì)RT-PCR引物時需要考慮的因素有？A.引物特異性B.引物Tm值C.引物長度D.引物GC含量答案：ABCD9.RT-PCR實(shí)驗(yàn)中防止RNA降解的措施有？A.實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔B.操作在冰上進(jìn)行C.使用RNase抑制劑D.延長實(shí)驗(yàn)時間答案：ABC10.PCR反應(yīng)中，緩沖液的作用包括？A.提供合適的酸堿度B.提供離子強(qiáng)度C.穩(wěn)定酶活性D.作為模板答案：ABC三、判斷題（每題2分，共10題）1.RT-PCR只能檢測mRNA的表達(dá)。（×）2.逆轉(zhuǎn)錄酶可以將DNA逆轉(zhuǎn)錄成RNA。（×）3.實(shí)時熒光定量RT-PCR不需要引物。（×）4.RNA提取過程中，可以用手觸摸槍頭。（×）5.引物設(shè)計(jì)不合理可能導(dǎo)致RT-PCR擴(kuò)增失敗。（√）6.進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)時，樣本可以反復(fù)凍融。（×）7.SYBRGreen能與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光。（√）8.模板量越高，RT-PCR結(jié)果越好。（×）9.實(shí)驗(yàn)中使用的耗材都需要經(jīng)過RNase處理。（√）10.RT-PCR可以檢測基因的突變情況。（×）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述RT-PCR的基本原理。答案：先通過逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再以cDNA為模板，利用Taq酶等進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過引物特異性結(jié)合目標(biāo)基因序列，經(jīng)過變性、退火、延伸循環(huán)，實(shí)現(xiàn)對特定基因的擴(kuò)增，從而檢測基因表達(dá)水平。2.提取RNA時應(yīng)注意哪些問題？答案：要注意環(huán)境清潔，避免RNase污染；操作在低溫下進(jìn)行，防止RNA降解；使用的試劑和耗材需無RNase污染；準(zhǔn)確控制各試劑用量和操作時間，保證RNA的純度和完整性。3.實(shí)時熒光定量RT-PCR與普通RT-PCR的區(qū)別是什么？答案：普通RT-PCR只能定性或半定量分析基因表達(dá)，而實(shí)時熒光定量RT-PCR能在PCR擴(kuò)增過程中實(shí)時監(jiān)測熒光信號，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確定量初始模板量，靈敏度和準(zhǔn)確性更高。4.如何判斷RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性？答案：從RNA質(zhì)量判斷，如純度和完整性；看引物設(shè)計(jì)是否合理；觀察擴(kuò)增曲線和熔解曲線是否正常；與已知樣本對比；重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否一致，都能輔助判斷結(jié)果可靠性。五、討論題（每題5分，共4題）1.在再生醫(yī)學(xué)研究中，RT-PCR檢測工程師如何確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果對臨床治療有指導(dǎo)意義？答案：工程師要嚴(yán)格把控實(shí)驗(yàn)流程，從樣本采集到結(jié)果分析都要精準(zhǔn)操作。確保RNA高質(zhì)量提取，引物合理設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定。對結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確解讀，結(jié)合臨床癥狀和其他檢測數(shù)據(jù)綜合分析，為臨床治療方案調(diào)整、評估療效等提供可靠依據(jù)。2.當(dāng)RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常時，應(yīng)該從哪些方面進(jìn)行排查？答案：從樣本方面，檢查RNA質(zhì)量是否合格，有無降解或污染；試劑角度，查看引物、酶、dNTP等是否失效；儀器方面，確認(rèn)PCR儀等設(shè)備運(yùn)行是否正常，溫度等參數(shù)是否準(zhǔn)確；實(shí)驗(yàn)操作環(huán)節(jié)，回顧加樣、孵育等步驟有無失誤。3.對于再生醫(yī)學(xué)中不同類型細(xì)胞的RT-PCR檢測，實(shí)驗(yàn)條件需要做哪些調(diào)整？答案：不同細(xì)胞的RNA含量和特性有差異。對于RNA含量低的細(xì)胞，需優(yōu)化提取方法提高得率；不同細(xì)胞的基因表達(dá)譜不同，要根據(jù)目標(biāo)基因調(diào)整引物和反應(yīng)條件，如Tm值；細(xì)胞所處環(huán)境和狀態(tài)不同，可能需調(diào)整逆轉(zhuǎn)錄和PCR循環(huán)次數(shù)等。4.隨著技術(shù)發(fā)展，RT-PCR在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域可能有