ICS65.020.20

CCSB05

41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T2935—2025

大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

2025-08-08發(fā)布2025-11-07實施

河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB41/T2935—2025

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4生產(chǎn)要求...........................................................................1

5搖瓶菌種生產(chǎn).......................................................................2

6發(fā)酵罐菌種生產(chǎn).....................................................................3

7貯藏...............................................................................4

8留樣...............................................................................4

9建檔和追溯.........................................................................5

附錄A（資料性）大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)上常用配方.......................................6

附錄B（資料性）大球蓋菇液體菌種檢測方法及指標(biāo).......................................7

附錄C（資料性）大球蓋菇液體菌種放罐指標(biāo).............................................8

附錄D（資料性）大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)記錄事項.........................................9

參考文獻.............................................................................10

I

DB41/T2935—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。

本文件由河南省經(jīng)濟作物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（HN/TC31）歸口。

本文件起草單位：商丘市農(nóng)林科學(xué)院、河南金隆菇業(yè)有限公司、南陽市鄉(xiāng)村振興監(jiān)測中心、河南省

種業(yè)發(fā)展中心、商丘市鄉(xiāng)村產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心。

本文件主要起草人：黃海洋、利金站、王家才、郭蓓、孫喜云、楊密、張偉、侯磊、朱新利、曹依

靜、趙俠科、陳昆、黃新華。

II

DB41/T2935—2025

大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)要求、搖瓶菌種生產(chǎn)、發(fā)酵罐菌種生產(chǎn)、貯藏、留樣、建檔和

追溯的內(nèi)容。

本文件適用于大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T150.1壓力容器第1部分：通用要求

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB50073潔凈廠房設(shè)計規(guī)范

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1284食用菌菌種中雜菌及害蟲的檢驗

NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求

NY/T1935食用菌栽培基質(zhì)質(zhì)量安全要求

NY/T3819農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全追溯操作規(guī)程食用菌

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

液體菌種

培養(yǎng)基為液體狀態(tài)的菌種。

液體菌種發(fā)酵罐

食用菌液體菌種培養(yǎng)專用設(shè)備。

發(fā)酵罐空消

對尚未加水投料的空發(fā)酵罐進行高壓蒸汽滅菌。

發(fā)酵罐實消

對投料后的發(fā)酵罐進行高壓蒸汽滅菌。

4生產(chǎn)要求

1

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工作人員要求

應(yīng)具有一定的食用菌或微生物專業(yè)知識，掌握液體菌種生產(chǎn)等專業(yè)技能。

場地要求

選擇交通便利，通風(fēng)良好，遠離污染源的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)區(qū)域，應(yīng)符合NY/T528的要求。

廠房要求

4.3.1菌種生產(chǎn)場所

應(yīng)有各自隔離的原材料庫，配料分裝室（場）、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗室等；

設(shè)置搖瓶菌種和發(fā)酵罐液體菌種培養(yǎng)室。規(guī)模要配套，布局要合理，設(shè)計應(yīng)符合GB50073的要求。

4.3.2菌種生產(chǎn)車間

菌種檢驗室和母種制作室要有相應(yīng)的實驗檢測設(shè)備和滅菌設(shè)備；培養(yǎng)基配制室空間潔凈度要達到萬

級以上；接種間應(yīng)設(shè)置緩沖間和風(fēng)淋室，緩沖間入口處設(shè)置洗手、消毒和干手設(shè)施，設(shè)置與接種人數(shù)相

適應(yīng)的更衣室，放置封閉式廢物桶，安裝排氣管道或者排風(fēng)設(shè)備，門窗懸掛防蚊蠅紗網(wǎng)；培養(yǎng)室要有調(diào)

溫設(shè)備以滿足菌種生產(chǎn)的需要。

室內(nèi)墻壁和天花板應(yīng)具有防潮、防霉、防水等性能，且便于清潔；地面應(yīng)具有防水、防腐蝕、防滲

漏、防滑等性能，且便于清潔；需有1.0°～1.5°的排水坡度和良好的排水系統(tǒng)，排水溝采用圓弧式明

溝設(shè)計。

設(shè)備要求

應(yīng)有液體菌種發(fā)酵罐、空氣壓縮機、高效空氣過濾器、液體菌種接種器、高壓蒸汽滅菌鍋、蒸汽鍋

爐、超凈工作臺、恒溫搖床、恒溫培養(yǎng)箱、除濕設(shè)備、調(diào)溫設(shè)備、冰箱、普通光學(xué)顯微鏡、磁力攪拌機、

磅秤、天平、酸度計和備用電源等設(shè)備。其中，高效空氣過濾器對粒徑0.1μm～0.2μm粒子的捕集效

率在99.999%以上，且所有材質(zhì)應(yīng)耐126℃高溫滅菌；液體菌種發(fā)酵罐、高壓蒸汽滅菌鍋和蒸汽鍋爐應(yīng)

符合GB/T150.1的要求。

5搖瓶菌種生產(chǎn)

品種選擇

選擇來源可靠、種性清晰的大球蓋菇品種。菌種質(zhì)量應(yīng)符合NY/T528、NY/T1742的要求。

培養(yǎng)基制作

根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模選擇合適容量的培養(yǎng)容器；常用培養(yǎng)基配方見附錄A.1或購買成品培養(yǎng)基；制作培養(yǎng)

基時將原料溶解，分裝量不超過培養(yǎng)器容量的60%，瓶塞封口，并用牛皮紙包扎。培養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)符合NY/T528、

NY/T1935的要求，用水符合GB5749的要求。

滅菌

液體培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即滅菌。將分裝的搖瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)進行滅菌，鍋內(nèi)應(yīng)留有一定空

隙。當(dāng)壓力升至0.05MPa時，打開放氣閥排除冷空氣，如此重復(fù)2次。壓力升至0.11MPa～0.14MPa時，

恒壓維持30min～40min。滅菌結(jié)束后，自然燜鍋降壓，防止培養(yǎng)基外溢。

2

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接種

將冷卻后的培養(yǎng)基放置于消毒過的超凈工作臺上，嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)程，用經(jīng)酒精燈火焰灼燒并

冷卻后的接種針挑取3～4塊直徑為2mm～3mm的母種塊迅速轉(zhuǎn)接于待接種搖瓶培養(yǎng)基內(nèi)，接種結(jié)束后迅

速封口，及時貼好標(biāo)簽。

培養(yǎng)

培養(yǎng)室使用前2d，采用藥物或者紫外線燈進行消毒處理。將接好的搖瓶菌種放入25℃恒溫培養(yǎng)箱

中靜置培養(yǎng)1d，然后置于磁力攪拌器或恒溫搖床上培養(yǎng)，溫度控制在25℃，轉(zhuǎn)速140r/min～160r/min，

培養(yǎng)6d～7d。

檢驗

搖瓶菌種培養(yǎng)期間，從搖瓶菌種中取樣，分別在無菌瓊脂平板上培養(yǎng)，35℃～38℃培養(yǎng)18h～24h，

檢測有無細菌菌落生長；25℃～28℃倒置培養(yǎng)3d～5d，觀察有無霉菌、酵母菌等雜菌生長。每天檢查

和記錄，及時揀出不合格菌種，檢測項目和指標(biāo)見附錄B，檢驗方法應(yīng)符合NY/T1284的要求。

6發(fā)酵罐菌種生產(chǎn)

發(fā)酵罐檢查

選擇生產(chǎn)上常用的氣升式發(fā)酵罐，檢查其全部閥門及壓力表，要求完好、正常。重點檢查空氣過濾

器，濾芯要求無油污、料污、無破損，外殼內(nèi)外壁要求無污物、光亮潔凈。

發(fā)酵罐空消

使用前對發(fā)酵罐內(nèi)、外和全部閥門用流水沖洗，達到無死角、內(nèi)壁無任何殘留。通入蒸汽進行空消，

要求壓力達到0.11MPa～0.14MPa時，滅菌40min。

培養(yǎng)基配制

6.3.1培養(yǎng)基配方

生產(chǎn)上常用配方見附錄A.2。不溶于水的物料應(yīng)過100目篩，培養(yǎng)基原料應(yīng)符合NY/T528的要求，用

水符合GB5749的要求。

6.3.2投料與定容

首先培養(yǎng)基中的固形物用溫水溶解，攪拌均勻，通過吸管或漏斗加入罐體，加水定容至所需體積（一

般培養(yǎng)基投料量為罐體容量的70%～80%為宜），然后加入0.03%消泡劑，裝料時保持進氣管壓0.05MPa～

0.10MPa，通入無菌空氣鼓動液體基料，使其混合均勻，滅菌料溫上升至90℃時，關(guān)閉進氣管。清理加

料口，擦凈殘留的物料，擰緊上料口蓋。

發(fā)酵罐實消

投料定容完成后，發(fā)酵罐夾層通入冷水，水位低于排水口20cm，關(guān)閉進水閥后加熱。待夾層蒸汽

壓力達到0.05MPa時，緩慢排氣，降壓至0MPa，關(guān)閉排氣閥，再次升壓至0.10MPa～0.14MPa，如此操

作2次。同時打開空氣過濾器滅菌，微開排氣閥，維持50min～60min。

3

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實消結(jié)束后，關(guān)閉空氣過濾器滅菌閥和排氣閥，緩慢打開夾層放水閥，夾層進水閥通過硅膠軟管接

入水管，通入冷水，進行冷卻。當(dāng)罐體壓力表壓力降至0.05MPa時，打開氣泵及時向發(fā)酵罐內(nèi)通入無菌

空氣，防止罐體在冷卻過程中產(chǎn)生負壓造成污染，并使下部冷水較快向上冷卻。通過罐體放氣閥調(diào)節(jié)壓

力至0MPa，直至罐體溫度降至26℃～28℃，等待接種。

接種

用帶有手柄的內(nèi)徑略大于接種口的鐵絲圈纏繞紗布，蘸上95%酒精，制成火焰圈。打開罐體放氣閥

使壓力降至0MPa，把火焰圈套在接種口上，點燃火焰圈后關(guān)閉放氣閥，在火焰的保護下用鑷子去掉接

種管上的牛皮紙和瓶塞，打開接種口，然后快、穩(wěn)、輕的接入搖瓶液體菌種，然后擰緊接種口的螺絲。

接種時間應(yīng)控制在10s以內(nèi)，接種量為0.5%～1.0%。

培養(yǎng)

通過氣泵充氣和調(diào)整放氣閥來調(diào)節(jié)罐體壓力，前2d調(diào)壓力至0.02MPa～0.03MPa，第3d起調(diào)壓至

0.05MPa，溫度控制在23℃～25℃，通氣量逐步提高到1:（0.8～1），進行液體菌種培養(yǎng)。大球蓋菇

液體菌種在上述條件下培養(yǎng)6d～7d可達到培養(yǎng)指標(biāo)。

檢測

6.7.1取樣

接種后第2d開始隔天取樣，用酒精燈外焰灼燒取樣閥，棄掉最初流出的液體菌種，用酒精燈火焰

封口取50mL液體流入無菌三角瓶內(nèi)，塞緊瓶塞，備用。取樣后用酒精燈火焰將取樣閥燒干。

6.7.2檢測

將所取樣品接入無菌平板培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)檢測，檢測方法參照5.6，檢測項目和指標(biāo)見附錄B。

放罐

放罐前24h進行檢測，符合液體菌種放罐指標(biāo)要求時，即可放罐接種，放罐指標(biāo)見附錄C。

7貯藏

液體菌種生產(chǎn)好后，應(yīng)立即使用，若因某些原因不能立即使用時，需降溫保壓處理。在培養(yǎng)器內(nèi)通

入無菌空氣，保持罐壓0.02MPa～0.03MPa，液溫6℃～10℃可保存3d，11℃～15℃可保存2d。

8留樣

菌種和培養(yǎng)基均應(yīng)留樣，2℃～4℃下貯存，保存7d以上備查，具體抽樣要求如下：

——每個批號的母鐘留5支試管，于4℃～6℃下貯存；

——搖瓶菌種，每個批號取樣50mL，用三角瓶留存；

——發(fā)酵罐實消后的空白培養(yǎng)基，每個批號取樣50mL，用三角瓶留存；

——放罐前24h的發(fā)酵罐菌種，每個批號取樣50mL，用三角瓶留存；

——發(fā)酵終止后的發(fā)酵罐菌種，每個批號取樣50mL，用三角瓶留存。

大球蓋菇母種、搖瓶菌種和發(fā)酵罐菌種生產(chǎn)的每個環(huán)節(jié)都要有詳實的生產(chǎn)記錄，由具體操作人員現(xiàn)

場記錄填寫，定期由技術(shù)主管審核，簽字后歸檔保存。生產(chǎn)檔案記錄項目參見附錄D。

4

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9建檔和追溯

建立生產(chǎn)檔案記錄、投入品檔案記錄、物候期檔案記錄，發(fā)現(xiàn)問題時便于追溯，保存期為3年，以

備查閱。產(chǎn)品質(zhì)量安全追溯執(zhí)行NY/T3819。

5

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A

A

附錄A

（資料性）

大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)上常用配方

A.1搖瓶液體培養(yǎng)配方

配方一：馬鈴薯（煮汁）200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀1.5g，硫酸鎂1.5g，水1000mL，pH自然；

配方二：馬鈴薯（煮汁）200g，葡萄糖20g，蛋白胨2.5g，磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂1.0g，維生

素B110mg，水1000mL，pH自然。

A.2大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)上常用配方

配方一：黃豆粉8g，玉米粉15g，葡萄糖25g，蛋白胨4g，酵母膏5g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂3g，

維生素B1、B6各2片，水1000mL，pH自然；

配方二：玉米粉10g，麥麩100g（煮沸取其濾液），蛋白胨4g，葡萄糖15g，磷酸二氫鉀2g，硫

酸鎂0.8g，維生素B1、B6各2片，水1000mL，pH自然。

其中黃豆粉、玉米粉均過100目篩。

6

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B

B

附錄B

（資料性）

大球蓋菇液體菌種檢測方法及指標(biāo)

大球蓋菇液體菌種檢測方法及指標(biāo)見表B.1。

表B.1大球蓋菇液體菌種檢測方法及指標(biāo)

檢驗項目檢驗方法具體指標(biāo)

色澤：菌絲體白色，菌液淡黃色；形態(tài)：菌液粘

稠不分層、清澈透明，菌絲體分布均勻，菌絲球懸

菌液色澤、形態(tài)及氣味感官檢查浮均勻細小，固形物體積≤30%，菌絲球直徑2mm～

3mm；氣味：有大球蓋菇特有香氣，無酸味、臭味

等異味

細菌、霉菌、酵母菌等雜菌平板培養(yǎng)檢測和顯微鏡檢測不得檢出細菌、霉菌、酵母菌等雜菌

菌絲生長旺盛，球狀和叢狀菌絲體大量分布；菌

菌絲球和菌絲形態(tài)顯微鏡檢測絲粗壯，有隔膜，可見鎖狀聯(lián)合，菌絲結(jié)構(gòu)特點一

致，無異常形態(tài)菌絲

pH值測定pH試紙或pH計測定菌液pH應(yīng)在5.5～6.5

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C

C

附錄C

（資料性）

大球蓋菇液體菌種放罐指標(biāo)

大球蓋菇液體菌種放罐指標(biāo)見表C.1。

表C.1大球蓋菇液體菌種放罐指標(biāo)

項目指標(biāo)

菌液色澤菌絲體呈白色，菌液呈淡黃色

菌液粘度高不分層，清澈透明；菌絲體分布均勻；菌絲球

菌液形態(tài)

懸浮均勻、細小，固形物體積≤30%，菌絲球直徑2mm～3mm

有大球蓋菇培養(yǎng)時特有的香氣，無酸味、臭味等異味，發(fā)

菌液氣味

酵罐排氣口氣味正常