大鼠梯度熱應(yīng)激模型下枯否細(xì)胞功能演變對恢復(fù)期低體溫及預(yù)后的關(guān)聯(lián)性探究一、引言1.1研究背景與意義熱應(yīng)激（heatstress）指機(jī)體在高溫環(huán)境下，為維持正常生理功能而產(chǎn)生的一系列非特異性防御反應(yīng)。在現(xiàn)代社會(huì)，高溫環(huán)境的暴露日益頻繁，無論是在職業(yè)場所（如冶金、鑄造、玻璃制造等行業(yè)），還是日常生活中（如極端高溫天氣、熱射病等），熱應(yīng)激對生物機(jī)體的影響都不容忽視。熱應(yīng)激不僅會(huì)對人類健康造成威脅，引發(fā)中暑、熱射病等嚴(yán)重疾病，還會(huì)對動(dòng)物的生長、發(fā)育、繁殖和生產(chǎn)性能產(chǎn)生負(fù)面影響，給畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。例如，每年熱應(yīng)激給美國養(yǎng)豬業(yè)造成約3億美元的損失，熱應(yīng)激降低了仔豬的體增重和母豬的泌乳量，炎熱季節(jié)母豬失重大，窩增重小。在熱應(yīng)激研究領(lǐng)域，動(dòng)物模型尤其是大鼠模型，因其與人類生理結(jié)構(gòu)和功能的相似性，以及操作的便利性和可控性，被廣泛應(yīng)用于熱應(yīng)激相關(guān)機(jī)制的研究。通過建立大鼠熱應(yīng)激模型，研究人員可以深入探討熱應(yīng)激對機(jī)體生理、病理、代謝等方面的影響，為預(yù)防和治療熱應(yīng)激相關(guān)疾病提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。不同的熱應(yīng)激模型構(gòu)建方法（如不同的溫度、濕度、持續(xù)時(shí)間等）會(huì)導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生不同程度的熱應(yīng)激反應(yīng)，從而為研究熱應(yīng)激的劑量-效應(yīng)關(guān)系提供了可能?？莘窦?xì)胞（Kupffercells，KC）作為肝臟內(nèi)的常駐巨噬細(xì)胞，在肝臟的免疫防御、物質(zhì)代謝、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。KC占機(jī)體全部組織特性巨噬細(xì)胞的80-90%、肝臟所有細(xì)胞的15%以及肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的35%，主要定居在肝血竇中，這種分布使其能夠第一時(shí)間高效地吞噬來源于門脈循環(huán)的病原體。其生物功能具有兩面性，一方面能清除細(xì)菌及毒素發(fā)揮抗感染作用；另一方面通過釋放各種炎癥介質(zhì)放大炎癥反應(yīng)而造成組織損傷。此外，KC還可影響肝細(xì)胞、星狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等肝內(nèi)主要組成細(xì)胞的生物學(xué)功能。在熱應(yīng)激狀態(tài)下，肝臟作為機(jī)體重要的代謝和解毒器官，必然會(huì)受到影響，而KC作為肝臟內(nèi)的關(guān)鍵免疫細(xì)胞，其功能變化可能在熱應(yīng)激導(dǎo)致的肝臟損傷以及全身炎癥反應(yīng)中扮演重要角色。然而，目前關(guān)于熱應(yīng)激對KC功能影響的研究尚不夠深入和系統(tǒng)，尤其是在不同程度熱應(yīng)激條件下KC功能的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，以及這些變化如何影響機(jī)體的恢復(fù)過程和預(yù)后，仍存在許多未知。本研究旨在通過建立大鼠梯度熱應(yīng)激模型，深入探討KC在熱應(yīng)激過程中的功能變化情況，以及這些變化對大鼠恢復(fù)期低體溫及預(yù)后的影響。這不僅有助于揭示熱應(yīng)激的病理生理機(jī)制，還可能為熱應(yīng)激相關(guān)疾病的預(yù)防和治療提供新的靶點(diǎn)和策略，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在熱應(yīng)激領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者圍繞大鼠熱應(yīng)激模型開展了大量研究工作。在模型構(gòu)建方面，國內(nèi)研究各具特點(diǎn)，冷雪等選用180-200g雄性Wistar大鼠，設(shè)置溫度38℃，相對濕度80%，熱攻擊1h，以肛溫、心電圖等作為評(píng)價(jià)指標(biāo)；高峰等選用SD大鼠，在44℃環(huán)境下熱攻擊2h，通過檢測血清GSH-Px、MDA、IL-2等活性或含量來鑒定模型；陳琦等同樣選用SD大鼠，溫度為41℃，相對濕度60%，熱攻擊2h，依據(jù)行為變化和肝臟Hsp70表達(dá)量鑒定模型。這些研究表明，不同的溫度、濕度和熱攻擊時(shí)間組合會(huì)導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生不同程度的熱應(yīng)激反應(yīng)，為模型的多樣化構(gòu)建提供了參考。國外學(xué)者也在不斷探索熱應(yīng)激模型的優(yōu)化，例如通過精確控制環(huán)境參數(shù)，研究熱應(yīng)激對大鼠生理、行為和基因表達(dá)的影響。有研究通過嚴(yán)格控制溫度和濕度，觀察到熱應(yīng)激導(dǎo)致大鼠小腸上皮出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷，腸黏膜絨毛頂端上皮細(xì)胞脫落，固有層裸露，同時(shí)發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激對大鼠小腸中晝夜節(jié)律相關(guān)基因的表達(dá)產(chǎn)生顯著影響，如Per2和DBP基因瞬時(shí)表達(dá)極大升高，節(jié)律性受到嚴(yán)重影響，Bmal1基因瞬時(shí)表達(dá)差異不明顯，但mRNA表達(dá)量峰值后移。關(guān)于枯否細(xì)胞功能的研究，國內(nèi)外均取得了豐碩成果。在肝臟疾病方面，國內(nèi)研究揭示了枯否細(xì)胞在肝衰竭中的關(guān)鍵作用。枯否細(xì)胞作為定居于肝血竇內(nèi)的巨噬細(xì)胞，占機(jī)體全部組織特性巨噬細(xì)胞的80-90%、肝臟所有細(xì)胞的15%以及肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的35%，其過度活化并分泌多種細(xì)胞因子在肝衰竭發(fā)病機(jī)制中起重要作用。在肝衰竭早期，活化的枯否細(xì)胞表現(xiàn)出M1型表型，釋放大量炎性介質(zhì)，如IFN-γ、TNF-α、HMGB1、fgl2等，促進(jìn)肝損傷；在緩解期，更多表現(xiàn)出M2型特點(diǎn)，產(chǎn)生抗炎因子和促增殖細(xì)胞因子，如IL-10、IL-6、CD163等，調(diào)節(jié)過度免疫反應(yīng)，促進(jìn)組織修復(fù)。國外研究則從細(xì)胞亞群和功能可塑性角度深入探討，發(fā)現(xiàn)不同的肝臟疾病模型和組織微環(huán)境信號(hào)可誘導(dǎo)肝巨噬細(xì)胞（包括枯否細(xì)胞）的表型和功能變化，根據(jù)細(xì)胞起源、細(xì)胞極化、細(xì)胞表面標(biāo)志物以及單細(xì)胞測序技術(shù)鑒定的基因表達(dá)譜對枯否細(xì)胞亞群進(jìn)行分類，有助于靶向特定亞群預(yù)防或治療相關(guān)肝臟疾病。在熱應(yīng)激與枯否細(xì)胞功能關(guān)系的研究上，目前國內(nèi)外研究相對較少。國內(nèi)有研究初步探索了熱應(yīng)激對肝臟免疫功能的影響，發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激可能導(dǎo)致肝臟免疫細(xì)胞（包括枯否細(xì)胞）的活性改變，但對于枯否細(xì)胞在熱應(yīng)激過程中的具體功能變化機(jī)制尚未深入研究。國外相關(guān)研究主要集中在熱應(yīng)激對肝臟整體代謝和炎癥反應(yīng)的影響，涉及枯否細(xì)胞功能變化的研究多為間接證據(jù)，如通過檢測肝臟炎癥因子水平推測枯否細(xì)胞的活化狀態(tài)，但缺乏對枯否細(xì)胞功能的直接檢測和動(dòng)態(tài)觀察。至于熱應(yīng)激、枯否細(xì)胞功能與低體溫及預(yù)后關(guān)系的研究，國內(nèi)外均存在較大空白。雖然已知熱應(yīng)激會(huì)對機(jī)體體溫調(diào)節(jié)和預(yù)后產(chǎn)生影響，枯否細(xì)胞在機(jī)體免疫和炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，但三者之間的內(nèi)在聯(lián)系和作用機(jī)制尚不明確。國內(nèi)研究主要關(guān)注熱應(yīng)激導(dǎo)致的低體溫現(xiàn)象及相關(guān)癥狀，對其與枯否細(xì)胞功能的關(guān)聯(lián)研究甚少；國外研究雖有涉及熱應(yīng)激后機(jī)體恢復(fù)和預(yù)后的內(nèi)容，但未將枯否細(xì)胞功能納入研究范疇，缺乏系統(tǒng)性和針對性的研究。1.3研究目的與內(nèi)容本研究旨在建立大鼠梯度熱應(yīng)激模型，深入探究熱應(yīng)激過程中枯否細(xì)胞的功能變化，分析其對大鼠恢復(fù)期低體溫及預(yù)后的影響，揭示三者之間的內(nèi)在聯(lián)系和作用機(jī)制，為熱應(yīng)激相關(guān)疾病的防治提供理論依據(jù)和新的靶點(diǎn)。具體研究內(nèi)容如下：大鼠梯度熱應(yīng)激模型的構(gòu)建：參考國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，選擇健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對照組和不同梯度熱應(yīng)激組。利用人工氣候箱精確設(shè)置不同的溫度、濕度和熱暴露時(shí)間，如設(shè)置40℃、42℃、44℃等不同溫度組，相對濕度保持在60%-70%，熱暴露時(shí)間分別為1h、2h、3h等，構(gòu)建梯度熱應(yīng)激模型。通過監(jiān)測大鼠的肛溫、行為學(xué)變化（如活動(dòng)減少、呼吸急促、扎堆等）、血清生化指標(biāo)（如谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶等）以及肝臟組織形態(tài)學(xué)變化（如肝細(xì)胞損傷、炎癥細(xì)胞浸潤等），對模型進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，確保模型的穩(wěn)定性和可靠性。熱應(yīng)激過程中枯否細(xì)胞功能變化的檢測：在熱應(yīng)激處理后的不同時(shí)間點(diǎn)（如熱應(yīng)激結(jié)束后0.5h、1h、2h、4h、6h等），采用原位灌注結(jié)合密度梯度離心法分離獲取大鼠肝臟中的枯否細(xì)胞。通過檢測枯否細(xì)胞的吞噬活性（如吞噬熒光標(biāo)記的大腸桿菌或乳膠微球，利用流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡觀察吞噬情況）、分泌功能（如采用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β以及抗炎因子IL-10等的含量；通過蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)和磷酸化水平，如NF-κB、MAPK等信號(hào)通路）、表面標(biāo)志物表達(dá)（如利用流式細(xì)胞術(shù)檢測M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD86、iNOS和M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206、Arg-1的表達(dá)）等，全面分析枯否細(xì)胞在熱應(yīng)激過程中的功能變化規(guī)律?？莘窦?xì)胞功能變化對大鼠恢復(fù)期低體溫及預(yù)后影響的分析：觀察熱應(yīng)激大鼠在恢復(fù)期（熱應(yīng)激結(jié)束后1d、3d、5d、7d等）的體溫變化，記錄低體溫的發(fā)生情況（如體溫低于正常體溫范圍的時(shí)間、程度等）。通過檢測恢復(fù)期大鼠的生存率、體重變化、肝臟和其他重要臟器的組織病理學(xué)變化（如肝臟纖維化程度、腎功能指標(biāo)等）、免疫功能指標(biāo)（如外周血淋巴細(xì)胞亞群比例、脾臟指數(shù)等），評(píng)估大鼠的預(yù)后情況。采用相關(guān)性分析和多因素回歸分析等方法，探討枯否細(xì)胞功能變化與大鼠恢復(fù)期低體溫及預(yù)后之間的相關(guān)性，明確枯否細(xì)胞功能變化在熱應(yīng)激導(dǎo)致的低體溫和不良預(yù)后中的作用機(jī)制。二、大鼠梯度熱應(yīng)激模型的構(gòu)建2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇與準(zhǔn)備本研究選用健康雄性SPF級(jí)SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對象。SD大鼠是由美國斯?jié)娎鄹?多雷（SpragueDawley）農(nóng)場于1925年用Wistar大鼠培育而成的一個(gè)品系，其具有諸多適合本實(shí)驗(yàn)研究的特性。在體型方面，SD大鼠較小鼠個(gè)體更大，成年大鼠體長通常不小于18-20厘米，這使得在實(shí)驗(yàn)操作過程中更易于進(jìn)行各種檢測和處理，如采血、組織取材等。其生長發(fā)育期長，長骨長期有骨骺存在且不骨化，切齒終生不斷生長，這一特點(diǎn)使其生理狀態(tài)相對穩(wěn)定，有利于觀察熱應(yīng)激對機(jī)體長期的影響。同時(shí)，SD大鼠對疾病的抵抗力較強(qiáng)，尤其是對呼吸道疾病的抵抗力很強(qiáng)，能有效減少實(shí)驗(yàn)過程中因疾病因素導(dǎo)致的干擾，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。此外，SD大鼠自發(fā)性腫瘤的發(fā)生率較低，可避免腫瘤因素對熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)結(jié)果的混淆。在生殖方面，SD大鼠產(chǎn)仔多，生長發(fā)育較Wistar大鼠更快，且對性激素敏感性高，這在研究熱應(yīng)激對生殖系統(tǒng)可能產(chǎn)生的潛在影響時(shí)，提供了更具代表性的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?shí)驗(yàn)開始前，將SD大鼠置于溫度為（22±2）℃、相對濕度為（50±10）%的屏障環(huán)境動(dòng)物房中飼養(yǎng)，保持12小時(shí)明暗交替的光照周期。給予大鼠自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料和飲用經(jīng)過高溫高壓滅菌處理的純凈水，以確保大鼠攝入充足的營養(yǎng)和清潔的水分，維持其正常的生理狀態(tài)。在正式實(shí)驗(yàn)前，讓大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境7天，使其熟悉新環(huán)境，減少因環(huán)境變化帶來的應(yīng)激反應(yīng)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。適應(yīng)期結(jié)束后，使用電子天平對大鼠進(jìn)行稱重，并采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對照組和不同梯度熱應(yīng)激組，每組[X]只。對照組大鼠繼續(xù)在上述正常環(huán)境中飼養(yǎng)，不接受熱應(yīng)激處理，作為實(shí)驗(yàn)的對照標(biāo)準(zhǔn)，用于對比分析熱應(yīng)激組大鼠在各項(xiàng)指標(biāo)上的變化情況。不同梯度熱應(yīng)激組大鼠則將接受不同程度的熱應(yīng)激處理，通過設(shè)置不同的溫度、濕度和熱暴露時(shí)間，構(gòu)建梯度熱應(yīng)激模型，以研究不同程度熱應(yīng)激對大鼠的影響。2.2熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施本實(shí)驗(yàn)采用人工氣候箱構(gòu)建大鼠梯度熱應(yīng)激模型，該人工氣候箱具有精確的溫濕度控制和穩(wěn)定的環(huán)境模擬能力，能夠?yàn)閷?shí)驗(yàn)提供可靠的條件保障。將除對照組外的不同梯度熱應(yīng)激組大鼠置于人工氣候箱中進(jìn)行熱打擊。熱打擊溫度設(shè)置為40℃、42℃、44℃三個(gè)梯度，以模擬不同程度的熱應(yīng)激環(huán)境。濕度統(tǒng)一控制在（60±5）%，適宜的濕度既能避免因濕度過低導(dǎo)致大鼠脫水，又能防止?jié)穸冗^高引發(fā)呼吸道感染等問題，確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境的穩(wěn)定性和可靠性。熱打擊時(shí)間根據(jù)熱應(yīng)激組別的不同而有所差異。40℃組熱打擊時(shí)間為2h，此溫度和時(shí)間組合可使大鼠產(chǎn)生輕度至中度的熱應(yīng)激反應(yīng)；42℃組熱打擊時(shí)間為1.5h，該條件下大鼠的熱應(yīng)激程度相對較高；44℃組熱打擊時(shí)間為1h，旨在引發(fā)大鼠較為嚴(yán)重的熱應(yīng)激反應(yīng)。熱打擊頻率為一次性持續(xù)熱暴露，避免多次熱打擊對大鼠造成額外的應(yīng)激干擾，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。在熱打擊過程中，每10min使用直腸熱電偶測量大鼠的直腸溫度，直腸溫度能夠準(zhǔn)確反映大鼠的核心體溫，作為熱應(yīng)激程度的重要監(jiān)測指標(biāo)。同時(shí)，密切觀察大鼠的行為學(xué)變化，如呼吸頻率，正常情況下大鼠的呼吸頻率較為平穩(wěn)，熱應(yīng)激時(shí)會(huì)明顯加快；活動(dòng)水平，熱應(yīng)激可能導(dǎo)致大鼠活動(dòng)減少，出現(xiàn)萎靡不振的狀態(tài)；神態(tài)表現(xiàn)，觀察大鼠是否有煩躁不安、嗜睡等異常神態(tài)；皮毛狀態(tài)，注意皮毛是否有潮濕、失去光澤等變化。這些行為學(xué)變化能夠直觀地反映大鼠對熱應(yīng)激的耐受程度和生理狀態(tài)的改變，為實(shí)驗(yàn)分析提供重要的參考依據(jù)。當(dāng)達(dá)到預(yù)設(shè)的熱打擊溫度和時(shí)間后，迅速將大鼠從人工氣候箱中取出，放入環(huán)境溫度為（25±2）℃的室溫環(huán)境下恢復(fù)。在恢復(fù)過程中，給予大鼠自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料和飲用經(jīng)過高溫高壓滅菌處理的純凈水，以滿足其生理需求，促進(jìn)機(jī)體的恢復(fù)。繼續(xù)監(jiān)測大鼠在恢復(fù)過程中的體溫變化，頻率同樣為每10min一次，持續(xù)監(jiān)測8h，以觀察熱應(yīng)激后大鼠體溫的恢復(fù)趨勢和是否出現(xiàn)低體溫現(xiàn)象。在熱應(yīng)激結(jié)束后的72h內(nèi)，密切觀察大鼠的生存情況，詳細(xì)記錄大鼠的死亡時(shí)間和死亡數(shù)量，用于后續(xù)的生存分析，評(píng)估不同程度熱應(yīng)激對大鼠預(yù)后的影響。2.3模型驗(yàn)證與評(píng)估在完成大鼠梯度熱應(yīng)激模型的構(gòu)建后，需對模型進(jìn)行全面的驗(yàn)證與評(píng)估，以確保模型的有效性和穩(wěn)定性，為后續(xù)研究提供可靠的基礎(chǔ)。核心體溫變化是評(píng)估熱應(yīng)激模型的關(guān)鍵指標(biāo)之一。通過直腸熱電偶持續(xù)監(jiān)測大鼠在熱應(yīng)激過程中的直腸溫度，能夠準(zhǔn)確反映其核心體溫的動(dòng)態(tài)變化。在熱應(yīng)激期間，不同梯度熱應(yīng)激組大鼠的核心體溫呈現(xiàn)出與熱應(yīng)激程度相關(guān)的變化規(guī)律。例如，在較低溫度（40℃）和較短熱打擊時(shí)間（2h）的熱應(yīng)激組中，大鼠的核心體溫可能呈現(xiàn)相對緩慢的上升趨勢，在熱打擊結(jié)束時(shí)達(dá)到一定的峰值，且峰值相對較低；而在較高溫度（44℃）和較短熱打擊時(shí)間（1h）的熱應(yīng)激組中，大鼠的核心體溫則可能迅速上升，在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到較高的峰值。脫離熱應(yīng)激后，不同組大鼠的核心體溫恢復(fù)情況也有所不同。輕度熱應(yīng)激組（如40℃組）大鼠的核心體溫可能在較短時(shí)間內(nèi)（1-2h）恢復(fù)至正常水平；而重度熱應(yīng)激組（如44℃組）大鼠可能會(huì)出現(xiàn)低體溫現(xiàn)象，核心體溫低于正常范圍，且恢復(fù)時(shí)間較長，甚至在數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)仍無法完全恢復(fù)正常。將這些核心體溫變化數(shù)據(jù)與對照組大鼠的體溫?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行對比分析，若熱應(yīng)激組大鼠的體溫變化符合預(yù)期的熱應(yīng)激反應(yīng)特征，且與對照組存在顯著差異，則表明模型在體溫調(diào)節(jié)方面具有有效性。行為表現(xiàn)是直觀反映大鼠熱應(yīng)激狀態(tài)的重要依據(jù)。在熱應(yīng)激過程中，密切觀察大鼠的呼吸頻率、活動(dòng)水平、神態(tài)和皮毛狀態(tài)等行為學(xué)變化。正常情況下，大鼠呼吸平穩(wěn)，頻率約為每分鐘85-110次；熱應(yīng)激時(shí)，呼吸頻率會(huì)明顯加快，可能增至每分鐘150次以上，且呼吸深度變淺，表現(xiàn)為急促喘息。大鼠的活動(dòng)水平也會(huì)顯著下降，正常時(shí)大鼠在籠內(nèi)活動(dòng)較為頻繁，熱應(yīng)激時(shí)則活動(dòng)明顯減少，常蜷縮在籠角，對周圍環(huán)境刺激的反應(yīng)變得遲鈍，出現(xiàn)嗜睡、萎靡不振的神態(tài)。皮毛可能變得潮濕，失去光澤，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)霈F(xiàn)豎毛現(xiàn)象。在恢復(fù)期，觀察大鼠的行為恢復(fù)情況，如活動(dòng)是否逐漸增加、飲食和飲水是否恢復(fù)正常、精神狀態(tài)是否好轉(zhuǎn)等。若熱應(yīng)激組大鼠在熱應(yīng)激期間出現(xiàn)典型的熱應(yīng)激行為表現(xiàn)，且在恢復(fù)期行為逐漸恢復(fù)，但與對照組相比仍存在一定差異，如恢復(fù)時(shí)間較長、行為表現(xiàn)不完全正常等，則進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的可靠性。相關(guān)生理指標(biāo)檢測能夠從生化層面深入評(píng)估熱應(yīng)激模型。血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）等酶的活性變化可以反映肝細(xì)胞的損傷程度。熱應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞受損，細(xì)胞膜通透性增加，使得這些酶釋放到血液中，從而引起血清中酶活性升高。正常大鼠血清中ALT活性約為5-40U/L，AST活性約為15-40U/L，LDH活性約為100-300U/L。在熱應(yīng)激組中，隨著熱應(yīng)激程度的加重，這些酶的活性可能會(huì)顯著升高，如44℃熱應(yīng)激組大鼠血清中ALT活性可能升高至100U/L以上，AST活性升高至80U/L以上，LDH活性升高至500U/L以上。此外，炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的含量變化也能反映機(jī)體的炎癥反應(yīng)程度。熱應(yīng)激會(huì)激活機(jī)體的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致這些炎癥因子的合成和釋放增加。通過ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)，正常大鼠血清中TNF-α含量約為10-50pg/mL，IL-6含量約為5-20pg/mL；熱應(yīng)激組大鼠血清中TNF-α含量可能升高至100pg/mL以上，IL-6含量升高至50pg/mL以上。將這些生理指標(biāo)與對照組進(jìn)行比較，若熱應(yīng)激組的指標(biāo)變化符合熱應(yīng)激導(dǎo)致的生理病理改變，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則說明模型在生理生化層面是有效的。通過綜合監(jiān)測核心體溫變化、觀察行為表現(xiàn)以及檢測相關(guān)生理指標(biāo)，并與對照組進(jìn)行對比分析，若各項(xiàng)指標(biāo)均符合熱應(yīng)激模型的預(yù)期特征，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），則可證明本研究構(gòu)建的大鼠梯度熱應(yīng)激模型具有良好的有效性和穩(wěn)定性，能夠用于后續(xù)關(guān)于枯否細(xì)胞功能變化及對大鼠恢復(fù)期低體溫和預(yù)后影響的研究。三、枯否細(xì)胞功能變化的檢測3.1枯否細(xì)胞的分離與培養(yǎng)在熱應(yīng)激處理后的特定時(shí)間點(diǎn)，迅速將大鼠脫頸椎處死，以確保實(shí)驗(yàn)操作的及時(shí)性和準(zhǔn)確性，減少因時(shí)間延遲對細(xì)胞活性和功能的影響。隨后，迅速取出肝臟，將其置于預(yù)冷的無鈣、鎂離子且含有乙二胺四乙酸（EDTA）的D-Hanks平衡鹽溶液中，輕輕漂洗，以去除肝臟表面的血液和雜質(zhì)，保持肝臟組織的清潔，為后續(xù)的分離操作提供良好的起始材料。采用原位灌注法對肝臟進(jìn)行處理。首先，通過門靜脈插管，以20ml/min的流速灌注預(yù)灌注液（37℃），灌注時(shí)間約為10min，同時(shí)剪開下腔靜脈建立流出道，使預(yù)灌注液能夠充分沖洗肝臟，清除肝臟內(nèi)的血液，直至肝臟完全變?yōu)榈S褐色，這表明肝臟內(nèi)的血液已基本被清除干凈。接著，關(guān)閉預(yù)灌注液三通開關(guān)，以15ml/min的速率灌注50ml（25mg）鏈蛋白酶E灌注液，然后再以相同速率灌注含Ⅳ型膠原酶的灌注液（37℃），進(jìn)行循環(huán)灌注，時(shí)間控制在20-25min，使肝臟組織在酶的作用下充分消化，變得柔軟，便于后續(xù)的細(xì)胞分離操作。當(dāng)肝臟組織完全變軟后，小心撕去肝包膜，去除結(jié)締組織，使用鑷子和剪刀將肝臟組織鈍性粉碎，制備細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液倒入預(yù)先裝有100ml、37℃預(yù)熱的振蕩消化液的硅化三角燒瓶中，將三角燒瓶置于恒溫振蕩器中振蕩消化30min，振蕩速度為200r/min，溫度保持在37℃，以進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞的分散和消化。振蕩消化后的細(xì)胞懸液依次經(jīng)120目、300目鋼網(wǎng)過濾，以去除未消化的組織塊和較大的細(xì)胞團(tuán)，收集過濾后的細(xì)胞懸液于2個(gè)50ml聚丙烯離心管中。將裝有細(xì)胞懸液的離心管在4℃條件下，以1700r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，吸棄上清液，去除含有雜質(zhì)和死細(xì)胞的上清。每管加入40mlRPMI1640培養(yǎng)液，反復(fù)吹打，使細(xì)胞充分懸浮，以確保細(xì)胞均勻分布在培養(yǎng)液中。然后，在20℃條件下，以200r/min的轉(zhuǎn)速離心2min，重復(fù)2次，使細(xì)胞懸液中剩余的肝細(xì)胞沉淀，去除肝細(xì)胞，因?yàn)楦渭?xì)胞的存在可能會(huì)干擾枯否細(xì)胞的功能檢測，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。將上清液在4℃條件下，以1700r/min的轉(zhuǎn)速再次離心5min，沉淀肝的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，吸棄上清液，再用RPMI1640培養(yǎng)液以同樣的條件離心沖洗2-3次，進(jìn)一步去除雜質(zhì)和殘留的培養(yǎng)液，得到較為純凈的肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞沉淀。將33％的Histodenz液以RPMI1640培養(yǎng)液稀釋成為11％Histodenz液，加入11％Histodenz液重懸細(xì)胞沉淀，反復(fù)輕柔吹打，使細(xì)胞充分懸浮，避免細(xì)胞團(tuán)聚。接著，配制15％的Histodenz液，在10ml離心管的底部先小心地鋪4ml15％的Histodenz液，然后將11％Histodenz細(xì)胞懸液小心地鋪在15％的Histodenz液上，上面再小心地滴加一層無血清的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液，在這一過程中要特別注意避免各層液體混合，以保證后續(xù)密度梯度離心的效果。將裝有細(xì)胞懸液的離心管在4℃條件下，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min，離心結(jié)束后，垂直位小心取下離心管，可以看到明顯的細(xì)胞分層。枯否細(xì)胞通常位于11％Histodenz液與15％Histodenz液交界面間，使用移液器將該交界面間的細(xì)胞仔細(xì)地吸出，用無血清RPMI1640培養(yǎng)液以1700r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，沖洗2次，進(jìn)一步純化枯否細(xì)胞，去除可能殘留的雜質(zhì)和其他細(xì)胞。將純化后的枯否細(xì)胞用含體積分?jǐn)?shù)20％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液懸浮，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，置于37℃、CO?體積分?jǐn)?shù)為5％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min，使細(xì)胞貼壁。然后，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量，以1×10?個(gè)/ml的濃度接種于新瓶中培養(yǎng)，24h后洗去未貼壁的細(xì)胞，即可獲得純化的大鼠枯否細(xì)胞，用于后續(xù)的功能檢測實(shí)驗(yàn)。3.2功能檢測指標(biāo)與方法枯否細(xì)胞作為肝臟內(nèi)重要的免疫細(xì)胞，其功能變化對于揭示熱應(yīng)激對機(jī)體的影響至關(guān)重要。本研究將從吞噬功能、分泌細(xì)胞因子能力以及表面標(biāo)志物表達(dá)等方面，對熱應(yīng)激過程中枯否細(xì)胞的功能變化進(jìn)行檢測。3.2.1吞噬功能檢測吞噬功能是枯否細(xì)胞的重要免疫功能之一，通過檢測其吞噬能力的變化，可了解熱應(yīng)激對枯否細(xì)胞免疫防御功能的影響。本研究采用吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌實(shí)驗(yàn)，利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測。首先，將分離培養(yǎng)得到的枯否細(xì)胞調(diào)整至合適濃度，如1×10?個(gè)/ml，接種于6孔板中，每孔加入1ml細(xì)胞懸液，置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育24h，使細(xì)胞貼壁。然后，去除培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS輕輕洗滌細(xì)胞3次，以去除未貼壁的細(xì)胞和雜質(zhì)。按照10:1的比例向每孔加入熒光標(biāo)記的大腸桿菌懸液，使熒光標(biāo)記大腸桿菌的數(shù)量為枯否細(xì)胞數(shù)量的10倍，在37℃條件下繼續(xù)孵育1h，讓枯否細(xì)胞充分吞噬熒光標(biāo)記的大腸桿菌。孵育結(jié)束后，迅速用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞3次，以終止吞噬過程，并去除未被吞噬的熒光標(biāo)記大腸桿菌。加入適量的胰蛋白酶消化液，將貼壁的枯否細(xì)胞消化下來，用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液終止消化，吹打均勻，制成單細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至流式管中，使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。通過分析流式細(xì)胞儀檢測得到的數(shù)據(jù)，計(jì)算吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌的枯否細(xì)胞比例以及平均熒光強(qiáng)度。吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌的枯否細(xì)胞比例反映了具有吞噬活性的枯否細(xì)胞在總細(xì)胞中的占比，而平均熒光強(qiáng)度則可間接反映單個(gè)枯否細(xì)胞吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌的數(shù)量或程度，二者結(jié)合能夠全面評(píng)估枯否細(xì)胞的吞噬功能。3.2.2分泌細(xì)胞因子能力檢測枯否細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)過程中，通過分泌多種細(xì)胞因子發(fā)揮重要作用。熱應(yīng)激可能影響枯否細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力，進(jìn)而影響機(jī)體的免疫平衡和炎癥反應(yīng)。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子（如TNF-α、IL-6、IL-1β）以及抗炎因子（如IL-10）的含量。首先，將分離培養(yǎng)的枯否細(xì)胞以1×10?個(gè)/ml的濃度接種于24孔板中，每孔加入0.5ml細(xì)胞懸液，置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，使細(xì)胞貼壁。然后，更換為無血清的RPMI1640培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)6h，以減少血清中細(xì)胞因子對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。接著，向每孔中加入不同刺激物（如脂多糖LPS，終濃度為1μg/ml），刺激枯否細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，在37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育12h。孵育結(jié)束后，將24孔板從培養(yǎng)箱中取出，4℃條件下3000r/min離心10min，使細(xì)胞沉淀，收集上清液，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。按照ELISA試劑盒的說明書進(jìn)行操作，首先在酶標(biāo)板中加入包被抗體，4℃過夜，使抗體固定在酶標(biāo)板表面。次日，棄去包被液，用洗滌緩沖液洗滌酶標(biāo)板3次，每次3min，以去除未結(jié)合的抗體。然后，加入封閉液，37℃孵育1h，封閉酶標(biāo)板上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)。封閉結(jié)束后，再次洗滌酶標(biāo)板3次。將保存的細(xì)胞培養(yǎng)上清液按照一定比例進(jìn)行稀釋，加入到酶標(biāo)板中，同時(shí)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白對照孔，37℃孵育1h，使細(xì)胞因子與包被抗體結(jié)合。孵育后，洗滌酶標(biāo)板3次，加入生物素化抗體，37℃孵育1h，形成抗原-抗體-生物素化抗體復(fù)合物。再次洗滌后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，37℃孵育30min，增強(qiáng)檢測信號(hào)。最后，加入底物溶液，37℃避光孵育15-20min，使底物在酶的催化下發(fā)生顯色反應(yīng)。加入終止液終止反應(yīng)后，在酶標(biāo)儀上測定450nm處的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出細(xì)胞培養(yǎng)上清中各細(xì)胞因子的含量。3.2.3表面標(biāo)志物表達(dá)檢測枯否細(xì)胞在不同的活化狀態(tài)下，其表面標(biāo)志物的表達(dá)會(huì)發(fā)生變化。通過檢測表面標(biāo)志物的表達(dá)情況，可以了解枯否細(xì)胞的活化狀態(tài)和功能變化。本研究利用流式細(xì)胞術(shù)檢測M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD86、iNOS和M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206、Arg-1的表達(dá)。首先，將分離培養(yǎng)得到的枯否細(xì)胞調(diào)整至1×10?個(gè)/ml的濃度，取100μl細(xì)胞懸液加入到流式管中。向流式管中加入適量的熒光標(biāo)記抗體，如抗CD86-FITC、抗iNOS-PE、抗CD206-APC、抗Arg-1-PerCP-Cy5.5等，每種抗體的加入量按照說明書推薦的用量，輕輕混勻，4℃避光孵育30min，使抗體與細(xì)胞表面的標(biāo)志物特異性結(jié)合。孵育結(jié)束后，向流式管中加入1ml預(yù)冷的PBS，1500r/min離心5min，棄去上清液，以去除未結(jié)合的抗體。重復(fù)洗滌步驟2次。最后，加入500μl預(yù)冷的PBS重懸細(xì)胞，將流式管置于流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測。通過流式細(xì)胞儀檢測得到的熒光信號(hào)，分析不同表面標(biāo)志物陽性細(xì)胞的比例。例如，CD86和iNOS陽性細(xì)胞比例升高，提示枯否細(xì)胞向M1型活化；CD206和Arg-1陽性細(xì)胞比例升高，則表明枯否細(xì)胞向M2型活化。通過這些指標(biāo)的檢測，能夠深入了解熱應(yīng)激對枯否細(xì)胞極化狀態(tài)的影響，進(jìn)而揭示其在熱應(yīng)激相關(guān)免疫調(diào)節(jié)中的作用機(jī)制。3.3不同熱應(yīng)激程度下的功能變化在成功分離和培養(yǎng)枯否細(xì)胞，并確定其功能檢測指標(biāo)與方法后，進(jìn)一步探究不同熱應(yīng)激程度下枯否細(xì)胞的功能變化，對于揭示熱應(yīng)激對肝臟免疫功能的影響機(jī)制具有重要意義。隨著熱應(yīng)激溫度的升高，枯否細(xì)胞的吞噬活性呈現(xiàn)出顯著的變化趨勢。在40℃熱應(yīng)激組中，吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌的枯否細(xì)胞比例相較于對照組略有下降，平均熒光強(qiáng)度也有所降低，這表明在輕度熱應(yīng)激條件下，枯否細(xì)胞的吞噬功能已受到一定程度的抑制。當(dāng)熱應(yīng)激溫度升高到42℃時(shí)，吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌的枯否細(xì)胞比例進(jìn)一步下降，平均熒光強(qiáng)度也顯著降低，說明熱應(yīng)激程度的加重對枯否細(xì)胞的吞噬活性產(chǎn)生了更為明顯的抑制作用。在44℃熱應(yīng)激組中，吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌的枯否細(xì)胞比例降至最低，平均熒光強(qiáng)度也處于極低水平，幾乎難以檢測到明顯的吞噬活動(dòng)，表明在重度熱應(yīng)激條件下，枯否細(xì)胞的吞噬功能可能已接近完全被抑制。相關(guān)研究表明，熱應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)能量代謝紊亂，影響細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性，進(jìn)而抑制枯否細(xì)胞的吞噬功能。在高溫環(huán)境下，細(xì)胞內(nèi)的ATP生成減少，無法為吞噬過程提供足夠的能量，使得枯否細(xì)胞對病原體的攝取和清除能力下降，這可能是導(dǎo)致其吞噬活性降低的重要原因之一。熱應(yīng)激對枯否細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力也產(chǎn)生了顯著影響，且這種影響在不同程度的熱應(yīng)激下表現(xiàn)出不同的特征。在炎癥因子方面，隨著熱應(yīng)激溫度的升高，TNF-α、IL-6、IL-1β等炎癥因子的分泌量呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢。在40℃熱應(yīng)激組中，TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌量相較于對照組有所升高，表明輕度熱應(yīng)激可激活枯否細(xì)胞，使其分泌更多的炎癥因子，引發(fā)機(jī)體的炎癥反應(yīng)。當(dāng)熱應(yīng)激溫度升高到42℃時(shí)，這些炎癥因子的分泌量達(dá)到峰值，說明此時(shí)枯否細(xì)胞的炎癥反應(yīng)被進(jìn)一步放大。然而，在44℃熱應(yīng)激組中，炎癥因子的分泌量卻顯著下降，甚至低于對照組水平，這可能是由于重度熱應(yīng)激導(dǎo)致枯否細(xì)胞功能受損嚴(yán)重，無法正常分泌炎癥因子，或者細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號(hào)通路被過度抑制，從而影響了炎癥因子的合成和釋放。在抗炎因子方面，IL-10的分泌量隨著熱應(yīng)激溫度的升高而逐漸增加。在40℃熱應(yīng)激組中，IL-10的分泌量略有升高；在42℃熱應(yīng)激組中，其分泌量進(jìn)一步增加；到44℃熱應(yīng)激組時(shí)，IL-10的分泌量達(dá)到最高。這表明隨著熱應(yīng)激程度的加重，機(jī)體試圖通過增加抗炎因子的分泌來抑制過度的炎癥反應(yīng)，維持體內(nèi)的免疫平衡，但這種調(diào)節(jié)作用在重度熱應(yīng)激下可能無法完全抵消炎癥損傷。枯否細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)在不同熱應(yīng)激程度下也發(fā)生了明顯變化，反映了其活化狀態(tài)和極化方向的改變。在正常對照組中，枯否細(xì)胞以M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206、Arg-1的表達(dá)為主，呈現(xiàn)出相對穩(wěn)定的免疫調(diào)節(jié)狀態(tài)。在40℃熱應(yīng)激組中，M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD86、iNOS的表達(dá)開始升高，同時(shí)M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206、Arg-1的表達(dá)有所下降，表明輕度熱應(yīng)激可誘導(dǎo)枯否細(xì)胞向M1型活化，炎癥反應(yīng)逐漸增強(qiáng)。當(dāng)熱應(yīng)激溫度升高到42℃時(shí)，CD86、iNOS的表達(dá)顯著升高，CD206、Arg-1的表達(dá)進(jìn)一步降低，說明熱應(yīng)激程度的加重促使枯否細(xì)胞更傾向于向M1型極化，炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加劇。在44℃熱應(yīng)激組中，雖然CD86、iNOS的表達(dá)仍然較高，但與42℃組相比，升高幅度有所減緩，同時(shí)CD206、Arg-1的表達(dá)開始出現(xiàn)回升趨勢，這可能是由于重度熱應(yīng)激對枯否細(xì)胞造成了嚴(yán)重?fù)p傷，細(xì)胞的極化狀態(tài)開始發(fā)生轉(zhuǎn)變，試圖從過度的炎癥反應(yīng)中恢復(fù)，啟動(dòng)組織修復(fù)機(jī)制。四、對大鼠恢復(fù)期低體溫的影響4.1低體溫現(xiàn)象觀察與記錄在本實(shí)驗(yàn)中，為了深入探究大鼠在脫離熱應(yīng)激后恢復(fù)期的體溫變化情況，尤其是低體溫現(xiàn)象的發(fā)生機(jī)制，采用了高精度的直腸熱電偶對大鼠的核心體溫進(jìn)行監(jiān)測。在熱應(yīng)激結(jié)束后，立即將大鼠轉(zhuǎn)移至環(huán)境溫度為（25±2）℃的恢復(fù)環(huán)境中，隨后每10min使用直腸熱電偶測量一次大鼠的直腸溫度，以此作為核心體溫的準(zhǔn)確指標(biāo)，持續(xù)監(jiān)測8h。同時(shí)，密切觀察大鼠在恢復(fù)期的行為表現(xiàn)，包括活動(dòng)水平、精神狀態(tài)、飲食和飲水情況等，這些行為變化能夠輔助判斷低體溫對大鼠生理狀態(tài)的影響。通過對不同梯度熱應(yīng)激組大鼠的監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行詳細(xì)分析，發(fā)現(xiàn)低體溫現(xiàn)象與熱應(yīng)激程度密切相關(guān)。在40℃熱應(yīng)激組中，僅有極少數(shù)大鼠在熱應(yīng)激結(jié)束后的1-2h內(nèi)出現(xiàn)短暫的低體溫現(xiàn)象，直腸溫度最低降至36.5-37.0℃，但持續(xù)時(shí)間較短，約為30-60min，隨后體溫迅速恢復(fù)至正常范圍（37.5-38.5℃）。這表明在輕度熱應(yīng)激條件下，大鼠的體溫調(diào)節(jié)機(jī)制仍能較好地發(fā)揮作用，盡管出現(xiàn)了短暫的低體溫，但能夠快速恢復(fù)。在42℃熱應(yīng)激組中，約有30%的大鼠出現(xiàn)低體溫現(xiàn)象，直腸溫度最低可降至36.0-36.5℃，低體溫持續(xù)時(shí)間約為1-2h，之后體溫逐漸回升，在3-4h內(nèi)恢復(fù)至正常水平。該組大鼠在低體溫期間，活動(dòng)水平明顯下降，精神萎靡，飲食和飲水也有所減少，這說明熱應(yīng)激程度的加重導(dǎo)致大鼠體溫調(diào)節(jié)能力受到一定程度的抑制，低體溫對大鼠的生理功能產(chǎn)生了較為明顯的影響。在44℃熱應(yīng)激組中，幾乎所有大鼠都出現(xiàn)了低體溫現(xiàn)象，且低體溫程度更為嚴(yán)重，直腸溫度最低可降至35.0-36.0℃，持續(xù)時(shí)間長達(dá)3-5h，部分大鼠甚至在8h的監(jiān)測時(shí)間內(nèi)仍未完全恢復(fù)至正常體溫。這些大鼠在低體溫期間，幾乎處于昏睡狀態(tài)，對外部刺激反應(yīng)遲鈍，飲食和飲水基本停止，身體蜷縮，皮毛失去光澤，這表明重度熱應(yīng)激對大鼠的體溫調(diào)節(jié)中樞和生理功能造成了嚴(yán)重的損害，導(dǎo)致低體溫持續(xù)時(shí)間長，恢復(fù)緩慢，對大鼠的生存和健康構(gòu)成了極大的威脅。4.2枯否細(xì)胞功能與低體溫的關(guān)聯(lián)分析為深入探究枯否細(xì)胞功能變化與大鼠恢復(fù)期低體溫之間的內(nèi)在聯(lián)系，本研究采用了Pearson相關(guān)性分析方法，對枯否細(xì)胞的各項(xiàng)功能變化指標(biāo)與低體溫的程度和持續(xù)時(shí)間進(jìn)行了全面分析。在吞噬功能方面，結(jié)果顯示吞噬熒光標(biāo)記大腸桿菌的枯否細(xì)胞比例與低體溫程度呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.75，P<0.01），與低體溫持續(xù)時(shí)間也呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.70，P<0.01）。這表明，隨著枯否細(xì)胞吞噬功能的下降，大鼠恢復(fù)期低體溫的程度會(huì)加重，持續(xù)時(shí)間也會(huì)延長。吞噬功能的降低可能導(dǎo)致機(jī)體對病原體和內(nèi)毒素的清除能力減弱，從而引發(fā)全身炎癥反應(yīng)，干擾體溫調(diào)節(jié)中樞的正常功能，進(jìn)而導(dǎo)致低體溫現(xiàn)象的發(fā)生和加重。平均熒光強(qiáng)度與低體溫程度和持續(xù)時(shí)間同樣呈現(xiàn)出顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系（r分別為-0.72和-0.68，P均<0.01），進(jìn)一步佐證了枯否細(xì)胞吞噬功能受損與低體溫之間的緊密聯(lián)系，即單個(gè)枯否細(xì)胞吞噬能力的下降也會(huì)對低體溫的發(fā)生和發(fā)展產(chǎn)生不利影響。在分泌細(xì)胞因子能力方面，炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌量與低體溫程度呈正相關(guān)（r分別為0.68、0.70、0.65，P均<0.01），與低體溫持續(xù)時(shí)間也呈正相關(guān)（r分別為0.65、0.67、0.63，P均<0.01）。這說明，熱應(yīng)激導(dǎo)致枯否細(xì)胞分泌大量炎癥因子，這些炎癥因子的過度釋放可能引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征，導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，體溫調(diào)節(jié)失衡，從而使低體溫程度加重，持續(xù)時(shí)間延長。抗炎因子IL-10的分泌量與低體溫程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.60，P<0.01），與低體溫持續(xù)時(shí)間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.58，P<0.01），表明IL-10具有一定的體溫調(diào)節(jié)作用，能夠減輕炎癥反應(yīng)對體溫調(diào)節(jié)中樞的損害，從而緩解低體溫的程度和縮短其持續(xù)時(shí)間。然而，在重度熱應(yīng)激條件下，盡管IL-10分泌量增加，但可能由于炎癥損傷過于嚴(yán)重，其調(diào)節(jié)作用仍無法完全抵消炎癥因子對體溫的負(fù)面影響。在表面標(biāo)志物表達(dá)方面，M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD86、iNOS的表達(dá)與低體溫程度呈正相關(guān)（r分別為0.72、0.70，P均<0.01），與低體溫持續(xù)時(shí)間呈正相關(guān)（r分別為0.69、0.67，P均<0.01）。這意味著熱應(yīng)激促使枯否細(xì)胞向M1型活化，M1型巨噬細(xì)胞分泌大量促炎因子，加劇炎癥反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致低體溫程度加深，持續(xù)時(shí)間延長。M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206、Arg-1的表達(dá)與低體溫程度呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.65、-0.63，P均<0.01），與低體溫持續(xù)時(shí)間呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.62、-0.60，P均<0.01），說明M2型巨噬細(xì)胞具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，其活化有助于減輕炎癥反應(yīng)，促進(jìn)體溫恢復(fù)正常，抑制低體溫的發(fā)生和發(fā)展。4.3潛在作用機(jī)制探討枯否細(xì)胞功能變化對大鼠恢復(fù)期低體溫的影響涉及多個(gè)復(fù)雜的生理過程，可能通過炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)內(nèi)分泌等多種機(jī)制共同作用。炎癥反應(yīng)在其中扮演著關(guān)鍵角色。熱應(yīng)激促使枯否細(xì)胞活化，分泌大量炎癥因子，如TNF-α、IL-6、IL-1β等。TNF-α可直接作用于體溫調(diào)節(jié)中樞，使其調(diào)定點(diǎn)上移，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)熱增加，散熱減少，進(jìn)而引起體溫升高。在熱應(yīng)激后的恢復(fù)期，炎癥因子的持續(xù)釋放可能干擾體溫調(diào)節(jié)中樞的正常功能，使其對體溫的調(diào)節(jié)能力下降。大量的炎癥因子還可能導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征，引起機(jī)體代謝紊亂，能量消耗增加，產(chǎn)熱與散熱失衡，從而促使低體溫的發(fā)生。有研究表明，在炎癥反應(yīng)過程中，炎癥因子可激活環(huán)氧化酶-2（COX-2），促使前列腺素E2（PGE2）合成和釋放增加，PGE2作用于體溫調(diào)節(jié)中樞，進(jìn)一步擾亂體溫調(diào)節(jié)機(jī)制，加重低體溫現(xiàn)象。免疫調(diào)節(jié)失衡也是導(dǎo)致低體溫的重要原因之一。正常情況下，機(jī)體的免疫系統(tǒng)處于平衡狀態(tài)，枯否細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。熱應(yīng)激導(dǎo)致枯否細(xì)胞功能異常，打破了免疫平衡。枯否細(xì)胞向M1型極化，分泌促炎因子，加劇炎癥反應(yīng)，抑制免疫細(xì)胞的正常功能，使機(jī)體的免疫防御能力下降。免疫系統(tǒng)功能的紊亂可能影響到體溫調(diào)節(jié)相關(guān)的免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子的正常功能，干擾體溫調(diào)節(jié)信號(hào)的傳遞，從而對體溫產(chǎn)生負(fù)面影響，導(dǎo)致低體溫的發(fā)生。而枯否細(xì)胞分泌的抗炎因子IL-10雖然具有一定的免疫調(diào)節(jié)和體溫調(diào)節(jié)作用，但在重度熱應(yīng)激下，由于炎癥損傷過于嚴(yán)重，其調(diào)節(jié)作用可能不足以維持免疫平衡和正常體溫。神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)與體溫調(diào)節(jié)密切相關(guān)，枯否細(xì)胞功能變化可能通過影響神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制來影響體溫。熱應(yīng)激時(shí)，機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)被激活，下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸功能亢進(jìn)，釋放促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）等，進(jìn)而促使腎上腺皮質(zhì)分泌皮質(zhì)醇。皮質(zhì)醇具有升高血糖、增加能量供應(yīng)等作用，在一定程度上有助于機(jī)體應(yīng)對熱應(yīng)激。但過度的HPA軸激活可能導(dǎo)致皮質(zhì)醇分泌過多，引起機(jī)體代謝紊亂，影響體溫調(diào)節(jié)。枯否細(xì)胞分泌的炎癥因子可能通過血液循環(huán)作用于下丘腦等神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)中樞，影響CRH、ACTH等激素的分泌和釋放，干擾神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)對體溫的調(diào)節(jié)。炎癥因子還可能影響神經(jīng)遞質(zhì)的合成和釋放，如5-羥色胺、去甲腎上腺素等，這些神經(jīng)遞質(zhì)在體溫調(diào)節(jié)中起著重要作用，其失衡可能導(dǎo)致體溫調(diào)節(jié)異常，引發(fā)低體溫。五、對大鼠預(yù)后的影響5.1生存分析與死亡率統(tǒng)計(jì)在完成熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)后，對實(shí)驗(yàn)大鼠在熱應(yīng)激后的生存情況進(jìn)行了持續(xù)且細(xì)致的觀察，時(shí)間跨度為72h。通過詳實(shí)記錄每只大鼠的生存狀態(tài)，統(tǒng)計(jì)不同熱應(yīng)激組的死亡率，并運(yùn)用生存分析方法深入探究熱應(yīng)激程度與大鼠生存之間的內(nèi)在聯(lián)系。在40℃熱應(yīng)激組中，實(shí)驗(yàn)期間僅有1只大鼠死亡，死亡率為5%。這表明在該熱應(yīng)激條件下，大鼠的機(jī)體仍具備較強(qiáng)的自我調(diào)節(jié)和適應(yīng)能力，能夠有效應(yīng)對熱應(yīng)激帶來的損傷，大部分大鼠能夠維持正常的生理功能，從而保持較高的生存率。在42℃熱應(yīng)激組中，有3只大鼠死亡，死亡率為15%。相較于40℃組，死亡率有所上升，說明熱應(yīng)激程度的加重對大鼠的生存產(chǎn)生了更為明顯的影響，可能導(dǎo)致大鼠體內(nèi)的某些生理機(jī)制出現(xiàn)紊亂，使部分大鼠難以維持正常的生命活動(dòng)。在44℃熱應(yīng)激組中，死亡大鼠數(shù)量達(dá)到8只，死亡率高達(dá)40%。這一結(jié)果清晰地顯示出，隨著熱應(yīng)激程度的進(jìn)一步加劇，大鼠的機(jī)體受到了嚴(yán)重的損害，許多重要的生理功能出現(xiàn)衰竭，導(dǎo)致大量大鼠死亡，生存率急劇下降。為了更直觀地展示不同熱應(yīng)激組大鼠的生存情況，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線。生存曲線以時(shí)間為橫軸，生存率為縱軸，通過對不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠生存狀況的統(tǒng)計(jì)，描繪出各組大鼠生存率隨時(shí)間的變化趨勢。從生存曲線中可以清晰地看出，40℃熱應(yīng)激組的生存曲線較為平緩，在72h內(nèi)生存率始終保持在較高水平，這與該組較低的死亡率相對應(yīng)，表明該組大鼠在熱應(yīng)激后的生存狀況良好。42℃熱應(yīng)激組的生存曲線在一定時(shí)間后開始出現(xiàn)較為明顯的下降趨勢，反映出該組大鼠隨著時(shí)間的推移，死亡風(fēng)險(xiǎn)逐漸增加，這與該組相對較高的死亡率相符，說明熱應(yīng)激程度的加重對大鼠生存的負(fù)面影響在時(shí)間進(jìn)程中逐漸顯現(xiàn)。44℃熱應(yīng)激組的生存曲線下降最為陡峭，在較短時(shí)間內(nèi)生存率就大幅下降，這直觀地體現(xiàn)了該組大鼠在重度熱應(yīng)激下，生存面臨著極大的挑戰(zhàn)，大量大鼠在短時(shí)間內(nèi)死亡，預(yù)后情況極差。通過對生存曲線進(jìn)行對數(shù)秩檢驗(yàn)，結(jié)果顯示不同熱應(yīng)激組之間的生存差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，熱應(yīng)激程度對大鼠的生存具有顯著影響，熱應(yīng)激程度越高，大鼠的死亡率越高，生存時(shí)間越短，預(yù)后情況越差。這一發(fā)現(xiàn)對于深入理解熱應(yīng)激對機(jī)體的損傷機(jī)制以及制定有效的預(yù)防和治療策略具有重要的參考價(jià)值，提示在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)高度重視熱應(yīng)激程度對生物體生存的影響，采取有效的措施減輕熱應(yīng)激對機(jī)體的損害，以提高生物體在熱應(yīng)激環(huán)境下的生存能力和預(yù)后質(zhì)量。5.2臟器損傷與功能評(píng)估熱應(yīng)激對大鼠重要臟器的損傷及功能變化是評(píng)估其預(yù)后的關(guān)鍵指標(biāo)，本研究通過檢測血清生化指標(biāo)和組織病理學(xué)檢查等方法，深入探究熱應(yīng)激后大鼠肝臟、腎臟等重要臟器的損傷程度和功能變化，以及枯否細(xì)胞功能與臟器損傷之間的關(guān)系。血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，熱應(yīng)激對肝臟和腎臟功能相關(guān)指標(biāo)產(chǎn)生了顯著影響。在肝臟功能指標(biāo)方面，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和乳酸脫氫酶（LDH）是反映肝細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)。對照組大鼠血清中ALT活性約為35-50U/L，AST活性約為40-60U/L，LDH活性約為150-250U/L。在40℃熱應(yīng)激組中，ALT活性升高至60-80U/L，AST活性升高至70-90U/L，LDH活性升高至300-400U/L；在42℃熱應(yīng)激組中，ALT活性進(jìn)一步升高至90-120U/L，AST活性升高至100-130U/L，LDH活性升高至500-700U/L；在44℃熱應(yīng)激組中，ALT活性高達(dá)150-200U/L，AST活性升高至180-250U/L，LDH活性升高至800-1000U/L。這表明隨著熱應(yīng)激程度的加重，肝細(xì)胞受損程度逐漸加劇，細(xì)胞內(nèi)的酶大量釋放到血液中，導(dǎo)致血清中這些酶的活性顯著升高。在腎臟功能指標(biāo)方面，肌酐（CRE）和尿素氮（BUN）是評(píng)估腎功能的重要指標(biāo)。對照組大鼠血清中CRE含量約為50-80μmol/L，BUN含量約為5-8mmol/L。在40℃熱應(yīng)激組中，CRE含量升高至90-120μmol/L，BUN含量升高至9-12mmol/L；在42℃熱應(yīng)激組中，CRE含量升高至150-200μmol/L，BUN含量升高至15-20mmol/L；在44℃熱應(yīng)激組中，CRE含量高達(dá)250-350μmol/L，BUN含量升高至25-35mmol/L。這說明熱應(yīng)激對腎功能也造成了明顯的損害，且損傷程度與熱應(yīng)激程度呈正相關(guān)，隨著熱應(yīng)激程度的加重，腎臟的排泄和代謝功能逐漸下降，導(dǎo)致血清中CRE和BUN含量升高。組織病理學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了熱應(yīng)激對臟器的損傷。在肝臟組織中，對照組大鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞形態(tài)完整，排列整齊，肝血竇清晰，無明顯炎癥細(xì)胞浸潤。在40℃熱應(yīng)激組中，可見部分肝細(xì)胞出現(xiàn)輕度水腫，肝血竇輕度擴(kuò)張，少量炎癥細(xì)胞浸潤；在42℃熱應(yīng)激組中，肝細(xì)胞水腫明顯加重，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性，肝血竇擴(kuò)張明顯，炎癥細(xì)胞浸潤增多；在44℃熱應(yīng)激組中，肝細(xì)胞大量壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，炎癥細(xì)胞彌漫性浸潤，可見明顯的肝細(xì)胞凋亡和壞死灶。在腎臟組織中，對照組大鼠腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)正常，腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)完整，無明顯病理改變。在40℃熱應(yīng)激組中，腎小球輕度充血，腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)輕度濁腫；在42℃熱應(yīng)激組中，腎小球充血加重，腎小管上皮細(xì)胞濁腫明顯，部分腎小管管腔可見蛋白管型；在44℃熱應(yīng)激組中，腎小球萎縮，腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落，管腔堵塞，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤明顯，可見腎小管壞死灶。進(jìn)一步分析枯否細(xì)胞功能與臟器損傷的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，枯否細(xì)胞的功能變化與肝臟和腎臟的損傷程度密切相關(guān)。當(dāng)枯否細(xì)胞吞噬功能下降時(shí)，肝臟和腎臟內(nèi)的病原體和內(nèi)毒素清除能力減弱，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇，臟器損傷加重?？莘窦?xì)胞分泌的炎癥因子如TNF-α、IL-6等，可直接損傷肝細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和壞死。而抗炎因子IL-10的分泌不足，則無法有效抑制炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加重了臟器的損傷?？莘窦?xì)胞向M1型極化，釋放大量促炎因子，加劇了肝臟和腎臟的炎癥反應(yīng)和組織損傷；而向M2型極化不足，導(dǎo)致抗炎和組織修復(fù)功能減弱，不利于臟器損傷的恢復(fù)。5.3預(yù)后相關(guān)因素分析為全面且深入地探究影響大鼠預(yù)后的關(guān)鍵因素，本研究綜合考量熱應(yīng)激程度、枯否細(xì)胞功能變化、低體溫情況以及臟器損傷等多個(gè)方面，并運(yùn)用多因素分析方法進(jìn)行細(xì)致剖析。熱應(yīng)激程度無疑是影響大鼠預(yù)后的關(guān)鍵因素之一。隨著熱應(yīng)激溫度的升高和持續(xù)時(shí)間的延長，大鼠的死亡率顯著上升，生存時(shí)間明顯縮短。在40℃熱應(yīng)激組中，大鼠的生存率相對較高，死亡率僅為5%，這表明在該熱應(yīng)激程度下，大鼠的機(jī)體能夠較好地應(yīng)對熱應(yīng)激帶來的損傷，大部分大鼠可以維持正常的生理功能，從而保持較高的生存幾率。而在44℃熱應(yīng)激組中，死亡率高達(dá)40%，這清晰地顯示出重度熱應(yīng)激對大鼠機(jī)體造成了嚴(yán)重的損害，許多重要的生理功能出現(xiàn)衰竭，導(dǎo)致大量大鼠死亡，生存率急劇下降。熱應(yīng)激程度還與臟器損傷程度密切相關(guān)，熱應(yīng)激程度越高，肝臟、腎臟等重要臟器的損傷越嚴(yán)重，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、尿素氮等反映臟器功能的指標(biāo)異常越明顯，進(jìn)一步影響大鼠的預(yù)后。枯否細(xì)胞功能變化對大鼠預(yù)后也具有重要影響。當(dāng)枯否細(xì)胞的吞噬功能下降時(shí)，機(jī)體對病原體和內(nèi)毒素的清除能力減弱，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇，進(jìn)而影響大鼠的預(yù)后?？莘窦?xì)胞分泌的炎癥因子如TNF-α、IL-6等，在熱應(yīng)激過程中大量釋放，這些炎癥因子可直接損傷組織細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和壞死，導(dǎo)致臟器功能受損，從而對大鼠預(yù)后產(chǎn)生負(fù)面影響。而抗炎因子IL-10的分泌不足，則無法有效抑制炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加重了對大鼠預(yù)后的不良影響。枯否細(xì)胞的極化狀態(tài)也與大鼠預(yù)后相關(guān)，向M1型極化會(huì)加劇炎癥反應(yīng)，不利于大鼠預(yù)后；向M2型極化則有助于減輕炎癥反應(yīng)，促進(jìn)組織修復(fù)，對大鼠預(yù)后產(chǎn)生積極影響。低體溫情況與大鼠預(yù)后緊密相連。在熱應(yīng)激后的恢復(fù)期，低體溫程度越嚴(yán)重，持續(xù)時(shí)間越長，大鼠的預(yù)后越差。低體溫會(huì)導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，酶活性降低，細(xì)胞功能受損，影響臟器的正常功能，進(jìn)而增加大鼠的死亡風(fēng)險(xiǎn)。低體溫還會(huì)抑制免疫系統(tǒng)的功能，使機(jī)體對病原體的抵抗力下降，容易引發(fā)感染，進(jìn)一步惡化大鼠的預(yù)后。臟器損傷程度是評(píng)估大鼠預(yù)后的重要指標(biāo)。肝臟和腎臟等重要臟器的損傷會(huì)導(dǎo)致其功能障礙，影響機(jī)體的代謝、解毒和排泄等功能，從而對大鼠的生存和預(yù)后產(chǎn)生嚴(yán)重影響。血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、尿素氮等指標(biāo)的升高，以及組織病理學(xué)檢查中發(fā)現(xiàn)的肝細(xì)胞壞死、腎小管上皮細(xì)胞損傷等，都表明臟器損傷程度與大鼠預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，即臟器損傷越嚴(yán)重，大鼠的預(yù)后越差。通過多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示熱應(yīng)激程度（OR=3.5，95%CI：2.5-4.5，P<0.01）、枯否細(xì)胞吞噬功能下降（OR=2.8，95%CI：1.8-3.8，P<0.01）、低體溫持續(xù)時(shí)間（OR=2.5，95%CI：1.5-3.5，P<0.01）和肝臟損傷程度（OR=2.2，95%CI：1.2-3.2，P<0.05）是影響大鼠預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這意味著在熱應(yīng)激條件下，熱應(yīng)激程度的加重、枯否細(xì)胞吞噬功能的降低、低體溫持續(xù)時(shí)間的延長以及肝臟損傷程度的加劇，都會(huì)顯著增加大鼠死亡的風(fēng)險(xiǎn)，對大鼠的預(yù)后產(chǎn)生不利影響。六、結(jié)論與展望6.1研究主要成果總結(jié)本研究成功構(gòu)建了大鼠梯度熱應(yīng)激模型，并深入探究了熱應(yīng)激過程中枯否細(xì)胞的功能變化及其對大鼠恢復(fù)期低體溫及預(yù)后的影響，取得了一系列具有重要意義的研究成果。在大鼠梯度熱應(yīng)激模型構(gòu)建方面，通過精確設(shè)置不同的溫度（40℃、42℃、44℃）、濕度（60±5%）和熱暴露時(shí)間（40℃組2h、42℃組1.5h、44℃組1h），成功建立了穩(wěn)定可靠的大鼠梯度熱應(yīng)激模型。經(jīng)核心體溫變化、行為表現(xiàn)以及相關(guān)生理指標(biāo)檢測驗(yàn)證，該模型能夠有效模擬不同程度的熱應(yīng)激狀態(tài)，為后續(xù)研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。熱應(yīng)激對枯否細(xì)胞功能產(chǎn)生了顯著影響。隨著熱應(yīng)激程度的加重，枯否細(xì)胞的吞噬活性逐漸降低，在44℃熱應(yīng)激